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專題九生物技術(shù)與工程思維導(dǎo)圖體系構(gòu)建第17講基因工程專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升1.科學(xué)家利用蘇云金桿菌的“殺蟲基因”轉(zhuǎn)到棉花里,讓棉花產(chǎn)生Bt抗蟲蛋白抵抗蟲害。檢測Bt基因是否插入到棉花的DNA上。請簡要寫出該方法的實(shí)驗(yàn)過程,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。(選擇性必修3P76“從社會(huì)中來”)__________________________________________________________________________________________________________________________________專題九生物技術(shù)與工程提示:將轉(zhuǎn)基因的棉花的基因組DNA提取出來,將含Bt基因的DNA片段進(jìn)行PCR技術(shù)擴(kuò)增,并將擴(kuò)增出的基因片段進(jìn)行電泳鑒定。若僅出現(xiàn)一條條帶,表明目的基因已插入到受體細(xì)胞的DNA中。教材剖析擴(kuò)展提升2.構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),為避免DNA片段和載體自身環(huán)化及基因表達(dá)載體等的任意拼接,應(yīng)采取何種措施?(選擇性必修3P80“文字信息”)__________________________________________________________________________________________________________________________________3.干擾素是一種具有干擾病毒復(fù)制作用的糖蛋白,臨床上被廣泛用于治療病毒感染性疾病。利用大腸桿菌可構(gòu)建干擾素工程菌,該工程菌不能生產(chǎn)有活性的干擾素,請解釋其原因。(選擇性必修3P90“資料卡”)__________________________________________________________________________________________________________________________________專題九生物技術(shù)與工程提示:采用不同的限制酶切割,產(chǎn)生不同的末端。提示:大腸桿菌為原核生物,無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體,不具備加工干擾素的能力。教材剖析擴(kuò)展提升4.轉(zhuǎn)基因植物所攜帶的目的基因可能傳遞給非轉(zhuǎn)基因植物,造成基因污染。如果將目的基因?qū)肴~綠體DNA中,就可以有效避免基因污染,原因是什么?(選擇性必修3P102“相關(guān)信息”)__________________________________________________________________________________________________________________________________5.治療性克隆獲得的組織器官在移植時(shí)一般不會(huì)出現(xiàn)排異反應(yīng),其根本原因是什么?(選擇性必修3P54“文字信息”)__________________________________________________________________________________________________________________________________專題九生物技術(shù)與工程提示:葉綠體基因不會(huì)通過花粉傳給下一代。提示:治療性克隆獲得的組織和器官的絕大多數(shù)遺傳物質(zhì)和患者相同。教材剖析擴(kuò)展提升1.有時(shí)為了滿足應(yīng)用需要,會(huì)在運(yùn)載體中人工構(gòu)建誘導(dǎo)型啟動(dòng)子,其目的是什么?2.做粗提取DNA的實(shí)驗(yàn)時(shí),常選用雞血細(xì)胞、豬肝細(xì)胞以及新鮮的洋蔥、菜花作為實(shí)驗(yàn)材料,而不選用豬血細(xì)胞,原因是什么?__________________________________________________________________________________________________________________________________專題九生物技術(shù)與工程答案:當(dāng)誘導(dǎo)物存在時(shí),可以激活或抑制目的基因的表達(dá)。答案:雞血、豬肝以及洋蔥、菜花的細(xì)胞中含有細(xì)胞核,而且以上材料容易獲得,而哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核和細(xì)胞器。教材剖析擴(kuò)展提升考點(diǎn)一基因工程(2022·廣東卷)“綠水逶迤去,青山相向開”大力發(fā)展低碳經(jīng)濟(jì)已成為全社會(huì)的共識(shí)?;谀承┧缶奶厥獯x能力,有研究者以某些工業(yè)廢氣(含CO2等一碳溫室氣體,多來自高污染排放企業(yè))為原料,通過厭氧發(fā)酵生產(chǎn)丙酮,構(gòu)建一種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù)。專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升回答下列問題:(1)研究者針對(duì)每個(gè)需要擴(kuò)增的酶基因(如圖)設(shè)計(jì)一對(duì)________,利用PCR技術(shù),在優(yōu)化反應(yīng)條件后擴(kuò)增得到目標(biāo)酶基因。(2)研究者構(gòu)建了一種表達(dá)載體pMTL80k,用于在梭菌中建立多基因組合表達(dá)庫,經(jīng)篩選后提高丙酮的合成量。該載體包括了啟動(dòng)子、終止子及抗生素抗性基因等,其中抗生素抗性基因的作用是________________________,終止子的作用是____________________________。