血細(xì)胞分析儀的應(yīng)用及形態(tài)學(xué)復(fù)檢

血細(xì)胞分析儀的應(yīng)用及形態(tài)學(xué)復(fù)檢ProgramofUrbanandRuralCounterpartSupportonClinicalLaboratory

TechnologyStandardDevelopmentandTraining2023/1/11城鄉(xiāng)對(duì)口支援臨床檢驗(yàn)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)制定及培訓(xùn)主要內(nèi)容一、血細(xì)胞分析儀發(fā)展簡(jiǎn)史二、血細(xì)胞分析儀檢測(cè)原理三、血細(xì)胞檢驗(yàn)圖形及臨床應(yīng)用四、如何保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性血細(xì)胞形態(tài)學(xué)復(fù)檢血細(xì)胞分析儀性能評(píng)價(jià)及全面質(zhì)量管理血液分析產(chǎn)品的發(fā)展歷程17世紀(jì)列文虎克

原始的顯微鏡

1674年

列文虎克《倫敦皇家學(xué)會(huì)哲學(xué)學(xué)報(bào)》------

第一篇對(duì)紅細(xì)胞的正式記載1855年

發(fā)明了用于計(jì)數(shù)血細(xì)胞的計(jì)數(shù)板

改良Neubauer

計(jì)數(shù)板1879年埃爾利希(德國(guó))發(fā)明活體染色法2023/1/11一、血細(xì)胞分析儀發(fā)展簡(jiǎn)史庫爾特原理血細(xì)胞是相對(duì)不良導(dǎo)體，當(dāng)其懸浮于電解質(zhì)溶液中通過檢測(cè)微孔時(shí)，會(huì)改變微孔內(nèi)外原來恒定的電阻，結(jié)果產(chǎn)生電脈沖。脈沖的大小代表了通過微孔血細(xì)胞的體積大小，脈沖的數(shù)量代表了通過微孔血細(xì)胞的數(shù)量。WallanceH.Coulter20世紀(jì)40年代后期，美國(guó)人庫爾特發(fā)明并申請(qǐng)了粒子計(jì)數(shù)的設(shè)計(jì)專利。2023/1/11基于Coulter原理的血細(xì)胞計(jì)數(shù)在1953年獲得美國(guó)發(fā)明專利同年和他的兄弟約瑟夫（Joseph）開創(chuàng)了自己的公司，并成功的設(shè)計(jì)和制造出了可以計(jì)數(shù)血細(xì)胞的專用儀器，然后開始了在這一領(lǐng)域的商業(yè)運(yùn)作華萊士.庫爾特約瑟夫.庫爾特2023/1/11血細(xì)胞分析儀的發(fā)展歷史

70年代血小板與紅細(xì)胞同時(shí)計(jì)數(shù)80年代，在8項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)上加上紅細(xì)胞指數(shù)、三個(gè)直方圖的報(bào)告，不僅提供是否貧血，且可對(duì)貧血的類型和原因進(jìn)行分析；90年代，將激光、射頻、化學(xué)染色計(jì)數(shù)應(yīng)用于對(duì)細(xì)胞特性的分析，五分類血液分析儀出現(xiàn)并得到廣泛的應(yīng)用VCS原理激光法原理熒光染色法化學(xué)染色法血細(xì)胞分析儀的現(xiàn)狀血常規(guī)檢驗(yàn)多參數(shù)化

有的儀器可以提供40~50種測(cè)量或計(jì)算參數(shù)，有的甚至還整合了免疫化學(xué)參數(shù)，如CD3,CD4等以及C反應(yīng)蛋白水平。多功能合成擴(kuò)展

已經(jīng)不僅僅局限在進(jìn)行常規(guī)血細(xì)胞分析，近年來它增加了許多擴(kuò)展的功能。例如將網(wǎng)織紅細(xì)胞(RET)的計(jì)數(shù)和分析功能加入其中。

檢測(cè)速度的提高

增加了自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)，測(cè)定速度加快，一般可以達(dá)到每小時(shí)80~100個(gè)樣品。血細(xì)胞分析儀產(chǎn)品的系列化和流水線化

