光化學(xué)傳感器理論與實(shí)踐第七章

光化學(xué)傳感器理論與實(shí)踐第七章第一頁，共六十九頁，2022年，8月28日第一節(jié)識(shí)別原理

生物修飾傳感組成：由內(nèi)傳感器(普通光學(xué)波導(dǎo)傳感器或化學(xué)修飾光化學(xué)傳感器)和修飾的生物敏感層組成。

第二頁，共六十九頁，2022年，8月28日

識(shí)別原理：在生物修飾傳感器中，修飾的生物敏感層在對(duì)分析對(duì)象進(jìn)行生物識(shí)別的同時(shí)，能向普通光學(xué)波導(dǎo)傳感器或化學(xué)修飾光化學(xué)傳感器提供可檢測(cè)的光學(xué)信號(hào)。第三頁，共六十九頁，2022年，8月28日

特點(diǎn)：與分子或離子化學(xué)識(shí)別相比，生物識(shí)別有更高的選擇性與靈敏度。

第四頁，共六十九頁，2022年，8月28日具有生物識(shí)別功能的生物物質(zhì)

生物修飾敏感層目前應(yīng)用：生物修飾敏感層主要涉及酶，抗原或抗體。酶微生物抗原或抗體激素抗體結(jié)合蛋白植物凝血素第五頁，共六十九頁，2022年，8月28日酶相關(guān)知識(shí)酶的定義：是一類具有催化活性的蛋白質(zhì)分子?；钚曰鶊F(tuán)種類：組氨酸上的咪唑基、絲氨酸上的羥基、半胱氨酸上的巰基等酶特點(diǎn)(優(yōu)點(diǎn))非常高的催化效率非常高的特異性影響酶活性因素環(huán)境因素：pH值影響(最佳：生理pH7.4),抑制劑(Ag+、Hg2+、As3+等)存在使酶失活活性中心的空間構(gòu)象：獨(dú)特的三維結(jié)構(gòu)決定了酶發(fā)揮其活性的基礎(chǔ)第六頁，共六十九頁，2022年，8月28日

酶分子上的親核基團(tuán)有Ser-OH、Cys-SH、His-咪唑基等，這些富含電子的基團(tuán)(有孤對(duì)電子)，攻擊底物分子中電子云密度較小的親電子基團(tuán)，并供出電子，二者形成共價(jià)鍵，酶和底物形成一個(gè)不穩(wěn)定的中間物，進(jìn)而轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物。蛋白質(zhì)中三種主要的親核基團(tuán)第七頁，共六十九頁，2022年，8月28日全酶的結(jié)構(gòu)與分子組成全酶酶蛋白活性中心輔助因子蛋白鏈第八頁，共六十九頁，2022年，8月28日底物

活性中心以外的必需基團(tuán)結(jié)合基團(tuán)

催化基團(tuán)

活性中心

多肽鏈圖7-1酶活性中心示意圖底物敏感鏈第九頁，共六十九頁，2022年，8月28日類別功能舉例氧化還原酶促進(jìn)電子或氫轉(zhuǎn)移葡萄糖氧化酶轉(zhuǎn)移酶促進(jìn)化學(xué)基團(tuán)轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)氨酶水解酶促進(jìn)水解反應(yīng)蛋白、淀粉酶裂解酶促進(jìn)消去反應(yīng)形成雙鍵碳酸酐酶異構(gòu)酶促進(jìn)同分異構(gòu)體的相互轉(zhuǎn)變磷酸葡萄糖變化酶連接酶促進(jìn)鍵的形成，同時(shí)使ATP分子中的高能磷酸鍵斷裂谷氨酰胺合成酶酶的分類第十頁，共六十九頁，2022年，8月28日目前主要限于：氧化還原酶，轉(zhuǎn)移酶。原因：常常伴隨有可供光學(xué)檢測(cè)的物質(zhì)的產(chǎn)生或消耗;可直接采用普通光學(xué)波導(dǎo)傳感器作為內(nèi)傳感器器件;有時(shí)酶所催化的化學(xué)反應(yīng)可能不產(chǎn)生或不消耗可供檢測(cè)的物質(zhì)，但往往伴隨有易于被化學(xué)修飾光化學(xué)傳感器檢測(cè)的物質(zhì)（例如H＋、O2、NH3等）的生成與消耗。酶在光化學(xué)傳感器中應(yīng)用第十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日酶分化反應(yīng)速率方程(一)

