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DNA的復(fù)制和體外擴(kuò)增(總25)學(xué)習(xí)目標(biāo):1、概述DNA分子復(fù)制的時(shí)期、過程和條件說明DNA分子復(fù)制的特點(diǎn)2、 闡明DNA分子復(fù)制的實(shí)質(zhì) 概述DNA分子復(fù)制的生物學(xué)意義二、思考與討論:資料一:下圖為細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的過程,據(jù)圖回答相關(guān)問題:1、從時(shí)間上分析,該過程發(fā)生在細(xì)胞周期的哪個(gè)階段?能發(fā)生該過程的場(chǎng)所有哪些?2、 該過程大致分為哪幾個(gè)階段?3、 要完成上述過程需具備哪些條件?4、 從該過程上看,DNA復(fù)制具有哪些特點(diǎn)?資料2:下圖為細(xì)胞外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA示意圖,據(jù)圖回答問題:1、 圖中所利用的原理是什么?2、 ①過程加熱到90-95°,目的是什么?3、②過程降溫至55-60°的目的是讓引物與DNA單鏈結(jié)合,那么引物的化學(xué)本質(zhì)是什么?對(duì)引物上的堿基序列有什么要求?

4、 ③過程升溫至70-75°的目的是在DNA聚合酶的作用下由引物處延伸,從而形成完整的子鏈,該聚合酶與細(xì)胞內(nèi)的DNA聚合酶不同之處在哪里?5、 一個(gè)DNA分子經(jīng)過一次循環(huán)可獲得幾個(gè)DNA分子?如果把一個(gè)DNA分子放在PCR擴(kuò)增儀中,欲得到16個(gè)DNA分子,需進(jìn)行幾次循環(huán)?應(yīng)至少放入多少引物對(duì)?6、右圖為某DNA分子擴(kuò)增過程圖,到第幾輪循環(huán)結(jié)束時(shí)才能出現(xiàn)兩條鏈等長(zhǎng)的DNA分子?例題分析:二、DNA的復(fù)制結(jié)果B結(jié)果C[典例2](20XX年武漢模擬)科學(xué)家在研究DNA分子復(fù)制方式時(shí)進(jìn)行了如下的實(shí)驗(yàn)研究(已知培養(yǎng)用的細(xì)菌大約每20min分裂一次,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見相關(guān)圖示):結(jié)果B結(jié)果C(1)復(fù)制過程除需要模板DNA、脫氧核苷酸外,還需要 等(至少答兩點(diǎn))。⑵為了證明DNA復(fù)制的方式為半保留復(fù)制,請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)三(用圖示和相關(guān)文字補(bǔ)充在上圖中),并畫出結(jié)果C(同時(shí)含有14N和15N的DNA分子稱為中鏈DNA)。