2023/1/11數(shù)字化圖像分析或儀器視覺技術(shù)進(jìn)入血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)利用單克隆抗體標(biāo)記技術(shù)提高儀器識(shí)別細(xì)胞能力同機(jī)檢測(cè)血細(xì)胞和血漿內(nèi)化學(xué)或免疫學(xué)指標(biāo)機(jī)內(nèi)“專家診斷系統(tǒng)”的臨床應(yīng)用實(shí)現(xiàn)血細(xì)胞分析儀與標(biāo)本前處理儀器、生化分析儀、免疫分析儀更便捷的全自動(dòng)流水線血細(xì)胞分析儀技術(shù)展望2023/1/11二、血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)原理紅細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)原理白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)原理血紅蛋白檢測(cè)原理2023/1/11platelets（一）紅細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)原理電阻抗法（庫爾特原理）2023/1/11紅細(xì)胞與血小板的檢測(cè)在同一通道，小紅細(xì)胞，細(xì)胞碎片及血小板自身的聚集等對(duì)血小板計(jì)數(shù)及平均血小板體積的影響較大，血小板直方圖能反映這些變化，出現(xiàn)異常血小板直方圖，根據(jù)圖形的變化可了解血小板計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。（大于右側(cè)閾值考慮為紅細(xì)胞）（二）白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)原理白細(xì)胞三分群計(jì)數(shù)原理白細(xì)胞五分類計(jì)數(shù)原理2023/1/11根據(jù)白細(xì)胞體積大小，可初步確認(rèn)細(xì)胞分群第一群（30-90fl）：小細(xì)胞群，主要分布的是淋巴細(xì)胞第二群（90-160fl）：中間細(xì)胞群，主要包括單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞，核左移的各階斷幼稚細(xì)胞或白血病時(shí)白血病細(xì)胞第三群（160fl以上）：大細(xì)胞群，主要是中性粒細(xì)胞白細(xì)胞三分群計(jì)數(shù)原理小細(xì)胞群中間細(xì)胞群大細(xì)胞群2023/1/11儀器測(cè)定的細(xì)胞大小指加入溶血素后的白細(xì)胞大小血濃縮圖片：可見中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞溶血?jiǎng)┨幚砗蟮陌准?xì)胞：白細(xì)胞膜縮于細(xì)胞核上，只能見大，中，小三群細(xì)胞核，淋巴細(xì)胞最小，單核細(xì)胞次之，分葉核粒細(xì)胞最大2023/1/11白細(xì)胞三分群計(jì)數(shù)原理白細(xì)胞經(jīng)特殊溶血素處理后，細(xì)胞失水，各群細(xì)胞體積分布差異增加。分布范圍：35-450fl(256個(gè)通道)白細(xì)胞可以根據(jù)體積大小區(qū)分為三個(gè)群

三分群血細(xì)胞分析儀的缺陷2023/1/11方法學(xué)單一，非特異性檢測(cè)（1）僅分大小，不辨其他特性，相同大小的顆粒易誤計(jì)數(shù)（2）中間細(xì)胞包含了多種細(xì)胞，和成熟WBC分類有很大差異干擾大，異常標(biāo)本的處理能力差（1）MID增多:可能是MONO、EOS、BASO、BLAST增多（2）LYM干擾：PLT、NRBC、FWBC（3）PLT干擾：RBC、PLT本身、FWBC等

