人教版生物選修3現(xiàn)代生物科技專題專題1基因工程1.2基因工程的基本操作程序

若使大腸桿菌通過基因工程改造能夠產(chǎn)生人的生長激素，大致要經(jīng)過哪幾個(gè)過程？1.2基因工程的基本操作程序一、目的基因的獲取二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞四、目的基因的檢測與鑒定1一、目的基因的獲取編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因具有調(diào)控作用的因子獲取方法：1、從基因文庫中獲取目的基因2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因3、化學(xué)方法人工合成21、從基因文庫中獲取目的基因?qū)⒑心撤N生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫?；蛭膸?/p>

基因組文庫部分基因文庫3某生物體內(nèi)全部DNA許多DNA片段受體菌群體1、從基因文庫中獲取目的基因限制酶與運(yùn)載體連接導(dǎo)入基因組文庫某種生物某個(gè)時(shí)期的mRNAcDNA反轉(zhuǎn)錄受體菌群體與運(yùn)載體連接導(dǎo)入部分基因文庫（cDNA文庫）42、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)?？梢垣@得大量的目的基因。5循環(huán)變性退火延伸6生物材料DNA目的基因的獲取mRNAcDNAPCR反轉(zhuǎn)錄cDNA文庫DNA一定大小范圍的DNA基因組文庫人工合成限制酶切7二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建——核心質(zhì)粒DNA分子限制酶處理兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端891.已知核苷酸序列，基因較小a.從基因文庫中獲取條件方法2.已知核苷酸序列,或部分序列,基因較大3.核苷酸序列未知，無mRNA4.已知相關(guān)基因?qū)?yīng)的mRNAb.從基因文庫中獲取或PCRc.從cDNA文庫中獲取或逆轉(zhuǎn)錄后PCRd.人工直接合成10三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化常用的受體細(xì)胞：有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。11三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法12三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法2.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞顯微注射技術(shù)提純基因表達(dá)載體體外顯微注射入受精卵受精卵移植13三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法2.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞顯微注射技術(shù)3.將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞Ca2+處理14四、目的基因的檢測與鑒定檢測—鑒定——①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等DNA分子雜交分子雜交（注意與上不同之處）抗原—抗體雜交15基因工程的基本操作程序目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測與鑒定1、從基因文庫中獲取目的基因2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因3、化學(xué)方法人工合成復(fù)制原點(diǎn)+目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)