質(zhì)量控制在保證疫苗的安全性和有效性中的作用

質(zhì)量控制在保證疫苗的安全性和有效性中的作用

中國(guó)藥品生物制品檢定所1整理ppt疫苗的適用人群

接種人群:-以健康人為適用人群-兒童2整理ppt疫苗的分類使用目的，主要分為

預(yù)防性疫苗，是目前主要的疫苗治療性疫苗預(yù)防性疫苗又可分為活疫苗：麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎、乙腦、OPV等滅活疫苗：狂犬、流感、IPV等重組疫苗：乙肝、HPV等亞單位和組份疫苗：流感亞單位疫苗，多糖類3整理ppt疫苗的兩個(gè)要素安全性

適用人群為健康人群，因此，安全性為首要考慮的要素本報(bào)告中安全性只涉及質(zhì)量控制保證疫苗的安全性，不涉及疫苗內(nèi)在原因產(chǎn)生的副反應(yīng)問(wèn)題。有效性有效性是指應(yīng)用該疫苗后，使個(gè)體達(dá)到預(yù)防感染該病原的能力

由于疫苗主要由病原體或大分子物質(zhì)（蛋白、多糖等）組成，存在較多的可變因素。在生產(chǎn)過(guò)程中進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制有助于保證疫苗的安全性和有效性，另外，保證疫苗質(zhì)量的連續(xù)性。疫苗的質(zhì)量控制涉及疫苗生產(chǎn)的全過(guò)程，遵守GMP原則，符合藥典中通則和個(gè)論的要求。4整理ppt第一部分：疫苗質(zhì)量控制中的安全性

考慮要點(diǎn)第二部分：疫苗質(zhì)量控制中的有效性

考慮要點(diǎn)

內(nèi)容5整理ppt一，起始原材料，須符合藥典中要求，重點(diǎn)考慮：

1.生產(chǎn)用菌毒種：例：減毒活疫苗，毒種的安全性考慮要點(diǎn)包括：神經(jīng)毒力（猴體試驗(yàn)或其它敏感動(dòng)物）毒種傳代穩(wěn)定性（突變、返祖），結(jié)合有效性制訂毒種代次2.生產(chǎn)用基質(zhì)原代細(xì)胞：重點(diǎn)為外源因子、逆轉(zhuǎn)錄酶等因素生產(chǎn)活疫苗時(shí)，應(yīng)來(lái)自SPF級(jí)動(dòng)物傳代細(xì)胞：制訂細(xì)胞庫(kù)，對(duì)外源因子、致瘤性檢定（限定代次）人二倍體細(xì)胞：鑒別、核型檢查等雞胚：制備毒種或活疫苗時(shí)應(yīng)為SPF級(jí)雞胚

第一部分：疫苗質(zhì)量控制中的安全性考慮6整理ppt起始原材料質(zhì)量控制3.動(dòng)物原性材料牛血清、胰酶等，進(jìn)行必要的外源因子檢測(cè)，不允許從瘋牛病疫區(qū)進(jìn)口此類原材料4.其它材料4.1化學(xué)試劑（滅活、裂解、純化、穩(wěn)定劑等）應(yīng)使用藥用級(jí)例：某企業(yè)的穩(wěn)定劑成份導(dǎo)致異常毒性不過(guò)關(guān)4.2生產(chǎn)用水4.3抗生素，嚴(yán)禁使用青霉素或β-內(nèi)酰胺類抗生素將來(lái)要求在細(xì)胞維持液中不得添加抗生素

7整理ppt

國(guó)產(chǎn)疫苗中慶大霉素檢測(cè)結(jié)果疫苗名稱批號(hào)結(jié)果（ug/ml）麻疹200805130146麻疹200805060142麻腮200805030170MMR200805050180風(fēng)疹200805130248麻風(fēng)200805100246麻疹20080512－10.037麻疹20080609－90.021流感－0.00018整理ppt國(guó)產(chǎn)疫苗中卡那霉素檢測(cè)結(jié)果疫苗名稱批號(hào)結(jié)果（ug/ml）水痘200807010281水痘200807020282水痘2008080944.4水痘2008090993.6MMR20080702011.6MMR20080709015.59整理ppt二、生產(chǎn)過(guò)程中控制，必須符合GMP原則1.生產(chǎn)條件嚴(yán)格控制，例如：1.1活疫苗培養(yǎng)溫度：OPV疫苗中溫度升高時(shí)，病毒容易返祖，導(dǎo)致猴體神經(jīng)毒力試驗(yàn)不過(guò)關(guān)。1.2滅活溫度及時(shí)間：對(duì)滅活疫苗至關(guān)重要，尤其是采用野毒株生產(chǎn)疫苗時(shí)。1955年發(fā)生在美國(guó)的“卡特門”事件，未充分滅活的脊灰疫苗導(dǎo)致60名兒童和89名接觸者發(fā)生脊髓灰質(zhì)炎。1.3病毒裂解劑濃度、溫度及時(shí)間：流感裂解不充分，在小年齡兒童中導(dǎo)致副反應(yīng)增加1.4純化設(shè)備及條件：防止純化能力下降后增加疫苗的副反應(yīng)

