【公開課課件】微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)（人教版2019選擇性必修3）

第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2第1章發(fā)酵工程高壓蒸汽滅菌液體培養(yǎng)基學(xué)習(xí)目標(biāo)核心素養(yǎng)1.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提。2．闡明無菌技術(shù)是在操作過程中，保持無菌物品與無菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)。3．概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法。1.科學(xué)思維：根據(jù)微生物的代謝類型分析培養(yǎng)基的組成。2．科學(xué)探究：討論并掌握無菌技術(shù)的實(shí)驗(yàn)操作方法；討論并掌握微生物的純培養(yǎng)的方法。（三）微生物的純培養(yǎng)

在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為培養(yǎng)物。2.微生物的純培養(yǎng)步驟：（1）配置培養(yǎng)基；（2）滅菌；（3）接種；（4）分離和培養(yǎng)。1.微生物的純培養(yǎng)的概念：由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)探究·實(shí)踐·酵母菌的純培養(yǎng)1.培養(yǎng)原理：微生物群分散或稀釋單個細(xì)胞單個菌落繁殖采用平板劃線法和稀釋涂布平板法將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后得到的單菌落一般是由單個微生物形成的純培養(yǎng)物。2.方法步驟（1）制備培養(yǎng)基

稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向?yàn)V液中加入20g葡萄糖、15～20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml。馬鈴薯(200g)去皮、切塊馬鈴薯塊加水(1000mL)煮沸紗布過濾濾液加葡萄糖/蔗糖(20g)加瓊脂加水定容(1000mL)酵母菌培養(yǎng)基探究·實(shí)踐·酵母菌的純培養(yǎng)滅菌

將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15～30min。將5～8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃滅菌2h。酵母菌培養(yǎng)基--高壓蒸汽滅菌轉(zhuǎn)移包牛皮紙錐形瓶加棉塞皮筋勒緊放入高壓蒸汽滅菌鍋中(100kPa、121℃)滅菌15~30min2.方法步驟（1）制備培養(yǎng)基探究·實(shí)踐·酵母菌的純培養(yǎng)①拔出錐形瓶的棉塞。②將瓶口迅速通過火焰。③用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基（10~20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋。④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒轉(zhuǎn)過來放置。④③①②防止瓶口微生物污染倒平板待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。2.方法步驟（1）制備培養(yǎng)基探究·實(shí)踐·酵母菌的純培養(yǎng)1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。2.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。

防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。4.怎么確定所倒平板未被雜菌污染？3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。問題討論（2）接種和分離酵母菌

通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法2.方法步驟探究·實(shí)踐·酵母菌的純培養(yǎng)1、將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。2、在火焰旁冷卻接種環(huán)，并拔出裝有酵母菌的棉塞3、將試管口通過火焰.4、將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，蘸取一環(huán)菌液5、將試管通過火焰，并塞上棉塞6、左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基7、灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連8、將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。平板劃線的具體操作步驟第1區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第2區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第3區(qū)劃線接種環(huán)滅菌接種環(huán)滅菌分區(qū)劃線法12345（1）接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次。（2）劃線首尾不能相接。（3）每次劃線前接種環(huán)進(jìn)行滅菌。（4）劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)。（5）不能劃破培養(yǎng)基，一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；存留在劃破處的單個細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。平板劃線法注意事項(xiàng):

為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者

殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個細(xì)胞殺死接種環(huán)上原有微生物問題討論灼燒時期目的取菌種前每次劃線前接種結(jié)束后（3）培養(yǎng)酵母菌

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板（一般做三組，重復(fù)實(shí)驗(yàn)）和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h；警示:①在實(shí)驗(yàn)室中，切不可飲食，離開實(shí)驗(yàn)室時一定要洗手，以防止被微生物感染。②使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境2.方法步驟探究·實(shí)踐·酵母菌的純培養(yǎng)結(jié)果分析與評價1.在未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有，說明了什么？2.在接種酵母菌的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了單菌落？這些菌落的顏色、形狀和大小是否一致？如果你觀察到了不同形態(tài)的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？

在未接種的培養(yǎng)基表面應(yīng)該沒有菌落生長，如果有，說明培養(yǎng)基被雜菌污染。

如果觀察到了不同形態(tài)的菌落，可能是接種的菌種不純或者無菌操作不規(guī)范等原因引起的。酵母菌的純培養(yǎng)1.制備培養(yǎng)基2.接種和分離酵母菌3.培養(yǎng)酵母菌倒平板的具體步驟平板劃線法的具體操作為什么要將平板倒置？為什么要同時放入未接種的平板？課堂總結(jié)思維訓(xùn)練·評估論點(diǎn)的可信程度

所謂“酵素”，就是“酶”的另一種說法。“酵素”制作就是利用微生物進(jìn)行無氧呼吸的原理，進(jìn)行像制作泡菜一樣的發(fā)酵。這樣制作的“酵素”中可能有糖類(包括-些簡單的糖和膳食纖維等)、蛋白質(zhì)(包括多種酶)、有機(jī)酸等成分，不存在它獨(dú)有的、特殊的營養(yǎng)物質(zhì)，其中甚至可能含有微生物發(fā)酵產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，食用后可能會危害人體健康。因此，“吃水果酵素可以美容、減肥、促進(jìn)消化和提高免疫力”的論點(diǎn)值得懷疑。1.某生物興趣小組將從葡萄皮上成功分離來的野生酵母菌分別接種于3個盛有等量同種液體培養(yǎng)基的錐形瓶中,并放置在搖床上培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速分別為210r/min，230r/min和250r/min。培養(yǎng)時間與酵母菌種群密度