（4）異常顆?；蛐盘?hào)的干擾三分類結(jié)果僅為初步結(jié)果，要求我們進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)白細(xì)胞五分類計(jì)數(shù)原理激光與細(xì)胞化學(xué)法容量、電導(dǎo)、光散射法電阻抗與射頻及特殊染色法多角度偏振光散射法流式細(xì)胞術(shù)及核酸熒光染色法2023/1/11流式細(xì)胞技術(shù)、核酸熒光染色技術(shù)待測(cè)血樣稀釋成單個(gè)細(xì)胞懸液，經(jīng)過核酸熒光染色后，在鞘液的約束下，排成單列通過測(cè)量區(qū)的細(xì)胞在垂直入射的激光束照射和激發(fā)下，產(chǎn)生：前向散射光（FSC，主要反映細(xì)胞的大小）側(cè)向散射光（SSC，主要反映細(xì)胞內(nèi)容物的復(fù)雜度）側(cè)向熒光（SFL，主要反映核酸含量的多少）舉例：SysmexXE-2100WBC/BASO通道（白細(xì)胞總數(shù)和嗜堿性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)）SSC（側(cè)向散射光）FSC（前向散射光）酸性溶血素1.紅細(xì)胞溶解2.嗜堿性細(xì)胞固定3.其余白細(xì)胞胞質(zhì)皺縮DIFF通道（白細(xì)胞分類和幼稚粒細(xì)胞定量）正常散點(diǎn)圖異常散點(diǎn)圖紅細(xì)胞溶解，白細(xì)胞膜被打孔，熒光染料染色核酸成分射頻/直流電技術(shù)（RF/DC）電學(xué)法：射頻RF：(核/胞質(zhì)比率）直流電DC:細(xì)胞體積在IMI通道中，紅細(xì)胞、血小板溶解成熟白細(xì)胞膜磷脂多，也溶解主要檢測(cè)：原始細(xì)胞幼稚粒細(xì)胞血小板聚集IMI通道(幼稚髓性細(xì)胞和血小板聚集的檢測(cè)）Ret/PLT-O通道NRBC通道（三）血紅蛋白測(cè)定的原理—分光光度比色光學(xué)比色法原理檢測(cè)物質(zhì)為血紅蛋白衍生物ISCH推薦使用氰化高鐵法（HiCN）吸收峰在540nm氰化血紅蛋白含有氰化物月桂酰硫酸鈉（SLS）血紅蛋白不含氰化物各型號(hào)血細(xì)胞分析儀必須以HiCN值為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行校正2023/1/11血細(xì)胞分布直方圖一種可以顯示細(xì)胞分群情況的圖形橫坐標(biāo)（“X”軸）表示細(xì)胞體積（以fl表示）縱坐標(biāo)（“Y”軸）表示細(xì)胞相對(duì)數(shù)量三、血細(xì)胞檢驗(yàn)圖形及臨床應(yīng)用2023/1/11白細(xì)胞體積分布直方圖紅細(xì)胞體積分布直方圖血小板分布直方圖（一）白細(xì)胞分布直方圖及臨床應(yīng)用白細(xì)胞正常直方圖在35-450fl范圍內(nèi)分析白細(xì)胞的體積根據(jù)體積大小分為三群：小細(xì)胞群、中間細(xì)胞群、大細(xì)胞群出現(xiàn)異常直方圖時(shí)，常伴隨相應(yīng)部位的報(bào)警信號(hào)。2023/1/11小細(xì)胞群中間細(xì)胞群大細(xì)胞群白細(xì)胞直方圖的臨床意義圖形變化決定進(jìn)一步檢查的內(nèi)容

根據(jù)圖形變化，決定是否進(jìn)一步鏡檢，提示在顯微鏡分類時(shí)注意異常細(xì)胞的存在白細(xì)胞直方圖變化無特異性

如中間細(xì)胞群可包括大淋巴細(xì)胞、原始細(xì)胞、幼稚細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞，其中任一細(xì)胞增多，均可使直方圖產(chǎn)生相似的變化2023/1/11

反映某些人為或病理因素干擾白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)※中性粒細(xì)胞增多(x400)中性粒細(xì)胞峰高、面寬WBCLYM%MXD%NEUT%23.8x109/L8.1%7.9%84.0%StabSegLymMonoEoBaso8%77%7%7%1%0%2023/1/11白細(xì)胞分布直方圖及臨床應(yīng)用※淋巴細(xì)胞增多(x1000)StabSegLymphMonoEoBasoAty-Lym4%20%64%4%5%0%3%WBCLYM%MXD%NEUT%7.9x109/L+64.7%15.8%–19.5%2023/1/11※單核細(xì)胞增多(x1000)中部突起StabSegLymphMonoEoBasoAty-Lym8%37%17%36%1%0%1%WBCLYM%MXD%NEUT%7.7x109/LF1*13.2%F2*37.7%49.1%2023/1/11※嗜酸性粒細(xì)胞增多(x1000)中部突起StabSegLymphMonoEoBasoMyAty-Lym1%19%20%9%48%1%1%1%WBCLYM%MXD%NEUT%4.3x109/L18.3%+62.2%–19.5%2023/1/11慢性淋巴細(xì)胞性白血病酷似正常淋巴細(xì)胞增多在60fL處出現(xiàn)明顯尖峰，中間細(xì)胞群和大細(xì)胞群波谷消失骨髓免疫分型確診為B淋巴細(xì)胞白血病2023/1/11慢性粒細(xì)胞性白血病白細(xì)胞三分群消失，出現(xiàn)單一曲線，主峰位于175fL提示出現(xiàn)大量中性和中性幼稚細(xì)胞，分類沒有結(jié)果2023/1/11常見報(bào)警信息報(bào)警提示直方圖異常區(qū)域原因R1淋巴細(xì)胞左側(cè)區(qū)域血小板聚集/巨大血小板/瘧原蟲/有核紅細(xì)胞/不溶解紅細(xì)胞/異常淋巴細(xì)胞R2淋巴和單個(gè)核細(xì)胞之間異常淋巴細(xì)胞/原幼細(xì)胞/漿細(xì)胞/嗜酸性粒細(xì)胞/嗜堿性粒細(xì)胞R3單個(gè)核和粒細(xì)胞間未成熟粒細(xì)胞/嗜酸性粒細(xì)胞/異常細(xì)胞R4粒細(xì)胞右側(cè)區(qū)域粒細(xì)胞增多癥RM多區(qū)異常以上多種原因引起R1R2R4R3ALAMAG2023/1/11報(bào)警信息的功能提高血細(xì)胞分類結(jié)果的準(zhǔn)確性用于篩選血常規(guī)的異常白細(xì)胞分類結(jié)果對(duì)于疑似血液病患者，無論儀器是否有報(bào)警信號(hào)，均應(yīng)作涂片復(fù)檢2023/1/11白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分群的注意事項(xiàng)溶血?jiǎng)┨幚砗蟮陌准?xì)胞直方圖變化