10整理ppt

三、生產(chǎn)材料產(chǎn)生的殘留物質(zhì)檢測(cè)

1.傳代細(xì)胞的外源DNA殘留量考慮DNA殘留量考慮殘留DNA片段大小2.傳代細(xì)胞的宿主蛋白殘留量安全性考慮制品純度考慮正在建立Vero細(xì)胞殘留蛋白含量檢測(cè)方法3.原代細(xì)胞宿主成份如：雞胚卵清蛋白4.內(nèi)毒素來(lái)源：生產(chǎn)材料中含有，容器具引入

總的來(lái)講，制品純度越高，上述殘留成份越少，疫苗的安全性越高11整理ppt企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果(Ave±2SD)總蛋白(ug/ml)卵清蛋白(ng/ml)企業(yè)的結(jié)果檢定所結(jié)果總蛋白卵清蛋白總蛋白卵清蛋白1≤400≤2000244.2±26.62.5±0.8175.8±2.828.3±61.82≤500≤750361.3±36.1551.0±102.3320.7±11.7583.3±115.73≤440≤1000193.0±26.9200.0±0.0212.0±43.5241.0±21.14≤300≤500238.6±16.3337.7±65.9162.2±7.1452.3±39.85≤300≤250248.5±15.1<125199.5±18.6130.9±57.56≤420≤1000281.5±31.0364.1±215.5258.9±29.8313.2±145.97≤540≤800345.8±34.522.6±32.5263.0±11.984.7±57.98≤500≤1000315.6±40.4507.6±119.6/401.8±77.69≤500≤1000374.6±57.4469.2±173.5282.3432.0±86.810≤240≤1000220.0322.0-370.012≤600≤400192.2±12.116.9±6.9192.4±29.787.5±60.513≤600≤1000277.1±13.524.4±11.6223.3±31.532.8±7.214/≤2000/200.0±0.0/187.0±37.015100-330≤100145.0±7.1<0.1129.8±0.86.0±0.7流感疫苗總蛋白、卵清蛋白檢驗(yàn)結(jié)果分析12整理ppt

四、生產(chǎn)工藝中引入的

殘留物質(zhì)檢測(cè)

1.培養(yǎng)基中成份:不使用人血清,可用人血白蛋白2.牛血清殘留(致敏物質(zhì))3.生產(chǎn)工藝中采用的化學(xué)試劑滅活劑：甲醛等滅活試劑裂解劑：Tween80,TritonX100,乙醚等防腐劑：硫柳汞，苯酚，2-苯氧乙醇佐劑：氫氧化鋁

特點(diǎn)：大多數(shù)為限度實(shí)驗(yàn)?zāi)承z測(cè)項(xiàng)目為生產(chǎn)過(guò)程中的控制，或在原液中進(jìn)行檢測(cè)，在成品中不含有檢測(cè)項(xiàng)目，企業(yè)應(yīng)建立可靠的檢測(cè)方法并進(jìn)行充分驗(yàn)證。如乙醚檢測(cè)，如采用人工嗅覺(jué)法則不可靠，而HPLC或氣相法則更加準(zhǔn)確。

13整理ppt異常毒性試驗(yàn)與疫苗的安全性異常毒性試驗(yàn)主要用于檢測(cè)疫苗中與制品無(wú)關(guān)的任何毒性，如錯(cuò)誤添加、混淆等導(dǎo)致的明顯的毒性。限于劑量和動(dòng)物數(shù)量，該試驗(yàn)不能充分反應(yīng)或代替疫苗的安全性。歐美國(guó)家要求工藝驗(yàn)證后，一般不再進(jìn)行該項(xiàng)目常規(guī)檢測(cè)。疫苗中的不安全因素在大量人群使用時(shí)得以體現(xiàn)只有進(jìn)行嚴(yán)格的生產(chǎn)過(guò)程控制，采用可靠、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法才能保證疫苗的安全性我國(guó)在異常毒性檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)一些問(wèn)題，如疫苗稀釋液滲透壓或凍干保護(hù)劑成份導(dǎo)致的注射后瞬間反應(yīng)。14整理ppt疫苗的有效性研發(fā)階段：主要依賴于臨床試驗(yàn)，在雙盲、隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)中確定生產(chǎn)階段：依靠嚴(yán)格的生產(chǎn)和質(zhì)量控制保證疫苗質(zhì)量（包括有效性）的連續(xù)性15整理ppt

