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種子生產(chǎn)與經(jīng)營專業(yè)教學資源庫不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理一、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的特點不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的凝膠不同。在不連續(xù)緩沖系統(tǒng)中,樣品加在孔徑大的濃縮膠上,而濃縮膠則聚合在小孔徑的分離膠之上。一、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的特點樣品直接加在濃縮膠形成的小槽中一、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的特點不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的主要優(yōu)點是凝膠上可加體積相當大的蛋白質(zhì)稀溶液,仍然可以使樣品的各組分得到良好的分離。
蛋白質(zhì)樣品在小孔徑的分離膠中分離之前,先經(jīng)過大孔徑濃縮膠的遷移作用而被濃縮至一極狹窄的區(qū)帶。我國當前應用的玉米種子鹽溶蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定,就是利用4.65%濃縮膠,PH3.2;9.3%分離膠,PH5.6的不連續(xù)緩沖系統(tǒng)。二、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理電泳分離樣品濃縮效應樣品分子篩效應電荷效應二、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理——樣品的濃縮效應濃縮膠為大孔徑膠,樣品在其中濃縮,并按其遷移率遞減的順序逐漸在其與分離膠的界面上積聚成薄層。分離膠為小孔徑膠,樣品在其中進行電荷效應和分子篩效應分離。
蛋白質(zhì)分子在大孔徑膠中受到的阻力小,移動速度快。進入小孔徑凝膠時的阻力大,速度就減慢了。
由于凝膠層的不連續(xù)性,因此在大孔徑與小孔徑凝膠的界面處就使蛋白質(zhì)樣品高度濃縮,堆積成層,形成一狹小的高濃度的蛋白質(zhì)區(qū)帶。二、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理——樣品的濃縮效應不連續(xù)系統(tǒng)濃縮效應示意圖二、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理——分子篩效應
樣品通過一定孔徑的凝膠時,小分子走在前面,大分子走在后面。二、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理——電荷效應
由于每種蛋白質(zhì)分子所載有效電荷不同,因而遷移率不同。
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