溶血?jiǎng)┨幚砗蟮陌准?xì)胞體積與其自然體積不完全一致，電阻抗法白細(xì)胞直方圖并不能代表其自然狀況，但可以用于判斷白細(xì)胞各亞群的分布情況，作為血涂片顯微鏡檢查前的“初篩”，對(duì)病理標(biāo)本必須經(jīng)顯微鏡檢查確認(rèn)。血細(xì)胞分析儀必須使用配套試劑

不同血細(xì)胞分析儀所采用的稀釋液及溶血?jiǎng)┏煞植煌耆嗤?，?duì)白細(xì)胞膜的作用程度不同，同一份血液標(biāo)本在不同儀器的直方圖形狀有所不同，所以各型號(hào)儀器確定白細(xì)胞“分群”的區(qū)分界限設(shè)置點(diǎn)也不同。不同血細(xì)胞分析儀的直方圖不同

不同廠家不同型號(hào)儀器的白細(xì)胞直方圖是不完全相同的，但各類儀器電阻抗法白細(xì)胞直方圖的病理變化趨勢(shì)是一致的。2023/1/11紅細(xì)胞正常直方圖（二）紅細(xì)胞分布直方圖及臨床應(yīng)用36-360fl范圍內(nèi)分析紅細(xì)胞在直方圖上反映的是生理狀態(tài)下的紅細(xì)胞大小在典型的紅細(xì)胞直方圖可以分兩個(gè)群相關(guān)參數(shù)：MCV、RDW紅細(xì)胞體積發(fā)生變化時(shí)直方圖可左移或右移或出現(xiàn)雙峰2023/1/11紅細(xì)胞主群大細(xì)胞群fl相對(duì)數(shù)量缺鐵性貧血治療前：波峰左移，峰底變寬缺鐵性貧血治療后：雙峰，峰底變寬2023/1/11不同類型貧血時(shí)，紅細(xì)胞體積的變化使紅細(xì)胞體積分布圖形發(fā)生變化，結(jié)合其他參數(shù)對(duì)鑒別診斷頗有價(jià)值。紅細(xì)胞分布直方圖的臨床意義峰左移雙峰小細(xì)胞不均一性貧血輕型β-珠蛋白生成障礙性貧血：波峰左移，峰底基本不變2023/1/11峰左移小細(xì)胞均一性貧血巨幼細(xì)胞性貧血：波峰右移，峰底變寬巨幼細(xì)胞性貧血治療后：可有雙峰，峰底變寬2023/1/11峰右移雙峰大細(xì)胞不均一性貧血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的注意事項(xiàng)含有白細(xì)胞因素,但可以忽略紅細(xì)胞：白細(xì)胞約為750：1病理情況下易產(chǎn)生誤差白細(xì)胞增加明顯貧血嚴(yán)重2023/1/11（三）血小板分布直方圖及臨床應(yīng)用血小板正常直方圖2023/1/112-30fl范圍內(nèi)分析血小板正常呈左偏態(tài)分布，主要集中在2-15fl相關(guān)參數(shù)：PLT,MPV,PCT,PDW血小板直方圖的臨床意義2023/1/11異常血小板直方圖大血小板小紅細(xì)胞聚集的血小板干擾a.正常血小板直方圖；b.大血小板直方圖；c.小血小板直方圖；d、e.聚集的血小板直方圖；f.小紅細(xì)胞干擾的血細(xì)胞直方圖1/11/2023大血小板出現(xiàn)大血小板的血樣，PLT直方圖分布較寬，顯示出大血小板。2023/1/11小紅細(xì)胞干擾血小板計(jì)數(shù)特征：直方圖右側(cè)曲線最低點(diǎn)不與X軸重合，然后又高高抬起，該標(biāo)本紅細(xì)胞直方圖左移，峰底變寬，血涂片上見較多小紅細(xì)胞。2023/1/11小紅細(xì)胞血小板聚集WBC直方圖PLT直方圖血圖片檢查所示，幾十個(gè)血小板凝集在一起的血樣。WBC直方圖Ghost區(qū)和小細(xì)胞區(qū)域之間的鑒別線與直方圖的交點(diǎn)很高（箭頭所示）同時(shí)有WL報(bào)警信號(hào)。PLT直方圖也提示有大顆粒存在。因此無法測(cè)得正確血小板數(shù)目，需重新采血2023/1/11