(3)培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)重組梭菌大量表達(dá)上述酶蛋白時(shí),出現(xiàn)了生長遲緩的現(xiàn)象,推測其原因可能是________________________________,此外丙酮的積累會(huì)傷害細(xì)胞,需要進(jìn)一步優(yōu)化菌株和工藝才能擴(kuò)大應(yīng)用規(guī)模。專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升(4)這種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù),實(shí)現(xiàn)了________________,體現(xiàn)了循環(huán)經(jīng)濟(jì)特點(diǎn)。從“碳中和”的角度看,該技術(shù)的優(yōu)勢在于______________,具有廣泛的應(yīng)用前景和良好的社會(huì)效益。專題九生物技術(shù)與工程解析:(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目標(biāo)酶基因,首先需要根據(jù)目標(biāo)酶基因兩端的堿基序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物,引物與模板鏈結(jié)合后,Taq酶才能從引物的3′端延伸子鏈。(2)基因表達(dá)載體中,抗生素抗性基因作為標(biāo)記基因,可用于篩選含有基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞,終止子可終止轉(zhuǎn)錄,使轉(zhuǎn)錄在需要的地方停下來。(3)重組梭菌大量表達(dá)上述酶蛋白時(shí),在這些酶蛋白的作用下,二氧化碳等氣體大量用于合成丙酮,而不是用于重組梭菌的生長,所以會(huì)導(dǎo)致生長遲緩。(4)根據(jù)題意可知,這種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù),以高污染企業(yè)排放教材剖析擴(kuò)展提升的二氧化碳等一碳溫室氣體為原料,實(shí)現(xiàn)了廢物的資源化,體現(xiàn)了循環(huán)經(jīng)濟(jì)特點(diǎn)。從“碳中和”的角度看,該技術(shù)生產(chǎn)丙酮的過程不僅不排放二氧化碳,而且還可以消耗工業(yè)廢氣中的二氧化碳,有利于減緩溫室效應(yīng),并實(shí)現(xiàn)較高的經(jīng)濟(jì)效益,所以具有廣泛的應(yīng)用前景和良好的社會(huì)效益。專題九生物技術(shù)與工程答案:(1)引物
(2)作為標(biāo)記基因,篩選含有基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞終止轉(zhuǎn)錄,使轉(zhuǎn)錄在需要的地方停下來(3)二氧化碳等氣體用于大量合成丙酮,而不是用于重組梭菌的生長(4)廢物的資源化不僅不排放二氧化碳,而且還可以消耗工業(yè)廢氣中的二氧化碳教材剖析擴(kuò)展提升1.圖解基因工程的三種工具專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升2.圖解基因工程的操作步驟專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升3.圖解PCR相關(guān)知識(shí)專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升4.PCR擴(kuò)增圖解專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升5.圖解蛋白質(zhì)工程專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升特別提醒基因工程操作的四個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)(1)目的基因的插入位點(diǎn)不是隨意的,基因表達(dá)需要啟動(dòng)子與終止子的調(diào)控,所以目的基因應(yīng)插入啟動(dòng)子與終止子之間的部位。(2)基因工程操作過程中只有第三步(將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞)沒有堿基互補(bǔ)配對(duì)現(xiàn)象。(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法原理:農(nóng)桿菌易感染植物細(xì)胞,并將其Ti質(zhì)粒上的TDNA轉(zhuǎn)移并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上。(4)啟動(dòng)子≠起始密碼子,終止子≠終止密碼子;啟動(dòng)子和終止子位于DNA片段上,分別控制轉(zhuǎn)錄過程的啟動(dòng)和終止;起始密碼子和終止密碼子位于mRNA上,分別控制翻譯過程的啟動(dòng)和終止。專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升題點(diǎn)一:圍繞基因工程的操作工具,考查理解能力1.(2022·廣東廣州一模)下列有關(guān)DNA聚合酶和DNA連接酶的敘述錯(cuò)誤的是(
