肺移植受者排斥反應(yīng)中外泌體的作用綜述,外科論文

肺移植受者排斥反應(yīng)中外泌體的作用綜述,外科論文摘要：外泌體是一種由絕大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小囊泡，在體內(nèi)生理以及病理經(jīng)過(guò)中發(fā)揮重要作用。發(fā)生排擠反響的肺移植受者(LTxR)循環(huán)外泌體中含有不匹配的人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA)和肺相關(guān)本身抗原(如K-α1微管蛋白和膠原蛋白V)等，外泌體可能是由本身抗體誘導(dǎo)產(chǎn)生的，循環(huán)中的外泌體引發(fā)免疫反響，導(dǎo)致肺移植受者發(fā)生排擠反響。本文從3個(gè)方面討論外泌體在肺移植中的作用:外泌體作為肺移植后發(fā)生排擠反響的生物標(biāo)志物;外泌體介導(dǎo)的激活免疫反響的機(jī)制;外泌體作為治療策略的潛在能力。本文關(guān)鍵詞語(yǔ):肺移植;外泌體;HLA抗原;移植物排擠;生物學(xué)標(biāo)記;Abstract：Exosomesaretinyvesiclessecretedbymostcellsandplayanimportantroleinphysiologicalandpathologicalprocessesinvivo.Thecirculatingexosomesofrejectedlungtransplantrecipients(LTxR)containmismatchedhumanleukocyteantigens(HLA)andlungassociatedautoantigens(suchasK-α1tubulinandcollagenV),etc.,exosomesmaybeinducedbyantibodiestoautoantigens,andthesecirculatingexosomestriggerimmuneresponsethatleadstorejectioninlungtransplantrecipients.Here,wewilldiscusstheroleofexosomesinlungtransplantationfromthreeaspects:exosomesasbiomarkersoflungtransplantationrejection;Exosomemediatedactivationofimmuneresponsemechanisms;thepotentialofexosomesastherapeuticstrategies.Keyword：Lungtransplantation;Exosomes;HLAantigens;Graftrejection;Biomarkers;1、外泌體細(xì)胞外囊泡(EVs)是由細(xì)胞分泌的各種具有雙層膜構(gòu)造的囊泡的統(tǒng)稱(chēng)。細(xì)胞外囊泡可分為4個(gè)亞群:外泌體、微粒(微囊泡)、凋亡小體和癌小體，而當(dāng)前研究點(diǎn)主要集中在外泌體[1]。外泌體是由細(xì)胞內(nèi)溶酶體反向出芽構(gòu)成的杯狀囊泡，40～100nm，通過(guò)與質(zhì)膜融合從細(xì)胞中釋放出來(lái)[2]。1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome〞。大多數(shù)細(xì)胞都能夠分泌外泌體，例如肥大細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、T和B淋巴細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞等等[3]。并且在多種體液，如血液、尿液、腹水、母乳、唾液、羊水、淋巴液和支氣管肺泡灌洗液(BALF)等中都發(fā)現(xiàn)了外泌體[4]。外泌體含有多種生物分子，包括糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)、核酸(即DNA和RNA)和代謝物等[5]。根據(jù)當(dāng)前的外泌體內(nèi)容數(shù)據(jù)庫(kù)Exocarta，各種生物和細(xì)胞類(lèi)型的外泌體含有41860種蛋白質(zhì)、3408種mRNA、2838種microRNA(miRNA)和1116種脂質(zhì)。外泌體的組成取決于其來(lái)源的細(xì)胞，如器官移植、超敏反響、癌癥、感染性疾病和其他病理?xiàng)l件下，循環(huán)外泌體的外表標(biāo)志物和內(nèi)含物都不一樣。肺移植受者(LTxRs)中的循環(huán)外泌體存在組織相關(guān)本身抗原(SAgs)———K-α1微管蛋白(Ka1T)和膠原蛋白V(Col-V)、共刺激分子、轉(zhuǎn)錄因子核因子κB(NF-κB)、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)、20S蛋白酶體、MHCⅡ類(lèi)分子和其轉(zhuǎn)錄因子CIITA等[6]。通過(guò)研究外泌體的生物成分，對(duì)理解其在移植排擠反響中的作用至關(guān)重要。