E+SESP+E

(酶)(底物)(中間物)(產(chǎn)物)(酶)K1K-1K1葡萄糖(S)己糖激酶(E)復(fù)合物(ES)誘導(dǎo)契合作用例如：第十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日酶分化反應(yīng)速率方程(二)穩(wěn)態(tài)近似法：米氏方程(一):

米氏方程(二):

第十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日光學(xué)波導(dǎo)內(nèi)傳感器生物催化層底物產(chǎn)物酶圖7-2酶催化光化學(xué)傳感器識(shí)別原理底物產(chǎn)物樣品檢測(cè)器光極第十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日識(shí)別過程傳質(zhì)擴(kuò)散底物(分析對(duì)象)：樣品相生物催化層產(chǎn)物：生物催化層樣品相

穩(wěn)態(tài)響應(yīng)信號(hào)：產(chǎn)物生成速度恰好等于產(chǎn)物離開生物層的凈速度。分析對(duì)象濃度測(cè)定根據(jù)校正曲線+穩(wěn)態(tài)響應(yīng)信號(hào)(快響應(yīng))根據(jù)校正曲線+反應(yīng)速率(響應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng))第十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日免疫反應(yīng)免疫反應(yīng)：當(dāng)動(dòng)物體收到外界異性物質(zhì)（抗原）的侵入時(shí)，動(dòng)物體內(nèi)的免疫系統(tǒng)細(xì)胞就會(huì)產(chǎn)生一種與這些異性物質(zhì)相對(duì)抗的物質(zhì)（抗體），通過抗體與抗原的結(jié)合使抗原的作用消失。第十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日免疫反應(yīng)抗原：具有免疫原性與抗原特異性。按來源可分為天然抗原、人工抗原和合成原。一般為具有較大分子量的生物活性物質(zhì)，例如蛋白質(zhì)、多糖、核酸等，有時(shí)為小分子活性物質(zhì)(半抗原)，藥物，激素，肽等。第十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日免疫反應(yīng)抗體：是一類稱為免疫球蛋白的蛋白質(zhì)。五種免疫球蛋白包括IgG(主要)、IgA、IgM、IgD、IgE。第十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日-COOH端-NH2端圖7-3IgG分子結(jié)構(gòu)示意圖結(jié)合抗原碎片F(xiàn)ab可結(jié)晶碎片F(xiàn)c重鏈（heavychain，H鏈）450～550個(gè)氨基酸殘基，分子量約55～75kD。根據(jù)Ig重鏈抗原性的差異，Ig可分為五類即IgG、IgM、IgA、IgD、IgE，相應(yīng)H鏈為γ、μ、α、δ及ε鏈。第十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日五種免疫球蛋白結(jié)構(gòu)示意圖第二十頁，共六十九頁，2022年，8月28日抗體與抗原的結(jié)合力非極性作用氫鍵力作用庫侖力作用分子間吸引力立體排斥力通過-NH2-OH作用通過非極性側(cè)鏈作用通過兩側(cè)鏈相反電荷吸引通過范德華力作用通過結(jié)合部電子云互補(bǔ)抗原-抗體結(jié)合力的主要貢獻(xiàn)者抗體識(shí)別抗原分子的基礎(chǔ)第二十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日免疫光化學(xué)傳感器響應(yīng)免疫光化學(xué)傳感器響應(yīng)特點(diǎn)：與熱力學(xué)平衡有關(guān)第二十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日免疫光化學(xué)傳感器響應(yīng)抗原抗體檢測(cè)無需標(biāo)記：抗原-抗體結(jié)合前后會(huì)引起體系熒光強(qiáng)度或偏振程度的變化而直接被檢測(cè)。需標(biāo)記：無光學(xué)性質(zhì)變化，進(jìn)行熒光標(biāo)記?；虻诙?，共六十九頁，2022年，8月28日降低抗原-抗體結(jié)合力提高光化學(xué)傳感器的可逆性措施1.減少主體溶劑極性降低抗體－抗原之間的疏水相互作用從而降低抗原與抗體結(jié)合力(消極，因?yàn)椋航Y(jié)合力發(fā)、靈敏度下降)2.通過改變測(cè)量溫度降低結(jié)合力的方法(消極)3.通過緩釋技術(shù)，或競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合原理可以作成可逆響應(yīng)的光化學(xué)傳感器(積極)第二十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日第七章生物修飾傳感器第一節(jié)識(shí)別原理第二節(jié)基于普通光學(xué)波導(dǎo)傳感器的酶催化傳感器第三節(jié)基于化學(xué)修飾傳感器的酶催化傳感器第四節(jié)基于簡(jiǎn)單免疫體系的光化學(xué)傳感器第五節(jié)基于競(jìng)爭(zhēng)免疫體系的光化學(xué)傳感器第六節(jié)核酸生物修飾傳感器第二十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日第二節(jié)基于普通光學(xué)波導(dǎo)傳感器