第二部分：疫苗質(zhì)量控制中的

有效性考慮要點(diǎn)1.生產(chǎn)用菌毒種：核心問(wèn)題1.1與預(yù)防疾病的對(duì)應(yīng)關(guān)系：不同血清型1.2菌毒株的免疫原性：藥典中規(guī)定對(duì)主種子進(jìn)行免疫原性檢查，多數(shù)活疫苗規(guī)定在人體中檢查。

如：麻疹毒株主種子批，接種健康易感兒童至少30名，抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率不低于95％。1.3毒種傳代次數(shù)：尤其是減毒活疫苗，不同代次的免疫原性有差別。例如：OPV疫苗，毒種傳代次數(shù)有嚴(yán)格限定。1.4毒種保藏條件，一般為凍干或低溫保藏。16整理ppt2.生產(chǎn)用基質(zhì)傳代細(xì)胞和人二倍體細(xì)胞應(yīng)建立細(xì)胞庫(kù)系統(tǒng)，有效保證生產(chǎn)疫苗質(zhì)量的連續(xù)性。3.生產(chǎn)中控制培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基、血清等的細(xì)胞增殖能力收獲次數(shù)：限定收獲次數(shù)，細(xì)胞老化導(dǎo)致繁殖的病毒滴度變化中間品的保藏條件：防止抗原聚合，病毒滴度下降包裝材料：抗原吸附在容器上

17整理ppt18整理ppt19整理ppt疫苗有效性的保證鑒別試驗(yàn)：證明為本疫苗，防止混淆，尤其是多價(jià)疫苗有效成份含量1.活疫苗滴度：盡量采用凍干劑型，液體疫苗時(shí)需有合適的保護(hù)劑例如：OPV液體疫苗中添加1mol/L的MgCl,-20°C凍存保藏2.滅活疫苗中抗原含量采用可靠的方法準(zhǔn)確測(cè)定：基于抗原抗體的含量測(cè)定采用平行線法效期末標(biāo)準(zhǔn)：臨床試驗(yàn)確定的抗原含量放行標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)合穩(wěn)定性考核數(shù)據(jù)在效期末標(biāo)準(zhǔn)上適當(dāng)增加抗原含量，保證效期末標(biāo)準(zhǔn)例如：流感疫苗中有效成份標(biāo)示量為15ug/劑,穩(wěn)定性考核一年下降2ug/劑,則企業(yè)放行標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)為17/劑。3.制品的裝量：附加量保證可抽出體積20整理ppt流感疫苗血凝素趨勢(shì)圖21整理ppt重組乙型肝炎疫苗22整理ppt穩(wěn)定性：原液和半成品：制訂儲(chǔ)藏條件下的效期成品：進(jìn)行穩(wěn)定性檢查對(duì)凍干減毒活疫苗：熱穩(wěn)試驗(yàn)，熱穩(wěn)后滴度達(dá)到效期末標(biāo)準(zhǔn)水分含量測(cè)定：水分含量影響穩(wěn)定性，應(yīng)低于藥典中標(biāo)準(zhǔn)效力試驗(yàn)參考品：效力試驗(yàn)是疫苗有效性的核心，基于生物活性測(cè)定方法的高變異性，在效力測(cè)定時(shí)必須包含有明確含量標(biāo)示（以及變異范圍）的參考品，以便：1.證明該次測(cè)定有效2.對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行標(biāo)定3.監(jiān)測(cè)效力試驗(yàn)方法和參考品的變化趨勢(shì)若企業(yè)采用自制參考品，應(yīng)對(duì)國(guó)際參考品或國(guó)家參考品進(jìn)行校正，采用多次測(cè)定數(shù)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，確定含量及變異范圍，并保藏在合適條件下，制訂參考品的趨勢(shì)圖，監(jiān)測(cè)參考品的變化。23整理ppt