有研究[6]表示清楚，小鼠對(duì)腎SAg基底膜聚糖的體液免疫反響是由外泌體中存在的20S蛋白酶體引起的，20S蛋白酶體失活后，小鼠對(duì)腎的本身免疫性反響也將消失。外泌體中含有豐富的生物成分，可作為生物標(biāo)志物監(jiān)測(cè)移植排擠反響、疾病進(jìn)展和預(yù)后狀況等，將會(huì)有光明的應(yīng)用前景;同時(shí)外泌體作為抗原提呈囊泡(APVs)，介入肺移植(LTx)后的固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答;外泌體具有遞送生物分子的功能，還有發(fā)展成為臨床藥物遞送載體的潛力。2020年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)被授予了發(fā)現(xiàn)囊泡運(yùn)輸調(diào)控機(jī)制的研究人員，強(qiáng)調(diào)了外泌體對(duì)生物學(xué)領(lǐng)域的影響。2、外泌體是重要的生物標(biāo)志物對(duì)于很多被診斷為終末期肺疾病的患者來(lái)講，LTx是唯一的治療措施[7]。根據(jù)國(guó)際心肺移植協(xié)會(huì)的登記報(bào)告顯示，截至2021年6月30日，全球已有67260例LTx手術(shù)。隨著醫(yī)療技術(shù)和免疫抑制的不斷發(fā)展，LTx越來(lái)越成熟，但術(shù)后仍會(huì)出現(xiàn)很多并發(fā)癥，像感染、急性排擠反響(AR)、慢性排擠反響(CR)、急性肺水腫和心血管疾病等等。華而不實(shí)CR在LTx術(shù)后最為常見(jiàn)，5年內(nèi)發(fā)生率約為50%,10年內(nèi)發(fā)生率可達(dá)90%[4]。CR中慢性同種異體肺移植功能障礙(CLAD)導(dǎo)致的肺衰竭是移植后一年內(nèi)死亡的主要原因[8]。CLAD包括閉塞性細(xì)支氣管炎綜合征(BOS)和限制性同種異體肺移植綜合征2種亞型[4,9]。BOS是CLAD最常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)，大約70%的CLAD患者會(huì)發(fā)生BOS[9]。LTx術(shù)后，臨床醫(yī)生通過(guò)支氣管鏡活檢、影像學(xué)檢查等方式方法監(jiān)測(cè)排擠反響。然而，這些方式方法缺乏準(zhǔn)確性、特異性，經(jīng)常反映移植肺損傷的非早期。因而，在LTx領(lǐng)域迫切需要開(kāi)發(fā)新的診斷生物標(biāo)志物，對(duì)同種異體LTx進(jìn)行無(wú)創(chuàng)和連續(xù)監(jiān)測(cè)。發(fā)生排擠反響與否的LTxRs外泌體的主要成分不同，其有望成為同種異體移植排擠反響的預(yù)測(cè)/診斷生物標(biāo)志物。2.1、外泌體———肺相關(guān)本身抗原發(fā)生排擠反響的主要原因是異體移植物與受者人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA)不匹配，被受者的免疫監(jiān)測(cè)所辨別。Sureshbabu等[9]報(bào)道診斷為AR和CR的LTxRs血清和BALF中存在外泌體，這些外泌體攜帶有特異性抗原，介入了同種異體LTx的排擠反響。原發(fā)性移植物功能障礙(PGD)、缺血再灌注損傷、呼吸道病毒感染(RVI)、供者特異性抗體(DSA)和肺相關(guān)SAgs(Ka1T和Col-V)抗體的產(chǎn)生等會(huì)誘導(dǎo)循環(huán)外泌體的釋放[4]。CLAD患者的循環(huán)外泌體表示出:與受者錯(cuò)配的HLA分子、肺相關(guān)SAgs、共刺激分子(CD80,CD86)、轉(zhuǎn)錄因子NF-κβ、HIF-1α、microRNA(miR-NA)和20S蛋白酶體等[6]。Gunasekaran等[10]研究發(fā)現(xiàn)非排擠患者的外泌體不表示出MHCⅡ類(lèi)分子和共刺激分子(CD80、CD86、CD40)，但黏附分子在LTxRs的循環(huán)外泌體上都有表示出。HLA分子和(或)肺相關(guān)SAgs抗體的產(chǎn)生是預(yù)測(cè)排擠反響的標(biāo)志。在發(fā)生排擠反響的LTxRs中，在供者來(lái)源的外泌體外表檢測(cè)到供者HLA和SAgs，在穩(wěn)定性L(fǎng)TxRs的供者來(lái)源的外泌體上沒(méi)有檢測(cè)到SAgs，表示清楚循環(huán)外泌體來(lái)源于免疫損傷后的移植器官[9,11]。供者來(lái)源的外泌體從移植物中“滲漏〞出來(lái)，并通過(guò)受者毛細(xì)淋巴管外滲或切斷的開(kāi)口向移植物引流的淋巴器官流動(dòng)。Habertheuer等[7]將Wistar轉(zhuǎn)基因鼠的左肺移植到MHC分子完全不匹配的Lewis受者中，GFP標(biāo)記CD63檢測(cè)外泌體水平，循環(huán)外泌體在第1天到達(dá)峰值，第2天顯著下降，然后在第3天到達(dá)基線(xiàn)水平，符合AR的表現(xiàn)。