的酶催化傳感器概念：當(dāng)酶催化反應(yīng)直接產(chǎn)生或消耗可供光學(xué)檢測(cè)的物質(zhì)時(shí)，可將相應(yīng)的酶固定于普通光學(xué)波導(dǎo)傳感器的探頭上，構(gòu)成酶催化傳感器。第二十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日第二節(jié)基于普通光學(xué)波導(dǎo)傳感器

的酶催化傳感器類型(根據(jù)檢測(cè)信號(hào)分)紫外吸收熒光(NADH體系

)化學(xué)發(fā)光(Luminol)第二十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日探測(cè)光纖信號(hào)光纖尼龍網(wǎng)堿性磷酸脂酶+404nm樣品+酶鎢燈例：基于堿性磷酸酯酶的普通光化學(xué)傳感器基于紫外吸收信號(hào)檢測(cè)的酶催化傳感器對(duì)-硝基苯基磷酸鹽對(duì)-硝基酚濾光片404.7nmPMT公共端Anal.Chem.1985,57,565第二十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日基于熒光信號(hào)檢測(cè)的酶催化傳感器基本上是與輔酶I(煙酰胺-腺嘌呤二核苷酸，NAD)參加的反應(yīng)聯(lián)系在一起NAD結(jié)構(gòu)式第二十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日關(guān)于輔酶I分子生物學(xué)意義：是參與生命體中能量代謝過程的重要物質(zhì)，在反應(yīng)中主要起遞氫作用。輔酶I類型還原型(NADH)：熒光較強(qiáng)

lEx=360nm,

lEM=460nm氧化型(NAD)：無熒光第三十頁，共六十九頁，2022年，8月28日分析對(duì)象固定化酶催化反應(yīng)文獻(xiàn)乳酸、丙酮酸鹵酸脫氫酶乳酸+NAD丙酮+NADH﹝7，8﹞葡萄糖葡萄糖脫氫酶葡萄糖+NAD葡萄糖酸內(nèi)酯+NADH﹝9﹞膽酸羥基類固醇脫氫酶3-羥基膽酸+NAD膽酸酮+DADH﹝10﹞乙醇醇脫氫酶乙醇+NAD乙醛+NADH﹝7，11﹞蘋果酸、草酸鹽蘋果酸脫氫酶蘋果酸+NAD草酸鹽+NADH﹝12﹞甘油-3-磷酸葡糖-6-磷酸-脫氫酶甘油-3-磷酸+NAD6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯+NADH﹝12﹞3-羥基-丁酸3-羥基-丁酸脫氫酶3-羥基-丁酸+NAD乙酰乙酸+NADH﹝12﹞輔酶I醇脫氫酶乙醇+NAD乙醛+NADH﹝12﹞睪酮雄（甾）酮羥基類固醇脫氫酶睪酮雄（甾）酮+NAD類固醇+NADH﹝12﹞表7-3檢測(cè)NADH熒光的脫氫酶催化傳感器第三十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日與NADH生成反應(yīng)耦合NADHNAD++心肌黃酶與NADH反應(yīng)產(chǎn)生更強(qiáng)熒光產(chǎn)物刃天青(無熒光)9-羥基異吩噁唑(強(qiáng)熒光)靈敏度提高2倍2.與NADH反應(yīng)產(chǎn)生紫外可見吸收NADHNAD++噻唑藍(lán)紫色甲臜強(qiáng)吸收lmax=558nm

