人白細胞介素2,IL-2試劑盒說明書

人白細胞介素2（IL-2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書第一部分ELISA簡介ELISA(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay70ELISA或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。第二部分ELISA的樣本實驗準(zhǔn)備在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進行檢測的樣本，及時儲存在4液體類標(biāo)本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右分）上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離20分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右分）中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。20分鐘左右分）。仔細收集上清。培養(yǎng)細胞：檢測細胞內(nèi)的成份時，用稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100/ml20分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的標(biāo)本融化后仍然保持℃的溫度。加入一定量的或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3第三部分ELISA檢測目的本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細胞介素2（IL-2）含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白細胞介素2（IL-2）水平。用純化的人白細胞介素2（IL-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素2（IL-2），再與HRP標(biāo)記的白細胞介素2（IL-2）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素2（IL-2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人白細胞介素2（IL-2）濃度。第四部分試劑盒組成試劑盒組成說明書48T196T1保存封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品（2400pg/ml）0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20濃縮洗滌液(20瓶(30瓶2-8℃保存釋。1200pg/ml5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液600pg/ml4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液300pg/ml3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150pg/ml2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液75pg/ml1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液（504，然后樣品最終稀釋度為5倍。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。溫育：用封板膜封板后置30分鐘。30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用305次，拍干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑。。顯色：每孔先加入顯色劑，再加入顯色劑15分鐘.終止：每孔加終止液（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。波長依序測量各孔的吸光度值。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。第六部分計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。（此圖僅供參第七部分注意事項15-30用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值