外泌體水平快速下降，發(fā)生在移植出現(xiàn)AR的組織學(xué)證據(jù)之前，提示外泌體能夠作為一種新的生物標(biāo)志物。Rahman等[12]在原位單側(cè)LTxCR的小鼠模型中，觀(guān)察到超過(guò)80%的移植小鼠從第14天開(kāi)場(chǎng)，血清中分離的外泌體顯示肺SAgs(Col-V和Ka1T)水平升高，血清中還存在抗肺SAgs的抗體，而在第30天才出現(xiàn)CR的組織學(xué)變化，表示清楚外泌體可能是CR的潛在生物標(biāo)志物，并揣測(cè)外泌體可能介入了LTx后CR的發(fā)生。Sharma等[13]研究表示清楚，在BOS臨床診斷前12個(gè)月，從血漿中分離的外泌體顯示肺SAgs(Ka1T和Col-V)水平的升高(特異性為100%，敏感性為90%)，表示清楚帶有肺SAgs的循環(huán)外泌體可作為鑒別有BOS風(fēng)險(xiǎn)的LTxRs生物標(biāo)志物。Mohanakumar等[14]用BOS患者的循環(huán)外泌體(添加佐劑)免疫小鼠，供者氣道上皮細(xì)胞(AEC)分泌的外泌體具有高度免疫原性，含有HLAⅡ類(lèi)分子、20S蛋白酶體和共刺激分子等，小鼠脾臟T細(xì)胞對(duì)外泌體上兩種SAgs(Ka1T和Col-V)均有反響，γ-干擾素(IFN-γ)和白細(xì)胞介素17(IL-17)生成增加，白細(xì)胞介素10(IL-10)水平降低。因而，AEC分泌的外泌體會(huì)加強(qiáng)LTx后的免疫反響，導(dǎo)致排擠反響的發(fā)生。棒狀細(xì)胞分泌蛋白(CCSP)具有抗炎功能，在吸煙、感染、肺損傷、BOS和其他可導(dǎo)致炎癥反響的疾病中，CCSP水平下降。據(jù)Itabashi等[15]報(bào)道，在BOS臨床診斷前7～9個(gè)月，患者BALF中CCSP水平顯著下降，低水平的CCSP能夠促進(jìn)促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生、自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)來(lái)源外泌體的誘導(dǎo)以及對(duì)HLA和SAgs的免疫反響，NK細(xì)胞來(lái)源的外泌體含有增加的SAgs、NK細(xì)胞標(biāo)志物和細(xì)胞毒性分子，提示NK細(xì)胞來(lái)源的外泌體在CLAD發(fā)生中發(fā)揮作用。CCSP缺失導(dǎo)致NK細(xì)胞釋放外泌體，能夠刺激移植后固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答，增加了BOS的風(fēng)險(xiǎn)。Goodlet等[16]報(bào)告，1例76歲的女性肺移植患者，因AR接受免疫抑制劑治療后，隨后感染了SARS-CoV-2,HLA抗體水平開(kāi)場(chǎng)急劇增加。在SARS-CoV-2感染前，對(duì)循環(huán)外泌體分析顯示存在肺SAgs、HLA-DR和HLA-DQ。患者感染SARS-CoV-2后，發(fā)現(xiàn)外泌體含有SARS-CoV-2刺突蛋白，感染異常感覺(jué)和狀態(tài)消除后，不再檢測(cè)到含有SARS-CoV-2刺突蛋白的外泌體，然而，具有肺SAgs、HLA-DR和HLA-DQ的外泌體始終存在，肺功能持續(xù)下降，提示患者出現(xiàn)CLAD。以上表示清楚，檢測(cè)含有病毒蛋白的外泌體可能有助于辨別由病毒感染引起的同種異體移植物損傷?？笻LA和抗肺相關(guān)SAgs可能在BOS的免疫發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮協(xié)同作用，并且是BOS進(jìn)展的重要預(yù)測(cè)因子[17]。大多數(shù)產(chǎn)生DSA的患者隨后也會(huì)產(chǎn)生肺相關(guān)SAgs抗體，表示清楚DSA可能會(huì)激活并誘導(dǎo)肺相關(guān)SAgs抗體的產(chǎn)生[18]。Sureshbabu等[9]對(duì)103例LTxRs的分析表示清楚，42.7%的LTxRs產(chǎn)生了DSA,30.1%的LTxRs產(chǎn)生了Kα1T和ColV抗體，表示清楚DSA的產(chǎn)生通常先于肺SAgs抗體的產(chǎn)生。除此之外，HLA抗原和肺相關(guān)SAgs，相互互相影響產(chǎn)生抗體的概率更大，提示存在免疫擴(kuò)散現(xiàn)象。研究表示清楚肺相關(guān)SAg(Kα1T)不僅能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生對(duì)Kα1T的抗體，還能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生對(duì)Col-V的抗體，表示清楚在小鼠LTxCR模型中，在BOS構(gòu)成之前出現(xiàn)了免疫應(yīng)答擴(kuò)散。然而，由于HLA分子和肺相關(guān)SAgs在不同的染色體上由不同基因編碼，所以導(dǎo)致其擴(kuò)散的機(jī)制尚不清楚[6]。