液相色譜常見問題及其對策－三

液相色譜常見問題及其對策液相色譜常見問題類型

A.壓力異常（偏高、波動）

B.漏液

C.保留時間漂移

D.基線問題（漂移、噪聲）

E.峰形異?，F(xiàn)象：無壓力，流動相不流動可能原因1、保險絲斷或電源問題2、泵頭內(nèi)有空氣或流動相不足3、漏液4、單向閥損壞5、柱塞桿折斷6、壓力傳感器損壞(流動相流動正常，但無壓力)液相色譜常見問題及其對策

－壓力異?，F(xiàn)象：壓力持續(xù)偏高或不斷上升

1、流速設(shè)定過高2、保護(hù)柱或柱子篩板堵塞3、流動相使用不當(dāng)或有緩沖鹽析出4、色譜柱選擇不當(dāng)5、進(jìn)樣閥損壞6、線路過濾器堵塞液相色譜常見問題及其對策

－壓力異?，F(xiàn)象：壓力持續(xù)偏低

1、流速設(shè)定過低2、色譜柱選擇不當(dāng)3、柱溫過高4、系統(tǒng)漏液液相色譜常見問題及其對策

－壓力異?，F(xiàn)象：壓力持續(xù)偏低

1、流速設(shè)定過低2、色譜柱選擇不當(dāng)3、柱溫過高4、系統(tǒng)漏液液相色譜常見問題及其對策

－壓力異?，F(xiàn)象：壓力波動可能原因1、使用了梯度洗脫2、脫氣不充分3、系統(tǒng)漏液4、泵頭中有氣泡5、柱塞密封圈損壞6、單向閥損壞液相色譜常見問題及其對策

－壓力異常接頭處漏液

1、接頭處松動2、接頭磨損3、接頭被污染4、部件不匹配

液相色譜常見問題及其對策

－漏液泵漏液

1、單向閥松動2、泵密封損壞3、放空閥損壞4、接頭松動（不要擰的太緊）液相色譜常見問題及其對策

－漏液泵漏液

1、單向閥松動2、泵密封損壞3、放空閥損壞4、接頭松動（不要擰的太緊）液相色譜常見問題及其對策

－漏液進(jìn)樣閥漏液可能原因1、進(jìn)樣針尺寸不合適2、定量環(huán)堵塞3、廢液管堵塞4、廢液管產(chǎn)生虹吸5、進(jìn)樣口密封松動6、轉(zhuǎn)子密封損壞液相色譜常見問題及其對策

－漏液檢測器漏液可能原因1、流通池墊片損壞2、流通池透鏡破碎3、手緊接頭處漏液4、廢液管堵塞5、流通池堵塞液相色譜常見問題及其對策

－漏液保留時間漂移可能原因1、柱溫變化2、流動相組分變化3、色譜柱沒有平衡4、流速變化5、泵中有氣泡6、流動相選擇不當(dāng)7、鍵合相流失8、緩沖容量不夠液相色譜常見問題及其對策

－保留時間漂移基線漂移可能原因1、溫度波動2、流動相不均勻(脫氣，使用純度更高的溶劑)3、流通池被污染或有氣泡

4、流通池窗口破裂5、流動相配比不當(dāng)或流速變化6、柱子平衡（約30－60min）液相色譜常見問題及其對策

－基線問題基線漂移可能原因7、流動相污染，變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)以饅頭樣峰被洗出9、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處液相色譜常見問題及其對策

－基線問題基線噪聲（規(guī)則的）可能原因1、流動相、泵、檢測器中有氣泡2、有地方漏液3、流動相混和不均勻

4、溫度影響（檢測器和柱溫差別太大）5、其他電子設(shè)備的影響

液相色譜常見問題及其對策

－基線問題基線噪聲（不規(guī)則的）可能原因1、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2、有地方漏液3、流動相各溶劑不相溶或混和不均勻

4、流通池污染5、檢測池能量不足6、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡液相色譜常見問題及其對策

－基線問題前沿峰、拖尾峰可能原因1、柱塞板堵塞2、色譜柱塌陷3、柱外效應(yīng)

4、干擾峰

5、緩沖不足或不合適6、化學(xué)或次級保留（硅羥基效應(yīng)）液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常前沿峰、拖尾峰

可能原因7、重金屬污染8、樣品溶劑選擇不當(dāng)9、樣品過載

10、柱溫過低液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常分叉峰

可能原因1、保護(hù)柱或分析柱污染2、樣品溶劑不溶于流動相液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常峰展寬進(jìn)樣體積過大流動相粘度過高檢測池體積過大保留時間過長柱外體積過大樣品過載液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常峰變形