四、如何保證結(jié)果的準(zhǔn)確性？（一）排除病理性誤差干擾因素（二）血細(xì)胞形態(tài)學(xué)復(fù)檢（三）試劑的合理使用及儀器的規(guī)范使用（四）性能評(píng)價(jià)與質(zhì)量管理2023/1/11常見誤差因素分析白細(xì)胞計(jì)數(shù)的干擾因素

假性白細(xì)胞減少或增多紅細(xì)胞計(jì)數(shù)干擾因素

假性紅細(xì)胞減少或增多血小板計(jì)數(shù)干擾因素

假性血小板減少或增多2023/1/11（一）排除病理性誤差干擾因素白細(xì)胞計(jì)數(shù)的干擾因素白細(xì)胞聚集所致假性白細(xì)胞減少紅細(xì)胞溶血不良所致假性白細(xì)胞增多有核紅細(xì)胞所致假性白細(xì)胞增多2023/1/11紅細(xì)胞溶血不良---假性白細(xì)胞增多處理方法

形態(tài)學(xué)鏡檢2023/1/11典型的紅細(xì)胞溶血不良干擾直方圖在WBC直方圖上，WBC低鑒別線與直方圖曲線交點(diǎn)的位置異常高。同時(shí)有WL報(bào)警信號(hào)，“*”表示W(wǎng)BC數(shù)據(jù)不可信。這種現(xiàn)象在肝疾病患者血中多見。白細(xì)胞直方圖2023/1/11紅細(xì)胞溶血不良的病因和發(fā)病機(jī)制發(fā)病機(jī)制脂類代謝異常紅細(xì)胞膜表面與外周血脂類結(jié)合形成脂質(zhì)顆粒保護(hù)膜紅細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)異常正常濃度的溶血素?zé)o法破壞紅細(xì)胞膜表面病因肝功能低下(肝硬化、肝癌晚期、膽道堵塞)高脂血癥高膽固醇制劑輸液治療過程中異常血紅蛋白癥(Hgb-S癥、Hgb-C癥)2023/1/11有核紅細(xì)胞的干擾---假性白細(xì)胞增多WBC：56.1X109/L2023/1/11如何排除NRBC對(duì)白細(xì)胞檢測(cè)的干擾形態(tài)學(xué)鏡檢高端儀器2023/1/11有核紅細(xì)胞增多的原因血液學(xué)疾?。杭毙运杓?xì)胞白血病急性紅白血病急性淋巴細(xì)胞白血病慢性粒細(xì)胞白血病慢性淋巴細(xì)胞白血病多發(fā)性骨髓瘤骨髓增生異常綜合征惡性淋巴瘤骨髓轉(zhuǎn)移癌骨髓纖維化原發(fā)性血小板增多癥血液非腫瘤性疾病