2.2、外泌體-miRNAsmiRNA可作為新的診斷生物標(biāo)志物來(lái)辨別有BOS發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)的患者。miRNA是器官移植領(lǐng)域的研究熱門(mén)，它們與靶mRNA結(jié)合調(diào)控基因表示出，這些基因是先天和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的關(guān)鍵要素。DSA能夠誘導(dǎo)生成miRNA，已經(jīng)知道的外泌體包含的miRNA，可誘導(dǎo)炎癥、內(nèi)皮激活、Th17分化和抗體介導(dǎo)的排擠反響等，進(jìn)而觸發(fā)免疫應(yīng)答。Xu等[19]研究表示清楚，與穩(wěn)定性L(fǎng)TxRs血清樣本相比，在BOS12個(gè)月時(shí)，miR-134、miR-10a、miR-195和miR-133b的表示出水平顯著下調(diào)，miR-144、miR-142-5p和miR-155表示出顯著上調(diào)。還有TGF-β相關(guān)miR-NA，即miR-369-5p和miR-144，它們?cè)赥GF-β信號(hào)通路介導(dǎo)的纖維化中發(fā)揮作用。根據(jù)上述miRNA能夠區(qū)分有BOS發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)的LTxRs。帶有肺相關(guān)SAgs的循環(huán)外泌體能夠預(yù)測(cè)LTxRs發(fā)生CLAD的風(fēng)險(xiǎn)，提示臨床醫(yī)生在LTx發(fā)生不可逆損害之前提早制訂預(yù)防或干涉策略。在人類(lèi)腎臟和心臟移植后CR發(fā)生之前，也檢測(cè)到帶有組織相關(guān)SAgs的循環(huán)外泌體[13]。Vallabhajosyula等[20]對(duì)人類(lèi)胰島和腎移植受者進(jìn)行5年隨訪(fǎng)，分析循環(huán)外泌體，發(fā)現(xiàn)帶有組織特異性SAgs的外泌體長(zhǎng)期存在。因而以為，具有組織特異性SAgs的循環(huán)外泌體有望成為一種無(wú)創(chuàng)性生物標(biāo)志物，能夠監(jiān)測(cè)實(shí)體器官移植受者發(fā)生排擠反響的風(fēng)險(xiǎn)，為臨床移植提供宏大幫助。3、外泌體在LTx排擠反響中的作用Sureshbabu等[9]在小鼠支氣管內(nèi)給予MHC抗體，誘導(dǎo)呼吸道阻塞疾病(OAD)，類(lèi)似于人類(lèi)CLAD，重要的是，在OAD臨床診斷前檢測(cè)到了對(duì)于外泌體上肺相關(guān)SAgs(Col-V,Kα1T)的抗體，證明外泌體可激活免疫應(yīng)答，導(dǎo)致產(chǎn)生對(duì)肺SAgs的抗體并最終導(dǎo)致OAD的發(fā)生。供者白細(xì)胞的去除，或無(wú)法遷移到受者淋巴組織，表示清楚供者移植物來(lái)源的外泌體在同種異體抗原辨別途徑中發(fā)揮重要作用。有研究顯示，直接辨別、間接辨別和半直接辨別途徑在同種異體移植排擠中發(fā)揮作用。3.1、直接辨別和間接辨別在同種異體LTx中，使T細(xì)胞活化的主要方式有兩種:直接辨別[供肺抗原提呈細(xì)胞(APC)刺激受者T細(xì)胞]和間接辨別(受者APC刺激受者T細(xì)胞)。直接辨別的基本經(jīng)過(guò)是:供肺中的過(guò)客白細(xì)胞，包括APC和淋巴細(xì)胞，移植物血管與受者血管接通后，過(guò)客白細(xì)胞可進(jìn)入受者血液循環(huán)或局部引流淋巴組織，受者T細(xì)胞可以進(jìn)入移植物中，供者APC將其外表的抗原肽-MHC分子復(fù)合物(pMHC)直接提呈給受者的同種反響性T細(xì)胞，供其辨別，引發(fā)移植排擠反響[21]。而間接辨別是指供肺的MHC分子經(jīng)受者APC加工和處理后，以供者抗原肽―受者M(jìn)HC分子復(fù)合物的形式提呈給受者T細(xì)胞，使之活化[4]。間接辨別是發(fā)生移植排擠反響的重要機(jī)制，這種排擠反響主要由CD4+T細(xì)胞和同種異體反響性抗體產(chǎn)生，BOS與非BOS患者相比，間接辨別引起的同種異體排擠反響的頻率更高層次[22]。在AR早期，直接辨別機(jī)制起主要作用;在AR中晚期和CR中，間接辨別機(jī)制起更重要的作用[4]。3.2、半直接辨別LTx后，受者血液循環(huán)和淋巴組織內(nèi)的APC能夠通過(guò)各種方式攝取供者抗原，包括吞噬作用、內(nèi)吞作用或胞飲作用，并以外泌體(同種異體抗原)的形式分泌。由APC分泌的外泌體外表高度富集抗原肽-MHC分子復(fù)合物，提示它們能夠作為抗原提呈囊泡(APVs)，類(lèi)似于APC來(lái)提呈抗原，進(jìn)而介入免疫應(yīng)答[3,6]。有研究表示清楚，外泌體以吞噬體的形式內(nèi)化和分泌抗原，比DC提呈抗原肽的效率高103～104倍。外泌體維持起源APC的拓?fù)錁?gòu)造，在囊泡外表暴露MHCⅠ類(lèi)或MHCⅡ類(lèi)分子的胞外構(gòu)造域，可能具有直接刺激CD8+或CD4+T細(xì)胞的能力。