心肌黃酶第三十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日硫胺素+H2O2HRP基于其它熒光體系的酶催化傳感器基于辣根過氧化酶(HRP)催化硫胺素的H2O2熒光傳感器：HRP結(jié)構(gòu)示意圖意義：是繼酶催化NADH熒光傳感器之后另一種非常有意義的酶催化熒光傳感器檢測(cè)H2O2本身；可檢測(cè)在酶催化反應(yīng)中生成H2O2的生物活性物質(zhì)(底物)硫胺熒(強(qiáng)熒光)+二硫化硫胺素(無熒光)第三十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日基于化學(xué)或生物發(fā)光信號(hào)檢測(cè)的酶催化傳感器該傳感器的顯著特點(diǎn)：體系只需要通過光學(xué)波導(dǎo)器件收集信號(hào)光，可直接將生物催化層修飾在光電檢測(cè)器上。基于化學(xué)或生物發(fā)光的酶催化反應(yīng)體系魯米諾(Luminol)+H2O2化學(xué)發(fā)光體系(最經(jīng)典)ATP-熒光素-O2-熒光素酶生物發(fā)光體系NADH-黃素單核苷酸(FMN)-氧化還原酶-O2-熒光素酶生物分化發(fā)光體系第三十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日魯米諾(Luminol)+H2O2化學(xué)發(fā)光體系許多氧化酶催化的反應(yīng)伴隨有H2O2產(chǎn)生，將氧化酶與過氧化酶固定在一起可建立靈敏的化學(xué)發(fā)光酶催化傳感器，用于檢測(cè)底物，如：尿酸、氨基酸、乳酸、葡萄糖、膽固醇、胺類、丙酮酸等。第三十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日ATP-熒光素-O2-熒光素酶生物發(fā)光體系A(chǔ)TP+熒光素+O2AMP+氧化熒光素+PPi+CO2熒光素酶hn(lmax=560nm)應(yīng)用：檢測(cè)ATP，DL=10-10molL-1其它有ATP參與的代謝過程所涉及的反應(yīng)物由Blum等人提出(Anal.Chim.Acta,1989,227,387)

第三十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日NADH-黃素單核苷酸(FMN)-氧化還原酶-O2-熒光素酶生物催化發(fā)光體系NADH+H++FMNNAD+FMNH2氧化還原酶FMNH2+RCHO+O2FMN+RCOOH+H2O熒光素酶hn(lmax=490nm)第三十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日應(yīng)用測(cè)定輔酶I(NADH)：

C.Haggertyet.al.,Anal.Biochem.,88,162(1978)檢測(cè)其它底物：與相應(yīng)底物脫氫酶耦合后，參與遞氫作用的輔酶I起指示物質(zhì)的作用L.J.Blumet.al.,Anal.Lett.,21,717(1988)第三十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日第七章生物修飾傳感器第一節(jié)識(shí)別原理第二節(jié)基于普通光學(xué)波導(dǎo)傳感器的酶催化傳感器第三節(jié)基于化學(xué)修飾傳感器的酶催化傳感器第四節(jié)基于簡(jiǎn)單免疫體系的光化學(xué)傳感器第五節(jié)基于競(jìng)爭(zhēng)免疫體系的光化學(xué)傳感器第六節(jié)核酸生物修飾傳感器第三十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日第三節(jié)基于化學(xué)修飾傳感器的酶催化傳感器第四十頁，共六十九頁，2022年，8月28日技術(shù)產(chǎn)生背景