(3)該過程中,實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)二起作用。若用15N標(biāo)記的DNA作為模板,用含14N標(biāo)記的培養(yǎng)基培養(yǎng),在坐標(biāo)圖中畫出連續(xù)培養(yǎng)細(xì)菌60分鐘過程中,15N標(biāo)記DNA分子含量變化的曲線圖。以15N標(biāo)記的DNA分子為親本,以14N的脫氧核苷酸為原料來合成DNA。1、據(jù)圖請(qǐng)繪出該DNA分子復(fù)制4次后試管中的子代DNA分子分布情況;在右圖繪出相應(yīng)的曲線。2、連續(xù)繁殖三代,則子代中含15N-DNA分子占總數(shù)的多少?子代中含15N的鏈占總鏈數(shù)的多少?3、如果親代DNA分子含1000堿基對(duì),其中A有300個(gè),連續(xù)復(fù)制三次共需C多少個(gè)?第三次需C多少個(gè)?變式訓(xùn)練:1970年,特明和巴爾的摩證實(shí)變式訓(xùn)練:1970年,特明和巴爾的摩證實(shí)7RNA病毒能依賴RNA合成DNA的過程,并發(fā)現(xiàn)了催化此過程的酶。下面為形成cDNA的過程和PCR擴(kuò)增過程示意圖。請(qǐng)根據(jù)圖解回答催化①過程的酶;核酸酶H的作用是 。③過程也稱為DNA的變性,此過程在溫度高達(dá)90?95°C時(shí)才能完成,說明DNA分子具有性。由圖中信息分析可知,催化②⑤過程的酶都是,兩者在作用特性上的區(qū)別是 。下圖表為反應(yīng)過程所用引物的序列,PCR過程中退火(復(fù)性)溫度必須根據(jù)引物的I”廠…引物對(duì)/I”廠…引物對(duì)/DNA|iHiij-i!^inJiiiiiiiijiiiiiiinniiiiiiiliiiminnb—模板DNA模極-?■Kiliii*iHiriiiiii!iiiiiMiiiiiLiihiii雄iiiiimiiiili圖2引物對(duì)與模板結(jié)合示意圖引物對(duì)P\AACIGAWTGTAGCTATCAnTTAAGTCCATTACTCI'AG引物對(duì)SIC1VCGAC1TAGTGGCTGTGBS2AGCTCGCGirrACCCTCC表1引物對(duì)序列表堿基數(shù)量和種類來設(shè)定。表1為根據(jù)模板設(shè)計(jì)的兩對(duì)引物序列,圖2為引物對(duì)與模板結(jié)合示意圖。請(qǐng)判斷哪一對(duì)引物可采用較高的退火溫度?某個(gè)DNA樣品有1000個(gè)脫氧核苷酸,已知它的一條單鏈上堿基A:G:T:C=1:2:3:4,則經(jīng)過PCR儀五次循環(huán)后,將產(chǎn)生 個(gè)DNA分子,其中需要提供胸腺嘧啶脫氧核苷酸的數(shù)量至少是 個(gè)。四、鞏固練習(xí):()四、鞏固練習(xí):()1、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)模擬生物體DNA的復(fù)制必需的一組條件是①酶②游離的脫氧核苷酸③ATP④DNA分子⑤信使RNA.⑥轉(zhuǎn)運(yùn)RNA.⑦適宜溫度⑧適宜的PH值A(chǔ).①②③④⑤⑥ B.②③④⑤⑥⑦C.n智狀DNA百分?jǐn)?shù)100%-50%-P1 2 3 4細(xì)畝分裂次數(shù)②③④⑤⑥⑦⑧ D.①②③④⑦⑧()2、一個(gè)被放射性元素標(biāo)記雙鏈DNA的噬菌體侵染細(xì)菌,若此細(xì)菌破裂后釋放出n個(gè)噬菌體,則其中具有放射性元素的噬菌體占總數(shù)A.1/n B.1/2n C.2/n D.1/2()3、具有100個(gè)堿基對(duì)的一個(gè)DNA分子片段,含有40個(gè)胸腺嘧啶,若連續(xù)復(fù)制3次,則第三次復(fù)制時(shí)需游離的胞嘧啶脫氧核苷酸數(shù)是A.60個(gè)B.120個(gè)C.240個(gè)D.360個(gè)()4、某個(gè)DNA片段由500對(duì)堿基組成,A+T占?jí)A基總數(shù)的34%,若該DNA片段復(fù)制2次,共需游離的胞嘧啶脫氧核苷酸分子個(gè)數(shù)為A.330 B.660C.990 D.1320()5、如果把細(xì)胞中的一個(gè)DNA分子用15N進(jìn)行標(biāo)記,然后放在含14N的培養(yǎng)基中連續(xù)分裂4次,則最后含有標(biāo)記的細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的A、1/32 B、1/16 C、1/8 D、1/46、下圖是有關(guān)DNA復(fù)制的示意圖,A—B—C表示大腸桿菌的DNA復(fù)制,D—E—F表示哺乳動(dòng)物的DNA復(fù)制。圖中“-”表示復(fù)制起始點(diǎn)。(1)若A中含48502個(gè)堿基對(duì),而子鏈延伸的速度是每分鐘105個(gè)堿基對(duì),則此DNA分子復(fù)制完成約需30s,而實(shí)際只需16s,根據(jù)A-C圖分析,是因?yàn)椋?) 哺乳動(dòng)物的DNA分子展開可達(dá)2m之長(zhǎng),若按A-C的方式復(fù)制至少需要8h,而實(shí)際上約6h左右。根據(jù)D—F圖分析,是因?yàn)?。?) A-C,D-F均有以下特點(diǎn):延伸的子鏈緊跟著解旋酶,這說明DNA分子復(fù)制■—(4)C與A,F(xiàn)與D相同,C、F能被如此準(zhǔn)確地復(fù)制出來,是因?yàn)?7.(6分)下圖為真核細(xì)胞中發(fā)生的一項(xiàng)生理過程示意圖,請(qǐng)據(jù)圖回答:⑴圖中表示的生理過程,此過程發(fā)生的主要場(chǎng)所。⑵該過程首先需要在 酶的作用下把兩條鏈解開;若圖中虛線框內(nèi)的堿基對(duì)“A—T”替換為“T—A”會(huì)引起生物性狀的改變,則這種變異屬于 。⑶已知一個(gè)親代DNA分子有P個(gè)堿基,其中腺嘌吟Q個(gè),連續(xù)進(jìn)行了此生理過程n次,共消耗游離的胞嘧啶脫氧核苷個(gè)。⑷若親代DNA分子經(jīng)過誘變,某位點(diǎn)上一個(gè)正常堿基(設(shè)為X)變成了5-漠尿嘧啶(BU)。誘變后的DNA分子連續(xù)進(jìn)行圖過程2次,得到4個(gè)子代DNA分子,相應(yīng)位點(diǎn)上的堿基對(duì)分別為BU—A、A—T、G—C、C—G,推測(cè)堿基X可能是.如圖是DNA的復(fù)制圖解,請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題:(1)DNA的復(fù)制發(fā)生在期。(2)②過程稱為。(3)指出③中的子鏈 。(4)子代DNA分子中只有一條鏈來自親代DNA分子,由此說明DNA的復(fù)制具有的特點(diǎn)。(5) 已知原來DNA中有100

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