固然游離外泌體直接刺激同種異體反響性T細(xì)胞的能力有限，但它們攜帶的p-MHC分子復(fù)合物，在APC通過(guò)吞噬或微胞飲作用內(nèi)化時(shí)，可作為肽源間接啟動(dòng)T細(xì)胞[22]。樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)是一種重要的專(zhuān)職性APC，能夠提呈抗原，介入免疫調(diào)節(jié)，介導(dǎo)炎癥反響等。在原代DC和DC細(xì)胞系中已經(jīng)觀(guān)察到由DC分泌的外泌體，并已成為外泌體介導(dǎo)的同種異體辨別領(lǐng)域的研究重點(diǎn)[21]。成熟DC釋放的外泌體富集MHC分子、黏附分子和共刺激分子，能夠觸發(fā)免疫應(yīng)答，未成熟DC(imDC)釋放的外泌體顯示出低水平的MHCⅡ/I類(lèi)分子以及黏附分子和共刺激分子，具有調(diào)節(jié)功能，抑制免疫反響[23]。盡管一些研究已經(jīng)證明了供者DC的重要性，但很多研究小組報(bào)道，某些同種異體移植發(fā)生AR第一周內(nèi)，在受者血液循環(huán)或移植物引流淋巴組織中無(wú)法檢測(cè)到供者來(lái)源的DC，這表示清楚在AR早期，除了直接辨別途徑以外，可能存在其他機(jī)制，移植物來(lái)源的外泌體可能在同種異體抗原辨別中發(fā)揮作用。存在另一種稱(chēng)為半直接辨別的途徑，受者T細(xì)胞通過(guò)供者來(lái)源的外泌體被激活[3]。LTx后，受者血液循環(huán)或移植物引流淋巴組織中除了過(guò)客白細(xì)胞，供肺還會(huì)釋放外泌體，攜帶供者M(jìn)HC分子的外泌體被受者APC攝取，受者APC與供者來(lái)源外泌體上的MHC分子結(jié)合，能夠直接或間接地提呈供者M(jìn)HC分子和其他相關(guān)抗原，這一現(xiàn)象被稱(chēng)為異裝[24]。Lombardi等[25]證明了受者來(lái)源的DC與供者M(jìn)HC分子異裝能夠激活受者反響性T細(xì)胞，為移植中同種異體T細(xì)胞辨別的半直接途徑奠定了基礎(chǔ)。隨后，在實(shí)體器官和同種異體骨髓移植中，供者M(jìn)HC分子在受者APC上的存在也被證實(shí)。有研究[26,27,28]也提到，外泌體介入了半直接辨別途徑，同種異體皮膚、心臟移植后，移植物引流淋巴組織中，受者來(lái)源的DC和B細(xì)胞被供者來(lái)源的攜帶完好供者M(jìn)HC分子的外泌體異穿;在心臟或胰島移植模型中，異裝細(xì)胞在刺激受者T細(xì)胞反響中起有效作用。然而，需要注意的是，外泌體不是被受者DC內(nèi)化，而是小簇地黏附在受者DC外表，保存完好和功能良好的供者M(jìn)HC分子和APC激活信號(hào)[22]。外泌體通過(guò)配體與受體特異性結(jié)合的方式與細(xì)胞互相作用，與靶細(xì)胞胞膜融合，并將其內(nèi)含物“注射〞到靶細(xì)胞的胞質(zhì)中，外泌體中的miRNA調(diào)節(jié)靶細(xì)胞mRNA[5]。Sharma等[29]提到帶有供者H-2分子的循環(huán)外泌體具有高水平的熱休克蛋白(HSPs)和miR-155，它們能夠激活受者DC，受者DC比供者過(guò)客DC的數(shù)量多。當(dāng)完好的供者H-2分子從供者轉(zhuǎn)移到受者DC，然后由受者DC提呈給T細(xì)胞時(shí)，就會(huì)發(fā)生半直接辨別，這種機(jī)制使得直接和間接激活的T細(xì)胞通過(guò)一樣的APC進(jìn)行穿插調(diào)節(jié)。異裝的受者DC通過(guò)供者來(lái)源的外泌體提供供者H-2分子，通過(guò)半直接途徑有效激活異源反響性T細(xì)胞。3.3、外泌體-miRNAs在LTx排擠反響中的調(diào)控作用DSA能夠誘導(dǎo)生成miRNA,miRNA不僅有助于合成抗體，還介入纖維蛋白的構(gòu)成。外泌體包含已經(jīng)知道的功能性miRNA,miR-182可誘導(dǎo)炎癥、miR-92a介入內(nèi)皮激活、miR-142-5p介入抗體介導(dǎo)的排擠反響和miR-155促進(jìn)Th-17分化、T細(xì)胞激活等等[30]。miR-144已被證實(shí)介入了BOS的發(fā)展。與非BOS患者相比，BOS患者miR-144表示出顯著增加。miR-144過(guò)表示出導(dǎo)致TGIF1TGF-β誘導(dǎo)因子同位序列1(smads的輔助抑制因子)顯著下降，Smad2、Smad4、TGF-β、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表示出增加，α-平滑肌肌動(dòng)蛋白和纖維粘連蛋白水平增加，促進(jìn)了肺纖維化[4]。miR-155是與炎癥相關(guān)的miRNA，在多個(gè)細(xì)胞系中有效上調(diào)Toll樣受體，是炎癥細(xì)胞因子(例如IL-17)產(chǎn)生的正調(diào)控因子，已被證明在LTx后CR的發(fā)展中發(fā)揮重要作用[31]。IL-17在BOS發(fā)病機(jī)制中也起著重要作用:通太多克隆抗IL-17，阻斷IL-17可顯著減少BOS病變[4]。