實(shí)驗(yàn)三線粒體及液泡系的活體染色

實(shí)驗(yàn)三：線粒體及液泡系的活體染色1.通過(guò)制片掌握活體染色方法；2.熟悉在耳緣靜脈用空氣栓塞處死兔子的方法；

3.了解線粒體及液泡系在光鏡及電鏡下的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹俊緦?shí)驗(yàn)原理】

活體染色是指對(duì)生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色但又無(wú)毒害的一種染色方法。它的目的是顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡?；钊炯夹g(shù)可用來(lái)研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法不同，通常把活體染色分為體內(nèi)活染和體外活染兩類。體內(nèi)活染是以膠體狀的染料溶液注入動(dòng)、植物體內(nèi)，染料的膠粒固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)里，達(dá)到易于識(shí)別的目的。體外活染又稱超活染色，它是由活的動(dòng)、植物分離出部分細(xì)胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色?！緦?shí)驗(yàn)原理】

活體染色之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是染料的“電化學(xué)”特性起重要作用。堿性燃料的膠粒表面帶陽(yáng)離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽(yáng)離子，這樣，他們彼此就發(fā)生了吸引作用。但不是任何染料都可以作為活體染色劑之用，應(yīng)選擇那些對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性或毒性極小的染料，而且總要配成稀淡的溶液來(lái)使用。一般是以堿性染料最為適用，可能因?yàn)樗哂腥芙庠陬愔|(zhì)的特性，易于被細(xì)胞吸收，JanusgreenB和中性紅兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對(duì)于線粒體和液泡系的染色各有專一性。【實(shí)驗(yàn)原理】

【儀器、材料與試劑】（一）儀器顯微鏡,載玻片,蓋玻片,刀片,吸水紙鏡頭紙,恒溫水浴鍋,解剖盤,剪刀,表面皿,牙簽,凹面載玻片（二）材料小白鼠肝細(xì)胞或兔子的肝臟細(xì)胞

小麥或黃豆幼根根尖（三）試劑Ringer溶液

10%、1/3000中性紅溶液

1%、1/5000JanusgreenB溶液【實(shí)驗(yàn)步驟】（一）兔肝細(xì)胞線粒體的活體染色1.用空氣栓塞處死兔子，置于解剖盤內(nèi)，迅速打開腹腔，取兔肝邊緣較薄的肝組織一小塊（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿內(nèi)洗去血液(用鑷子輕壓).2.用吸管吸去Ringer氏液，在平皿內(nèi)加1／300詹納斯綠B染液，讓組織塊上表面露在染液外面，使細(xì)胞內(nèi)線粒體的酶系可進(jìn)行充分的氧化，這樣才有利于保持染料的氧化狀態(tài)，使線粒體著色。3.當(dāng)組織塊邊緣染成籃色時(shí)即可，一般需要染30分鐘。染色后，將組織塊移到載片上，用鑷子將組織塊拉碎，就會(huì)有一些細(xì)胞或細(xì)胞群從組織塊脫離。4.將稍大的組織塊去掉，使游離的細(xì)胞或細(xì)胞群留在載片上，加一滴Ringer氏液，蓋上蓋片，吸去多余水分。5.顯微鏡觀察，肝細(xì)胞質(zhì)中許多線粒體被染成藍(lán)綠色，呈顆粒狀。【實(shí)驗(yàn)步驟】(二)植物細(xì)胞液泡系觀察1.取豆芽的根尖,用刀片綜切根尖.2.放入中性紅染液中,染色5-10min3.吸去染液,滴一滴Ringer液.4.蓋上蓋玻片進(jìn)行鏡檢.5.在高倍鏡下,先觀察根尖部分的生長(zhǎng)點(diǎn)細(xì)胞,可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)中散在很多大小不等的染成玫瑰紅色的圓形小泡,這是初生的幼小液泡.然后,由生長(zhǎng)點(diǎn)向延長(zhǎng)區(qū)觀察,在一些已分化的細(xì)胞內(nèi),液泡的染色較淺,體積增大,數(shù)目變少.在成熟區(qū)細(xì)胞中,一般只有一個(gè)淡紅色的巨大液泡,占據(jù)細(xì)胞的絕大部分,將細(xì)胞核擠到細(xì)胞一側(cè).【實(shí)驗(yàn)報(bào)告】畫出你所觀察到的線粒體和液泡的圖像.總結(jié)實(shí)驗(yàn)成功或失敗的原因.【思考題】

1.

用一種活體染色劑對(duì)細(xì)胞進(jìn)行超活染色，為什么不能同時(shí)觀察到線粒體、液泡系等多種