有些酶催化的反應(yīng)不產(chǎn)生或不消耗可直接光學(xué)檢測(cè)的物質(zhì)，但涉及質(zhì)子的產(chǎn)生與消耗、氧氣的產(chǎn)生與消耗、酸性或堿性氣體(CO2或NH3)產(chǎn)生與消耗。這些物質(zhì)很容易被化學(xué)修飾光化學(xué)傳感器所檢測(cè)，故可采用相應(yīng)化學(xué)修飾光化學(xué)傳感器作內(nèi)傳感器構(gòu)建酶催化傳感器。第四十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日常用的內(nèi)傳感器種類氧光化學(xué)傳感器為內(nèi)傳感器；CO2光化學(xué)傳感器為內(nèi)傳感器；NH3光化學(xué)傳感器為內(nèi)傳感器。第四十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日氧光化學(xué)傳感器為基礎(chǔ)光極的酶催化傳感器傳感器的結(jié)構(gòu)與原理：以測(cè)量葡萄糖為例第四十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日葡萄糖樣品光學(xué)波導(dǎo)O2敏感熒光試劑葡萄糖葡萄糖酸氧化酶葡萄糖酸O2O2O2氣透膜生物催化層探測(cè)光激發(fā)信號(hào)光發(fā)射尼龍網(wǎng)+圖7-5氧光化學(xué)傳感器為基礎(chǔ)光極的葡萄糖生物傳感器內(nèi)傳感器氧光學(xué)傳感器第四十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日傳感器的特性樣品中葡萄的濃度越大，傳感器的熒光強(qiáng)度信號(hào)越大；檢測(cè)范圍0.1~20mmol/L；響應(yīng)時(shí)間幾分鐘之內(nèi)。第四十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日氨氣酶光極傳感器為基礎(chǔ)傳感器的酶催化傳感器傳感器的結(jié)構(gòu)與原理：以測(cè)量尿素為例NH2CONH2(尿素)+H2O2NH3+CO2脲酶第四十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日底物樣品光學(xué)波導(dǎo)底物NH3脫氨酶NH3氣透膜生物催化層探測(cè)光信號(hào)光圖7-6以氨氣酶光極為基礎(chǔ)傳感器的酶催化傳感器內(nèi)傳感器氨氣敏光極NH3酶支持膜HINDH+IND-+NH4+H++化學(xué)修飾層厚度(m)第四十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日傳感器的特性尿素的濃度越大，產(chǎn)生的NH3氣越多，使內(nèi)感器的吸收或熒光信號(hào)變化越明顯；檢測(cè)范圍5×10-5~1×10-2

mol/L，DL=5×10-5

mol/L；響應(yīng)時(shí)間約7分鐘。第四十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日第七章生物修飾傳感器第一節(jié)識(shí)別原理第二節(jié)基于普通光學(xué)波導(dǎo)傳感器的酶催化傳感器第三節(jié)基于化學(xué)修飾傳感器的酶催化傳感器第四節(jié)基于簡(jiǎn)單免疫體系的光化學(xué)傳感器第五節(jié)基于競(jìng)爭(zhēng)免疫體系的光化學(xué)傳感器第六節(jié)核酸生物修飾傳感器第四十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日第四節(jié)基于簡(jiǎn)單免疫體系的光化學(xué)傳感器第五十頁，共六十九頁，2022年，8月28日1.體系:一一對(duì)應(yīng)的免疫體系；適用范圍2.抗原抗體要有熒光活性：有內(nèi)源熒光的抗體（或抗原）：許多抗體或抗原的多肽鏈含有熒光活性的氨基酸殘基礎(chǔ)，如：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。第五十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日熒光標(biāo)記后的抗體（或抗原）對(duì)標(biāo)記物的要求：