miR-155在抗MHC誘導(dǎo)的OAD的發(fā)病機(jī)制中起著不可或缺的作用。研究[32]表示清楚，給予MHCⅠ類(lèi)抗體后，野生型小鼠肺血管和細(xì)支氣管周?chē)装Y細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維化程度增加，管腔閉塞。而敲除miR-155基因的小鼠未表現(xiàn)出明顯病變。阻斷來(lái)自供肺的外泌體釋放有可能防止同種異體移植排擠反響。在結(jié)核分枝桿菌感染的小鼠模型中，發(fā)現(xiàn)敲除了Rab27a基因的小鼠由于釋放外泌體的能力減弱，刺激T細(xì)胞的效率較低。有一些小的抑制分子如中性鞘磷脂酶抑制劑GW4869，酸性鞘磷脂酶抑制劑鹽酸丙咪嗪，能夠有效地阻斷來(lái)自各種組織和細(xì)胞的外泌體誘導(dǎo)。但一項(xiàng)研究表示清楚，固然GW4869降低了外泌體的分泌，但它加強(qiáng)了更多的漿膜來(lái)源EV的分泌;Rab27a在減少外泌體分泌的同時(shí)，可以以減少一些非EV結(jié)合的可溶性因子的分泌，表示清楚這些抑制方式方法可能會(huì)間接影響EV的組成和分泌，改變細(xì)胞功能[5]。同時(shí)在機(jī)體正常生理經(jīng)過(guò)中，外泌體能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞間的通信，維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。因而我們應(yīng)該只阻斷移植器官釋放外泌體，不要影響其他組織或細(xì)胞外泌體的釋放。在體外肺灌注經(jīng)過(guò)中阻斷供肺的外泌體誘導(dǎo)，能夠減少肺損傷，改善移植器官的功能，這樣即便是邊緣肺可以以成功移植。Ravichandran等[5]提到在體外肺灌注經(jīng)過(guò)中阻斷外泌體的構(gòu)成和釋放是可行的。外泌體介導(dǎo)AR和CR的機(jī)制尚不特別清楚，進(jìn)一步深切進(jìn)入研究這些機(jī)制對(duì)理解LTx后免疫經(jīng)過(guò)的發(fā)展至關(guān)重要，并將為將來(lái)的治療和生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)提供方向。4、外泌體作為治療策略研究[21]證明，EVs在妊娠期間孕婦對(duì)胎兒同種異體抗原的耐受以及實(shí)驗(yàn)室嚙齒動(dòng)物對(duì)同種異體肝移植耐受相關(guān)的免疫特權(quán)中發(fā)揮重要作用。在腸道、心臟、肝臟或腎臟移植模型中，外泌體與低劑量免疫抑制劑或供者特異性Treg聯(lián)合能夠有效提升同種異體移植物的存活率[3]。利用外泌體治療替代免疫抑制治療，可能為處理移植后的嚴(yán)重副作用，提高異體移植存活率開(kāi)拓新的前景。外泌體也是靶向藥物遞送的有效候選物，在藥物傳遞方面，外泌體與脂質(zhì)體等傳統(tǒng)合成材料相比具有各種優(yōu)勢(shì)。外泌體介導(dǎo)的藥物傳遞的治療潛力仍在初步臨床試驗(yàn)中(胰腺癌、急性缺血性腦卒中和結(jié)腸癌)[33]。近年來(lái)，為了克制天然外泌體的局限性，基于納米生物技術(shù)的人工外泌體不斷涌現(xiàn)，低免疫原性和毒性的人工外泌體能夠有效運(yùn)輸藥物、蛋白質(zhì)和核酸等物質(zhì)，外泌體的脂質(zhì)雙層膜構(gòu)造能夠作為內(nèi)容物的天然保衛(wèi)屏障，防止周?chē)割?lèi)對(duì)運(yùn)載物的分解，在LTx領(lǐng)域中將會(huì)起到重要作用[3]。納米生物技術(shù)的進(jìn)步有利于開(kāi)發(fā)人工外泌體，這可能會(huì)加速外泌體在移植領(lǐng)域的臨床轉(zhuǎn)化，人工外泌體因其大規(guī)模生產(chǎn)而具有商業(yè)優(yōu)勢(shì)。將來(lái)，依靠生物技術(shù)、納米技術(shù)、化學(xué)工程和制藥行業(yè)等多學(xué)科的努力，將開(kāi)發(fā)出新穎、多功能的人工外泌體，以改善醫(yī)療保健。我們對(duì)外泌體在LTx治療方面的潛力充滿(mǎn)自信心。5、小結(jié)外泌體是一種重要的生物標(biāo)志物，用于辨別可能發(fā)生CLAD風(fēng)險(xiǎn)的LTxRs。相關(guān)研究還需要揭示來(lái)自移植器官的外泌體生物發(fā)生的新機(jī)制，以及外泌體在人LTx后CLAD發(fā)展中的不同作用，外泌體介導(dǎo)的同種異體辨別可能為解決移植領(lǐng)域的新問(wèn)題提供了缺失的一環(huán)。外泌體正在成為藥物輸送的有效納米載體，對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行藥物傳遞，有望在移植領(lǐng)域成為一種極具開(kāi)發(fā)潛力的運(yùn)輸載體。以下為參考文獻(xiàn)[1]BANSALS,SHARMAM,RANJITHKUMARR,etal.Theroleofexosomesinllograftimmunity[J]CellImmunol,2021,331:85-92.