)A.二者的合成需要核糖體的參與B.二者在酵母菌的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均發(fā)揮作用C.二者在大腸桿菌的擬核和線粒體均有分布D.二者所催化的反應(yīng)要消耗細(xì)胞代謝產(chǎn)生的能量專題九生物技術(shù)與工程答案:C教材剖析擴(kuò)展提升題點(diǎn)二:通過基因工程的操作過程,考查綜合應(yīng)用能力2.(2022·廣東模擬預(yù)測)人體內(nèi)的t-PA蛋白能高效降解由纖維蛋白凝聚而成的血栓,是心梗和腦血栓的急救藥。通過基因工程技術(shù)可以大量制備基因工程藥物t-PA。(1)研究人員采用PCR技術(shù)可以獲得大量t-PA基因,PCR的原理是_________。此外,大量獲得t-PA基因的方法還有__________________(答出1種)。(2)高質(zhì)量的DNA模板是成功擴(kuò)增目的基因的前提條件之一,在制備DNA模板時(shí),可以用高溫處理的方法去除其中的蛋白質(zhì),原因是__________。(3)研究表明,為心?;颊咦⑸浯罅縯-PA會(huì)誘發(fā)顱內(nèi)出血,其原因在于t-PA與纖維蛋白結(jié)合的特異性不高,若將t-PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸,能顯著降專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升低出血副作用。據(jù)此,先對(duì)天然的t-PA基因進(jìn)行序列改造,然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達(dá)該改造后的基因,可制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白。(注:如圖表示相關(guān)的目的基因、載體及限制酶。pCLY11為質(zhì)粒,新霉素為抗生素。)請回答下列問題:專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升①以上制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白的過程被稱為__________。已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板鏈堿基序列為ACA,而絲氨酸的密碼子為UCU,因此改造后的基因決定第84位絲氨酸的模板鏈的堿基序列應(yīng)設(shè)計(jì)為________。②如圖所示,需選用限制酶XmaⅠ和________切開質(zhì)粒pCLY11,才能與t-PA改良基因高效連接。與單一酶酶切相比,本操作采用的雙酶切方法的優(yōu)點(diǎn)是_________________________________________________________________。③將連接好的DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌,含t-PA改良基因重組DNA分子的細(xì)胞應(yīng)具有的性狀是________A.新霉素抗性且呈藍(lán)色
B.新霉素敏感且呈藍(lán)色C.新霉素抗性且呈白色 D.新霉素敏感且呈白色專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升解析:(1)PCR是指體外合成DNA的技術(shù),其原理是DNA雙鏈復(fù)制。對(duì)于基因比較小,核苷酸序列已知,也可以直接使用DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成,此外還可從基因文庫中直接獲取。(2)根據(jù)蛋白質(zhì)在高溫條件下會(huì)變性失活,而DNA雖然在高溫時(shí)會(huì)變性,但在低溫時(shí)又會(huì)復(fù)性的特征,在制備DNA模板時(shí),可以用高溫處理的方法去除其中的蛋白質(zhì),從而獲得較純凈的DNA模板。(3)①天然的t-PA基因控制t-PA蛋白的合成,改良t-PA蛋白需要對(duì)天然的t-PA基因進(jìn)行序列改造,然后用改造的基因作為目的基因讓其表達(dá),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)天然蛋白質(zhì)的改造,題中性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白的過程被稱為蛋白質(zhì)工程,已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板鏈堿基序列為ACA,而絲氨酸的密碼子為UCU,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則可推測,改造后的基因決定第84位專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升絲氨酸的模板鏈的堿基序列應(yīng)設(shè)計(jì)為AGA。②目的基因兩端的黏性末端圖中已經(jīng)給出,觀察各限制酶的識(shí)別序列可知,限制酶XmaⅠ和BglⅡ切割產(chǎn)生的粘性末端能與目的基因的黏性末端堿基互補(bǔ),要想把目的基因與質(zhì)粒pCLY11(運(yùn)載體)拼接起來需要得到相同的黏性末端,因此質(zhì)粒pCLY11(運(yùn)載體)也需要限制酶Xma和BglⅡ切割;基因工程中最核心的一個(gè)環(huán)節(jié)為基因表達(dá)載體的構(gòu)建,其的是讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且遺傳給下一代,同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用,這里用兩種不同的限制酶切割質(zhì)粒的目的是為了使其呈現(xiàn)兩種不同的黏性末端分別與目的基因的兩個(gè)黏性末端連接,這樣可以保證目的基因和質(zhì)粒的正向連接,同時(shí)也可避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化。③結(jié)合圖示可知,限制酶XmaⅠ和BglⅡ會(huì)破壞質(zhì)粒pCLY11上的
專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升mLacZ,但不會(huì)破壞neor(新霉素抗性基因),導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌具有新霉素抗性,但由于mLacZ基因被破壞,因而菌落呈現(xiàn)白色,而導(dǎo)入pCLY11質(zhì)粒的大腸桿菌,既有新霉素抗性,且mLacZ基因也能正常表達(dá),因而菌落呈現(xiàn)藍(lán)色。當(dāng)然這里作為受體細(xì)胞的大腸桿菌應(yīng)該不具有pCLY11質(zhì)粒,據(jù)此可將成功導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌篩選出來。專題九生物技術(shù)與工程答案:(1)DNA半保留復(fù)制(DNA雙鏈復(fù)制)