缺鐵性貧血巨幼細(xì)胞貧血溶血性貧血增生性貧血再生障礙性貧血原發(fā)性血小板減少性紫癜感染性疾病原發(fā)性脾亢

2023/1/11紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的干擾因素紅細(xì)胞冷凝集所致假性紅細(xì)胞減少巨大血小板所致假性紅細(xì)胞增多2023/1/11紅細(xì)胞凝集---假性紅細(xì)胞減少RBCHGBHCTMCVMCHMCHCRDW2.231440.249111.764.65780.254×1012/Lg/LfLpgg/L處理方法：1.加溫至37OC2.離心洗滌紅細(xì)胞（用等量稀釋液置換血漿或上清液）2023/1/11紅細(xì)胞冷凝集---假性紅細(xì)胞減少冷凝集素綜合癥在31℃以下自身紅細(xì)胞抗原發(fā)生可逆性凝集病因白血病、惡性淋巴瘤或全身性紅斑狼瘡肺炎支原體屬感染傳染性單核細(xì)胞增多癥血吸蟲病、絲蟲病、瘧疾肝硬化、非典型性肺炎2023/1/11血小板計(jì)數(shù)的干擾因素假性血小板減少樣品采集環(huán)節(jié)中的血小板聚集EDTA誘導(dǎo)的血小板聚集血小板衛(wèi)星現(xiàn)象巨大血小板假性血小板增多紅、白細(xì)胞碎片小紅細(xì)胞2023/1/11PLT:51×109/LEDTA誘導(dǎo)血小板聚集---假性血小板減少2023/1/11EDTA誘導(dǎo)血小板聚集---假性血小板減少發(fā)病率0.07%~0.11%誘因健康人自身免疫病、慢性炎癥、病毒或細(xì)菌感染腫瘤潛在的誤診風(fēng)險(xiǎn)高預(yù)防性血小板輸血的醫(yī)學(xué)決定水平血小板計(jì)數(shù)為20×109/L誤診為ITP或TTP2023/1/11EDTA誘導(dǎo)血小板聚集的發(fā)病機(jī)制血小板糖膜改變，血小板膜內(nèi)隱匿性抗原暴露血漿中自身抗體與隱匿性抗原形成復(fù)合物激活細(xì)胞膜中的磷酯酶血小板膜水解并釋放血小板活性物質(zhì)AA、ADP、5-TH、膠原、凝血酶原等血小板纖維蛋白原受體被活化血小板與纖維蛋白原受體結(jié)合后聚集成團(tuán)出現(xiàn)血小板假性減少2023/1/11EDTA誘導(dǎo)血小板聚集的處理方法光學(xué)顯微鏡直接鏡檢采用血小板稀釋液進(jìn)行預(yù)稀釋瑞氏染色更換抗凝劑重新抽血檢測(cè)枸櫞酸鈉肝素鈉巨大血小板---假性血小板減少PLT-I32[10^9/L]PLT-O54[10^9/L]2023/1/11巨大血小板的處理辦法五分類血細(xì)胞分析儀人工計(jì)數(shù)形態(tài)學(xué)確認(rèn)同血小板聚集2023/1/11紅、白細(xì)胞碎片的干擾---假性血小板增多PLT-I16[10^9/L]PLT-O6[10^9/L]2023/1/11紅、白細(xì)胞碎片產(chǎn)生的原因紅細(xì)胞碎片彌散性血管內(nèi)凝血微血管病性溶血性貧血心源性溶血性貧血其它化學(xué)中毒、腎功能衰竭血栓性血小板減少性紫癜和化療白細(xì)胞碎片AML、淋巴瘤、嚴(yán)重感染、化療2023/1/11如何制定形態(tài)學(xué)復(fù)檢規(guī)則（一）以國(guó)際實(shí)驗(yàn)血液學(xué)發(fā)表的“41條”規(guī)則為依據(jù)LabHematol2005,11:83中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志2008,31:752復(fù)檢的絕對(duì)條件報(bào)警提示未成熟細(xì)胞原始細(xì)胞有核紅細(xì)胞儀器分群結(jié)果異常確診為或疑似血液惡性腫瘤者復(fù)檢的可調(diào)節(jié)條件血細(xì)胞計(jì)數(shù)超出參考范圍（二）血細(xì)胞形態(tài)學(xué)復(fù)檢2023/1/11如何制定形態(tài)學(xué)復(fù)檢規(guī)則（二）涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)國(guó)際血液學(xué)復(fù)檢專家組LabHematol2005,11:83中國(guó)血液學(xué)復(fù)檢專家組中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志2008,31:752涂片鏡檢要求由2名人員進(jìn)行雙盲檢測(cè)計(jì)數(shù)結(jié)果均值形態(tài)結(jié)果任何1名人員發(fā)現(xiàn)陽性即