[2]GUNASEKARANM.XUZ.NAYAKDK,etal.Donorderivedexosomeswithlungself-antigensinhumanlungallograftrejection[J].AmJTransplant,2021,17(2):474-484.[3]MIRZAKHANIM,MOHAMMADNIA-AFROUZIM,SHAH-BAZIM.etal.Theexosomeasanovelpredictive/diagnosticbiomarkerofrejectioninthefieldoftransplantation[J].Clinlmmunol,2022,203:134-141.[4]RAHMANM,SURESHBABUA,TOKMANS,etal.Chroniclungallograftdysfunction:immuneresponsesinducedbycirculatingexosomeswithlung-associatedselfantigens[J].CritRevImmunol,2022,39(2):123-134.[5]RAVICHANDRANR.BANSALS,RAHMANM,etal.Theroleofdonor-derivedexosomesinlungallograftrejection[J]HumImmunol,2022,80(8):588-594.[6]MOHANAKUMART,SHARMAM,BANSALS,etal.Anovelmechanismforimmuneregulationafterhumanlungtransplantation[J]JThoracCardiovascSurg,2022,157(5):2096-210[7]HABERTHEUERA.RAMC.SCHMIERERM.etal.Circulatingdonorlung-specificexosomeprofilesenablenoninvasivemonitoringofacuterejectioninarodentorthotopiclungtansplantationmodel[J/OL].Transplantation,2021[2021-0602]ht://transplantjournal/Abstract/9000/Circulating._Donor__Lung_Specific_Exosome_Profiles95251.aspxDOl:10.1097/TP0000000003820[8]GUNASEKARANM.BANSALS,RAVICHANDRANR,etal.Respiratoryviralinfectioninlungtransplantationinducesexosomesthattiggerchronicrejection[J].JHeartLungTransplant,2020,39(4):379-388.[9]SURESHBABUA.FLEMINGTANDMOHANAKUMARTAutoantibodiesinlungtransplantation[J.TransplInt,2020.33():41-49.[10]GUNASEKARANM,SHARMAM,HACHEMR,etal.Circulatingexosomeswithdistinctpropertiesduringchroniclungallograftrejection[J]JImmunol,2021,200(8).2535-2541.[11]MOHANAKUMART,GUNASEKARANM.SHARMAM,etal.Exosomeswithlungself-antigens.Ka1TubulinandCollagenV,asbiomarkerforbronchiolitisobliteranssyndromefollowinghumanlungtransplantation[J].JHeartLungTransplant,2021,37(4):S34-S34.[12]RAHMANM,SHARMAM,LIUW,etal.Circulatingexosomeswithlungself-antigens,Kalpha1TubulinandCollagenV,andimmuneresponsestolungself-antigensprecedeshistologicalevidenceofchronicrejectionfollowingorthotopicmurinelungtransplantation[J].JHeartLungTransplant,2022,38(4):S157-S157.[13]SHARMAM,GUNASEKARANM,RAVICHANDRANR,etal.Circulatingexosomeswithlungself-antigensasabiomarkerforchroniclungallograftdysfunction:Aretrospectiveanalysis[J]JHeartLungTransplant,2020,39(11):1210-1219.[14]MOHANAKUMART,GUNASEKARANM,SHARMAM,etal.AnovelroleforantibodiestoHLAandself-antigens:inductionofimmuno-stimulatoryexosomes[J]HumImmunol,2021,78(Supp):45.