(1)穩(wěn)定；(2)熒光發(fā)射光譜與背景熒光有明顯差別；(3)高熒光量子產(chǎn)率；(4)大的Stokes位移；(5)有合適的與抗原或抗體連接的法；(6)不影響抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)。第五十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日

主要基于抗原-抗體作用前后熒光強(qiáng)度的變化：非輻射熒光能量轉(zhuǎn)移：熒光熄滅

例：半抗原2,4-二硝基苯(DNP)DNP-賴氨酸+抗體→DNP-賴氨酸/抗體(有熒光活性)(無熒光活性)簡(jiǎn)單免疫熒光分析原理第五十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日輻射熒光能量轉(zhuǎn)移：熒光增強(qiáng)例：二甲氨基萘-5-磺酰(DANS)DANS-賴氨酸+抗體→DANS-賴氨酸/抗體(有熒光活性)(強(qiáng)熒光活性)熒光強(qiáng)度增加25-30倍抗原抗體結(jié)合前后微環(huán)境變化引起熒光增強(qiáng)度變化第五十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日構(gòu)建基于簡(jiǎn)單免疫體系的光化學(xué)傳感器1.采用熒光標(biāo)記物的簡(jiǎn)單免疫體系構(gòu)造光化學(xué)傳感F.V.Brightetal.,Anal.Chem.,62,1065(1990)第五十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日光纖端部HSA：人血清白蛋白Fab：抗人血清白蛋白抗體碎片熒光試劑：丹酰氯Fab

與HSA結(jié)合后使熒光標(biāo)記物的微環(huán)境改變，熒光增強(qiáng)KSCN溶液能將Fab與HSA分開，從而使傳感器再生。第五十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日2.酶聯(lián)免疫光化學(xué)傳感T.Vo-Dinhetal.,Appl.Spectrosc.,40,696(1986)非熒光物質(zhì)：與磷酸根相結(jié)合的4-甲基傘形酮與抗體結(jié)合的酶：堿性磷酸酯酶酶催化分解產(chǎn)物：4-甲基傘形酮酶，強(qiáng)熒光活性第五十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日EEEEEEEE激發(fā)發(fā)射酶催化反應(yīng)固定在池壁上的待測(cè)抗原非熒光酶底物E酶聯(lián)抗體酶催化產(chǎn)生的熒光活性物質(zhì)激發(fā)態(tài)的熒光活性物質(zhì)圖7-9酶聯(lián)免疫熒光傳感器原理示意圖第五十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日定量分析的依據(jù)：樣品中抗原濃度越大，結(jié)合酶聯(lián)抗體就越多，催化水解產(chǎn)生的游離4-甲基傘形酮越多，強(qiáng)熒光強(qiáng)度越強(qiáng)。第五十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日第七章生物修飾傳感器第一節(jié)識(shí)別原理第二節(jié)基于普通光學(xué)波導(dǎo)傳感器的酶催化傳感器第三節(jié)基于化學(xué)修飾傳感器的酶催化傳感器第四節(jié)基于簡(jiǎn)單免疫體系的光化學(xué)傳感器第五節(jié)基于競(jìng)爭(zhēng)免疫體系的光化學(xué)傳感器第六節(jié)核酸生物修飾傳感器第六十頁，共六十九頁，2022年，8月28日第五節(jié)基于競(jìng)爭(zhēng)免疫體系的光化學(xué)傳感器第六十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日原理：Optode-Ag+Ab*+AbOptode-Ag-Ab*+Optode-Ag-AbOptode-Ab+Ag*+AgOptode-Ab-Ag*+Optode-Ab-Ag或樣品中待測(cè)Ag(或Ab)越多，結(jié)合到光極探頭上的標(biāo)記物抗原Ag*(或標(biāo)記抗體Ab*)越少，傳感器的熒光強(qiáng)度越低。第六十