可能原因1、樣品過載2、樣品溶劑選擇不當(dāng)液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常鬼峰1、進(jìn)樣閥殘余峰2、樣品中未知物3、柱未平衡4、水污染5、三氟乙酸氧化液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常液相色譜容易出問題的部件維護(hù)流程圖吸濾頭單向閥柱塞密封圈線路過濾器手動進(jìn)樣器檢測器材料：不銹鋼燒結(jié)，孔徑10um故障：堵塞表現(xiàn)：管路中不斷有氣泡生成措施：用5％～20％的稀硝酸，超聲波清洗，再用蒸餾水清洗注意點：吸濾頭拆下時不必將塑料管剪斷吸濾頭液相色譜容易出問題的部件LC-10ATvp泵：串聯(lián)式往復(fù)泵LC-10ADvp泵：并聯(lián)式往復(fù)泵液相色譜容易出問題的部件液相色譜容易出問題的部件單向閥結(jié)構(gòu)拋光面透明塑料墊片寶石球吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭流動相單向閥原理吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭液相色譜容易出問題的部件故障1：寶石球粘附于墊片表現(xiàn)：泵無法吸液或排液，流路不通措施：1）用針筒抽出口單向閥以產(chǎn)生負(fù)壓，使寶石球與墊片分開2）拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超聲波清洗單向閥液相色譜容易出問題的部件故障2：寶石球或塑料墊片受污導(dǎo)致密封不好表現(xiàn)：系統(tǒng)壓力波動大措施：拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超聲波清洗單向閥故障：密封圈磨損而導(dǎo)致密封不良現(xiàn)象：系統(tǒng)壓力波動大或漏夜措施：更換密封圈注意點：更換密封圈拆卸泵頭前，柱塞桿復(fù)位（P－SET）柱塞密封圈流動相泵頭清洗管路柱塞桿密封圈液相色譜容易出問題的部件故障：堵塞現(xiàn)象：系統(tǒng)壓力波動大或壓力偏高措施：5％稀硝酸，超聲波清洗判斷依據(jù)：關(guān)閉排液閥，斷開出口管路，設(shè)定流速1mL/min，如壓力>3kgf/cm2，則可能堵塞。線路過濾器排液閥壓力傳感器線路過濾器流動相液相色譜容易出問題的部件手動進(jìn)樣閥故障：轉(zhuǎn)子密封損壞現(xiàn)象：漏液原因：a擰的太緊

b樣品太臟

c針頭損壞或不使用液相專用針解決措施：更換轉(zhuǎn)子密封，并在使用時注意保養(yǎng)液相色譜容易出問題的部件液相色譜容易出問題的部件手動進(jìn)樣閥故障：載樣困難

原因：a定量環(huán)堵塞

b進(jìn)樣器污染

解決措施：清洗或更換定量環(huán)、進(jìn)樣器柱子故障：系統(tǒng)高壓、峰型變差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留時間的改變

解決措施：清洗正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、異丙醇、0.05M稀硫酸液相色譜容易出問題的部件分析柱的維護(hù)1、在使用新柱之前，最好用強(qiáng)溶劑在低流量下(0.2-0.3ml/min)沖洗30mins，長時間未用的分析柱也要同樣處理2、定期使用強(qiáng)溶劑沖洗柱子3、使用緩沖鹽時，要先用水沖洗，再用有機(jī)溶劑沖洗4、凈化樣品5、分離條件6、不使用時，要蓋上蓋子，避免固定相干枯7、使用預(yù)柱8、避免流動相組成及極性的劇烈變化9、避免壓力脈沖的劇烈變化液相色譜容易出問題的部件液相色譜容易出問題的部件峰產(chǎn)生有肩或分叉的原因1.柱子劣化（進(jìn)口處產(chǎn)生不均勻的空隙）2.樣品劣化（生成氧化物、分解物等）判斷標(biāo)準(zhǔn)

所有的峰都產(chǎn)生有肩峰或分叉時則為柱子劣化延長柱壽命方法：倒沖柱換過濾片修補(bǔ)柱頭

液相色譜容易出問題的部件液相色譜容易出問題的部件柱的補(bǔ)修填料的取出液相色譜容易出問題的部件恢復(fù)例液相色譜容易出問題的部件更換氘燈（紫外檢測器）

判斷氘燈能量：設(shè)定220nm波長，檢查參比池能量，如能量低于800，需更換氘燈。操作注意點：不要用手直接接觸氘燈表面液相色譜容易出問題的部件液相色譜容易出問題的部件故障：樣品池受污表現(xiàn)：樣品池和參比池能量相差較大檢查方法：設(shè)定250nm波長，通甲醇或水，查看SMPLEN和REFEN，如兩者相差較大，則樣品池受污。措施：用針筒注入異丙醇，清洗樣品池；如污染嚴(yán)重，拆開樣品池，將透鏡等放入異丙醇中超聲波清洗。紫外檢測器其他問題溶劑的過濾濾膜類型：

聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽。醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶劑。

尼龍66濾膜：

適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可以用于強(qiáng)酸，不適用于二甲基甲酰胺。

再生纖維素濾膜：蛋白吸收低，同樣適用于水溶性樣品和有機(jī)溶劑脫氣：除去流動相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡氣泡對測定的影響：

1）泵中氣泡使液流波動，改變保留時間和峰面積2）柱中氣泡使流動相繞流，峰變形3）檢測器中的氣泡產(chǎn)生基線波動其他問題脫氣的目的

1.防止由氣泡的產(chǎn)生引起的故障2.防止由溶解（在液體中的）氣體量的變動引起的檢測不穩(wěn)定程度1）示差折射率檢測器*使折射率變化2）UV檢測器（200nm以下）*溶解氧氣有吸收3）熒光檢測器*溶解氧氣有消光作用其他問題其他問題脫氣的方法1.

超聲波脫氣法2.He清除法3.

使用氟樹脂膜的減壓脫氣法其他問題He清除法調(diào)壓閥排氣閥往送液泵流動相過濾器其他問題氟樹脂膜真空室往送液泵真空泵控制器流動相使用氟樹脂膜的減壓脫氣法其他問題梯度洗脫法的注意點1.流動相使用HPLC級有機(jī)溶劑。2.查看空白實驗的數(shù)據(jù)。3.遵守分析周期。（最初的分析數(shù)據(jù)不采用）其他問題緩沖液選擇緩沖液的步驟

1.確定最佳分離狀態(tài)時的流動相pH2.選擇具有與流動相的pH相近的pKa

的緩沖液（即使?jié)舛认?/p>