脊灰國(guó)家參考品滴定趨勢(shì)圖24整理ppt疫苗有效性總結(jié)臨床試驗(yàn)確定包括：劑量探索免疫原性：有替代指標(biāo)時(shí)保護(hù)效果：最有說(shuō)服力的證據(jù)上市后監(jiān)測(cè)：大量人群應(yīng)用后的實(shí)際效果生產(chǎn)中進(jìn)行控制保證疫苗的有效性包括：保證生產(chǎn)的連續(xù)性準(zhǔn)確的效力試驗(yàn)方法穩(wěn)定性25整理ppt定義生物制品批簽發(fā)，是指國(guó)家對(duì)疫苗類制品、血液制品、用于血源篩查的體外生物診斷試劑以及國(guó)家藥品管理當(dāng)局規(guī)定的其他生物制品，每批制品出廠上市或進(jìn)口時(shí)實(shí)行強(qiáng)制性資料審查、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)后決定是否簽發(fā)上市的管理制度。生物制品批簽發(fā)是一項(xiàng)重要的科學(xué)的生物制品管理制度。－國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局第11號(hào)令：生物制品批簽發(fā)管理辦法生物制品批簽發(fā)26整理ppt我國(guó)實(shí)行批簽發(fā)的法律基礎(chǔ)中華人民共和國(guó)藥品管理法（第四十一條）中華人民共和國(guó)藥品管理法實(shí)施條例（第三十九條）疫苗流通及預(yù)防接種管理?xiàng)l例(第十七條)生物制品批簽發(fā)管理辦法進(jìn)口藥品管理辦法生物制品批簽發(fā)27整理ppt生物制品批簽發(fā)批簽發(fā)產(chǎn)品的銷售《疫苗流通和預(yù)防接種管理?xiàng)l例》第十七條規(guī)定:疫苗生產(chǎn)企業(yè)、疫苗批發(fā)企業(yè)在銷售疫苗時(shí)，應(yīng)提供由藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)依法簽發(fā)的生物制品每批檢驗(yàn)合格或者審核批準(zhǔn)證明復(fù)印件，并加蓋企業(yè)印章。疫苗批發(fā)企業(yè)經(jīng)營(yíng)進(jìn)口疫苗的，還應(yīng)當(dāng)提供進(jìn)口藥品通關(guān)單復(fù)印件，并加蓋企業(yè)印章。疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、接種單位在接收或者購(gòu)進(jìn)疫苗時(shí)，應(yīng)當(dāng)向疫苗生產(chǎn)企業(yè)、疫苗批發(fā)企業(yè)索取前款規(guī)定的證明文件，并保存至超過(guò)疫苗有效期2年備查”。28整理ppt

我國(guó)批簽發(fā)實(shí)施過(guò)程準(zhǔn)備階段試行階段正式實(shí)施階段2001年12月我國(guó)開(kāi)始試行批簽發(fā)（EPI5種制品）2002年12月頒布了《生物制品批簽發(fā)管理辦法（試行）》2003年1月15日開(kāi)始正式實(shí)行批簽發(fā)2004年6月頒布了《生物制品批簽發(fā)管理辦法》2006年1月1日對(duì)所有疫苗實(shí)施批簽發(fā)管理2007年12月31日對(duì)所有血液制品實(shí)施批簽發(fā)管理生物制品批簽發(fā)29整理ppt生物制品批簽發(fā)執(zhí)行批簽發(fā)機(jī)構(gòu)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局主管全國(guó)批簽發(fā)工作。由國(guó)家藥品監(jiān)督管理當(dāng)局指定藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)承擔(dān)批簽發(fā)檢驗(yàn)和資料審核。30整理ppt生物制品批簽發(fā)批簽發(fā)制品質(zhì)量執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)生物制品批簽發(fā)檢驗(yàn)和/或資料審核的標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)行的《中國(guó)藥典》國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的其他藥品標(biāo)準(zhǔn)企業(yè)藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)

同時(shí)需提供制品生產(chǎn)國(guó)政府的批簽發(fā)合格證31整理ppt

批簽發(fā)方式資料審查資料審查及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

樣品檢驗(yàn)全部項(xiàng)目檢驗(yàn)部分項(xiàng)目檢驗(yàn)生物制品批簽發(fā)32整理ppt批簽發(fā)程序（1）生產(chǎn)企業(yè)檢驗(yàn)向授權(quán)省級(jí)所申請(qǐng)登記資料審查和現(xiàn)場(chǎng)抽樣資料及樣品中檢所資料審查和檢驗(yàn)部分樣品留授權(quán)省級(jí)所部分檢驗(yàn)合格證或不合格通知33整理ppt進(jìn)口批簽發(fā)程序（2）進(jìn)口報(bào)驗(yàn)口岸藥品監(jiān)督管理局通關(guān)海關(guān)監(jiān)管資料及樣品中檢所資料審查和檢驗(yàn)口岸藥品檢驗(yàn)所合格證或不合格通知34整理ppt生物制品批簽發(fā)企業(yè)申請(qǐng)批簽發(fā)時(shí)應(yīng)提供的資料批準(zhǔn)文件（下列其中之一）藥品批準(zhǔn)文號(hào)進(jìn)口藥品注冊(cè)證或醫(yī)藥產(chǎn)品注冊(cè)證體外生物診斷試劑批準(zhǔn)注冊(cè)證明提交資料生物制品批簽發(fā)申請(qǐng)表批制造及檢驗(yàn)記錄摘要檢驗(yàn)所需的同批號(hào)樣品企業(yè)質(zhì)量保證部門負(fù)責(zé)人簽字的質(zhì)量保證證明件進(jìn)口預(yù)防用疫苗類制品應(yīng)同時(shí)提交生產(chǎn)國(guó)國(guó)家藥品管理當(dāng)局出具的批簽發(fā)證明文件，并提供中文譯本。3