判斷為鏡檢陽性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析2023/1/11如何制定形態(tài)學(xué)復(fù)檢規(guī)則（三）陽性率假陽性率陰性率假陰性率符合率復(fù)檢率14.23%23.71%59.61%2.45%73.84%37.94%①首先參考“41條”規(guī)則②降低復(fù)檢率從降低假陽性率入手不能單純追求復(fù)檢率降低③控制漏診率在臨床可接受水平（<5%）防止降低假陽性率導(dǎo)致的假陰性率即漏診率升高④不能改變復(fù)檢的絕對(duì)條件2023/1/11病例1——單核細(xì)胞增多男，23歲感冒9天WBCNEUTLYMPHMONOEOBASO&6.62【109/L】&3.82【109/L】57.7【%】&1.25【109/L】18.9-【%】1.24+【109/L】18.7+【%】0.02*【109/L】0.3*【%】0.06*【109/L】0.9*【%】分析儀測(cè)定結(jié)果：報(bào)警提示：MonocytosisImmatureGran?LeftShift?復(fù)檢規(guī)則：24.懷疑性報(bào)警:不成熟粒細(xì)胞？34.左移報(bào)警？DIFF散點(diǎn)圖上，單核細(xì)胞區(qū)域內(nèi)可出現(xiàn)許多綠點(diǎn)（紅色箭頭示），提示單核細(xì)胞增多。散點(diǎn)分布在中性粒細(xì)胞區(qū)域上方（綠色箭頭示），提示出現(xiàn)幼稚粒細(xì)胞。IMI散點(diǎn)圖上的紅點(diǎn)也證實(shí)這一結(jié)果。2023/1/11StabSegLymphMonoEoBasoMyeloMetaAty-Lym5.5【%】48.5【%】23.5【%】17.5【%】0.0【%】0.0【%】3.5【%】0.5【%】1.0【%】涂片鏡檢分類結(jié)果：?jiǎn)魏思?xì)胞2023/1/11核左移中幼粒2023/1/11病例2——嗜酸性粒細(xì)胞增多女，20歲蕁麻疹WBCPLTPDWMPVP-LCRPCTNEUTLYMPHMONOEOBASO28.67*【109/L】249*【109/L】10.8*【fl】10.0*【fl】24.5*【%】0.25*【%】2.19*【109/L】2.58*【109/L】0.39+【109/L】23.44*【109/L】0.07*【109/L】分析儀測(cè)定結(jié)果：報(bào)警提示：EosinophiliaLeukocytosisPLTClumps?DIFF散點(diǎn)圖上，嗜酸性粒細(xì)胞區(qū)域內(nèi)可出現(xiàn)許多紅點(diǎn)點(diǎn)（紅色箭頭示），提示嗜酸性粒細(xì)胞增多。復(fù)檢規(guī)則：20.嗜酸粒細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)：>2.0X109/L26.WBC結(jié)果不可信報(bào)警：*30.PLT聚集報(bào)警？2023/1/11StabSegLymphMonoEoBasoPLTClumps(+)0.0【%】8.5【%】11.5【%】1.0【%】78.5【%】0.5【%】涂片鏡檢分類結(jié)果：嗜酸性粒細(xì)胞血小板凝集2023/1/11嗜酸性桿狀核粒細(xì)胞嗜酸性晚幼粒細(xì)胞2023/1/11病例3——ALL（L1）女，15歲患者自覺食欲減退，8月初發(fā)熱，約2天后退熱。8月15日就診入院。急性淋巴細(xì)胞白血?。↙1）WBCNEUTLYMPHMONOEOBASO&194.4@【109/L】----【109/L】----【%】----【109/L】----【%】----【109/L】----【%】0.20*【109/L】0.1*【%】----【109/L】----【%】分析儀測(cè)定結(jié)果：DIFF散點(diǎn)圖上，散點(diǎn)分布在淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞區(qū)域形成單個(gè)集落（紅色箭頭示），提示出現(xiàn)原始細(xì)胞。散點(diǎn)分布于側(cè)向熒光強(qiáng)度高的區(qū)域，提示出現(xiàn)異型淋巴細(xì)胞（綠色箭頭示）。在IMI散點(diǎn)圖上，可見紅點(diǎn)，提示出現(xiàn)原始細(xì)胞。在NRBC散點(diǎn)圖上，可見粉紅點(diǎn)(藍(lán)色箭頭示），為NRBC。2023/1/11病例3——ALL（L1）報(bào)警提示：WBCAbn