[15]ITABASHIY,RAVICHANDRANR,BANSALS,etal.Declineinclubcellsecretoryproteins,exosomesinductionandimmuneresponsestolungselfantigens,Kalpha1TubulinandCollagenV,Leadingtochronicrejectionafterhumanlungtransplantation[J].Transplantation,2021,105(6):1337-1346.[16]GOODLETKJ,BANSALS,ARJUNAA,etal.COVID-19inalungtransplantrecipient:Exploringthediagnosticroleofcirculatingexosomesandtheclinicalimpactofadvancedimmunosuppression[J].TransplInfectDis2021,23(2):e13480D01:101111/tid13480[17]BHARATA.CHIUS,ZHENGZK,etal.Lung-restrictedantibodiesmediateprimarygraftdysfunctionandpreventalotoleranceaftermurinelungtransplantation[J].AmJRespirCellMolBiol,2021,55(4):532-541.[18]SAINID,WEBERJ,RAMACHANDRANS,etal.llimunity-inducedautoimmunityasapotentialmechanisminthepathogenesisofchronicrejectionofhumanlungallografts[J]JHeartLungTransplant,2018,30(6):624-631.[19]XUZ,YANGW,STEWARDN,etal.RoleofcirculatingmicroRNAsintheimmunopathogenesisofrejectionfllowingpediatriclungtransplantation[J].Transplantation,2021,10(10):2461.[20]VALLABHAJOSYULAP,KORUTLAL,HABERTHEUERA,etal.Tissuespecificexosomebiomarkersfornoninvasivelymonitoringimmunologicrejectionoftransplantedtissue[J].」ClinInvest,2021,127(4):1375-1391.[21]BENICHOUG,WANGMCAHRENSK,etalExtracellularvesiclesinalograftrejectionandtolerance[J].CellImmunol,2020,349:104063.DOl:10.1016/jcllimm2020.104063.[22]HWANGB.,BRYERSJANDMULIGANMs.Potentialroleofexosome-basedalorecognitionpathwaysinvolvedinlungtransplantrejection[J]JThoracCardiovascSurg,2021,161(2):e129-e134.DOl:10.1016/jtcvs2020.04.183.[23]TANLN,WUHJ,LIUY,etal.Recentadvancesofexosomesinimunemodulationandautoimmunediseases[J].Autoimmunity.2021.49(6)-357-365.[24]GONZALEZ-NOLASCOB,WANGMC,PRUNEVIEILLEA.etal.Emergingroleofexosomesinllorecognitinandllograftrejection[J]CurrOpinOrganTransplant,2021,23(1):22-27.[25]LOMBARDIG,SIDHUS,BATCHELORJ,etal.lorecognitionofDR1byTcellsfromaDR4/DRw13respondermimicsslf-restrictedrecognitionofendogenouspeptides[J].ProcNatlAcadSciUSA,1989,86(11):4190-4194.[26]MULLEREDonordendriticcell-derivedexosomespromoteallografttargetingimmuneresponse[J]Transplantation,2021.100(11):2237-2238.[27]MARINOJ,BABIKER-MOHAMEDMH,CROSBY-BER-TORINIP,etal.DonorexosomesratherthanpassengerleukocytesinitiatealloreactiveTcellresponsesaftertransplanta