(化學(xué)方法)人工合成、從基因文庫中獲取(2)蛋白質(zhì)在高溫條件下會(huì)變性失活,而DNA雖然在高溫時(shí)會(huì)變性,但在低溫時(shí)又會(huì)復(fù)性(3)蛋白質(zhì)工程AGA
BglⅡ防止質(zhì)粒載體(和目的基因)自身環(huán)化C教材剖析擴(kuò)展提升考點(diǎn)二DNA的粗提取與鑒定、DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定(2022·山東卷)關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn),下列說法錯(cuò)誤的是(
)A.過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解B.離心研磨液是為了加速DNA的沉淀C.在一定溫度下,DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色D.粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升解析:低溫時(shí)DNA酶的活性較低,過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解,A正確;離心研磨液是為了使細(xì)胞碎片沉淀,B錯(cuò)誤;在沸水浴條件下,DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色,C正確;細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶解于酒精,可能有蛋白質(zhì)不溶于酒精,在95%的冷酒精中與DNA一塊兒析出,故粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì),D正確。專題九生物技術(shù)與工程答案:B教材剖析擴(kuò)展提升1.DNA粗提取與鑒定原理和實(shí)驗(yàn)流程(1)原理①DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同,其中在物質(zhì)的量濃度為0.14mol/L時(shí)最低。②DNA不溶于冷卻的酒精,但是細(xì)胞中的一些有機(jī)物如某些蛋白質(zhì)則溶于冷卻的酒精,可以用冷卻的酒精提純。③DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)被染成藍(lán)色,因此,二苯胺可用來鑒定DNA分子。(2)實(shí)驗(yàn)流程實(shí)驗(yàn)材料的選取→破碎細(xì)胞,獲取含DNA的濾液→去除濾液中的雜質(zhì)→DNA的析出與鑒定。專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升(3)注意事項(xiàng)①實(shí)驗(yàn)材料的選?。悍彩呛蠨NA的生物材料都可以考慮,但是使用DNA含量相對(duì)較高的生物組織,成功的可能性更大。②提取和分離DNA用塑料離心管的原因:細(xì)胞破碎后釋放出的DNA,容易被玻璃容器吸附;由于細(xì)胞內(nèi)DNA的含量本來就比較少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就會(huì)更少。2.DNA片段的擴(kuò)增(1)原理:利用PCR在體外擴(kuò)增DNA分子。(2)實(shí)驗(yàn)用具:PCR儀、微量離心管、微量移液器。專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升(3)實(shí)驗(yàn)步驟。①移液:按配方用微量移液器向微量離心管中依次加入各組分;②離心:使反應(yīng)液集中在微量離心管的底部。③反應(yīng):設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序,將裝有反應(yīng)液的微量離心管放入PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)。專題九生物技術(shù)與工程3.DNA片段的電泳鑒定(1)原理①DNA分子中的可解離基團(tuán),在一定的pH條件下會(huì)帶上正電荷或負(fù)電荷。②在電場的作用下,這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。③在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。④凝膠中的DNA分子通過染色,在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來。教材剖析擴(kuò)展提升(2)實(shí)驗(yàn)步驟①制膠:提前將模具和梳子準(zhǔn)備好,用電泳緩沖液配制瓊脂糖溶液,在沸水浴或微波爐內(nèi)加熱至瓊脂糖熔化,稍冷卻后加入適量的核酸染料混勻,倒入模具,并插入梳子。②形成加樣孔:待凝膠溶液完全凝固,小心拔出梳子,取出凝膠放入電泳槽內(nèi)。專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升④電泳:接通電源,設(shè)定電壓,待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時(shí),停止電泳。⑤拍照:取出凝膠,置于紫外燈下觀察和照相。特別提醒
PCR實(shí)驗(yàn)操作的四點(diǎn)提醒(1)為避免外源DNA等因素的污染,所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前必須進(jìn)行高壓滅菌處理。(2)緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份,并在-20℃條件下儲(chǔ)存。(3)每添加一種試劑后,移液器上的槍頭必須更換。(4)混合均勻后要離心處理,使反應(yīng)液集中在離心管底部。專題九生物技術(shù)與工程教材剖析擴(kuò)展提升題點(diǎn)一:通過DNA粗提取和鑒定,考查
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