ScattergramLeukocytosisImmatureGran?LeftShit?Blasts?AnemiaStabSegLymphMonoEoBasoBlastAty-Ly0.5【%】0.5【%】4.5【%】0.5【%】0.0【%】0.0【%】93.0【%】1.0【%】涂片鏡檢分類結(jié)果：原始淋巴細(xì)胞第一型（L1）原始和幼稚淋巴細(xì)胞以小細(xì)胞（直徑＜12um為主，染色質(zhì)較粗，結(jié)構(gòu)較一致，核仁少而小，不清楚，胞漿少，輕或中度嗜堿性。2023/1/11復(fù)檢規(guī)則：2.WBC超出界值16.無白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果24.懷疑性報(bào)警:不成熟粒細(xì)胞？34.左移報(bào)警？37.原始細(xì)胞報(bào)警？異型淋巴細(xì)胞2023/1/11過氧化物酶染色（陰性）過氧化物酶染色（粒細(xì)胞陽性）

（三）試劑的合理使用及儀器的規(guī)范使用試劑的合理使用（直接影響脈沖大?。┍M可能使用配套試劑儀器的規(guī)范使用避免堵孔2023/1/11采血時(shí)混入纖維絲采血不暢有小凝塊蛋白沉淀未及時(shí)清洗標(biāo)本未加蓋落入灰塵水分蒸發(fā)形成結(jié)晶堵孔原因不用棉花球擦拭確保采血順利及時(shí)清洗儀器注意工作環(huán)境/樣本加蓋去除結(jié)晶預(yù)防方法避免堵孔（四）血細(xì)胞分析儀性能評(píng)價(jià)及質(zhì)量管理質(zhì)量管理分析前質(zhì)量管理分析中質(zhì)量管理分析后質(zhì)量管理2023/1/11分析前的質(zhì)量管理做好操作人員上崗前的培訓(xùn)。按照儀器說明書的要求，選擇合適的儀器安裝環(huán)境。做好儀器的鑒定和校正。

-----血細(xì)胞分析儀性能驗(yàn)證做好儀器的管理工作。標(biāo)本的采集和運(yùn)送。注意受檢者生理狀態(tài)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。2023/1/11血細(xì)胞分析儀性能驗(yàn)證內(nèi)容精密度攜帶污染率線性范圍可比性白細(xì)胞分類的鑒定性能評(píng)價(jià)

血細(xì)胞分析儀安裝后或每次維修后，必須按照ICSH公布的血細(xì)胞分析儀評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)分析儀的技術(shù)性能進(jìn)行測(cè)試與評(píng)價(jià)，這對(duì)充分發(fā)揮血細(xì)胞分析儀的正常作用、為臨床提供準(zhǔn)確檢驗(yàn)信息起重要作用。2023/1/11精密度實(shí)驗(yàn)方案根據(jù)NCCLSEP15-A文件取低、中、高三個(gè)水平的新鮮血，連續(xù)重復(fù)測(cè)定11次，棄掉第1次結(jié)果采用后面10個(gè)結(jié)果計(jì)算CV，SD要求CV符合衛(wèi)生部臨檢中心規(guī)定參數(shù)WBCRBCHGBHCTMCVPLT判定標(biāo)準(zhǔn)CV≤3.00%1.50%1.50%1.50%1.50%4.00%2023/1/11精密度實(shí)例分析參數(shù)WBCRBCHGBHCTMCVPLT單位ⅹ109/L1012/Lg/LL/LfLⅹ109/L13.803.118631.267.813523.823.088631.367.312733.773.118630.867.212943.873.088731.166.912953.943.078630.966.713063.843.108731.066.713073.693.138731.066.513383.943.138830.966.512993.913.158831.066.2130103.853.168831.266.1135MEAN3.843.1186.931.066.8130.7SD0.0780.0300.8760.1580.5242.710CV2.04%0.98%1.01%0.51%0.78%2.07%標(biāo)準(zhǔn)CV≤3.0%1.5%1.5%1.5%1.5%4.0%結(jié)論合格合格合格合格合格合格不合格考慮血量是否充足、混勻；標(biāo)本是否新鮮合格；試劑和儀器是否穩(wěn)定攜帶污染率實(shí)驗(yàn)方案取高濃度血液樣本，混合均勻后連續(xù)測(cè)定三次，測(cè)定值分別為H1、H2、H3再取低濃度血液樣本，連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為L(zhǎng)1、L2、L3按公式計(jì)算攜帶污染率攜帶污染率=（L1－L3）/（H3－L3）×100%要求CV符合衛(wèi)生部臨檢中心規(guī)定參數(shù)WBCRBCHGBHCTPLT要求1.0%1.0%1.0%1.0%1.0%2023/1/11攜帶污染率實(shí)例分析試驗(yàn)材料新鮮血

參數(shù)WBCRBCHGBHCTPLT單位ⅹ109/Lⅹ1012/Lg/LL/Lⅹ109/LH116.265.3517449.6499H216.575.3117449.3506H315.975.3617449.7503L12.832.295717.558L22.962.315717.762L32.922.295717.562攜帶污染率-0.67%0.00%0.00%0.00%-0.91%要求1.0%1.0%1.0%1.0%1.0%結(jié)論合格合格合格合格合格不合格在排除上述影響因素后，考慮儀器本身問題可能性大2023/1/11線性范圍實(shí)驗(yàn)方案選取一份接近預(yù)期上限的高值全血樣本（H）分別按100%、80%、60%、40%、20%的比例進(jìn)行稀釋，每個(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算均值將實(shí)測(cè)值與理論值作比較（偏離應(yīng)小于10%），計(jì)算y=ax+b，驗(yàn)證線性范圍要求a值在1±0.05范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)r≥0.9752023/1/11線性范圍實(shí)例分析稀釋度第一次第二次第三