乳品檢測論文

生素殘留現(xiàn)狀和危害，以及各種抗生素殘留的檢測方法，為加強我國乳制品中的抗生素監(jiān)測，解決目前乳品工業(yè)發(fā)展中面臨的難題提供參考。口關(guān)鍵詞：乳制品；抗生素殘留；檢測方法口口乳及乳制品是老少皆宜的營養(yǎng)品，在我國，乳制品及乳制品工業(yè)發(fā)展迅速，同時畜牧業(yè)也發(fā)展迅猛，0-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等抗生素在乳畜飼養(yǎng)業(yè)中廣泛應(yīng)用，造成乳及乳制品中抗生素殘留，給消費者健康帶來了潛在威脅，因而提高抗生素殘留的檢測技術(shù)顯得尤其重要，盡快開發(fā)或引進先進的抗生素檢測技術(shù)以解決我國當(dāng)前乳和乳制品行業(yè)面臨的難題已成為當(dāng)務(wù)之急?！?抗生素殘留現(xiàn)狀口我國乳制品中抗生素的殘留現(xiàn)狀不容樂觀，2006年的一份對北京、天津、石家莊5個零售點的77個牛奶樣品進行0-內(nèi)酰胺酶的殘留檢測，63.6%的樣品檢測為陽性。一項對我國幾個大城市如西寧、南寧、廣州、杭州、泉州、北京等城市乳制品質(zhì)量的檢測調(diào)查結(jié)果顯示，在近八百份乳品采樣中，抗生素殘留超標(biāo)居不合格項目第一位?？?抗生素殘留的來源及其危害口乳和乳制品中抗生素殘留的來源要追尋到原料生產(chǎn)及其流通過程。首先，使用抗生素防治動物疫病。對患病奶牛用藥不當(dāng)及不遵守停藥期是造成牛奶中抗生素殘留的重要因素。其次，抗生素類飼料添加劑的使用。第三，飼養(yǎng)戶和經(jīng)營商為了保鮮，將抗生素人為添加到畜產(chǎn)品中，來抑制微生物的生長、繁殖，防止牛奶酸敗變質(zhì)，也是造成抗生素殘留超標(biāo)的重要因素。口從乳制品加工的角度來看，原料乳中抗生素殘留物嚴(yán)重干擾發(fā)酵乳制品的生產(chǎn)，抗生素殘留可嚴(yán)重影響干酪、黃油、發(fā)酵乳的起酵和后期風(fēng)味的形成。長期服用含低劑量抗生素殘留的乳制品，日積月累會危害人體健康。主要危害表現(xiàn)在：其一，毒性作用，如長期攝入氨基糖苷類抗生素嚴(yán)重超標(biāo)的乳產(chǎn)品可導(dǎo)致腎毒性和耳毒性。其二，過敏反應(yīng)。其三，病原菌耐藥性增加。其四，破壞人體胃腸道微生物菌群的動態(tài)平衡。其五，妨礙我國畜產(chǎn)品的國際貿(mào)易。口3抗生素殘留檢測方法的研究進展口目前抗生素殘留檢測的方法很多，基本上可以分為四大類型：一是經(jīng)典的微生物檢測方法；二是現(xiàn)代儀器分析方法；三是生化免疫分析法；四是專一試劑盒法?？?.1經(jīng)典微生物檢測法口其測定原理基于抗生素對微生物的生理機能、代謝的抑制作檢測用，因而與臨床應(yīng)用的要求一致，但其測定時間長且結(jié)果誤差較大。如TTC法、戴爾沃檢測(DelvotestSP)法、BY法等?！?.1.1TTC法□TTC法是國際上較早通用的標(biāo)準(zhǔn)測定法，也是我國鮮奶中抗生素殘留量檢驗標(biāo)準(zhǔn)(GB4689.27-94)規(guī)定的檢測法。如果牛奶中含有抗生素，則加入菌種(嗜熱鏈球菌)經(jīng)培育2.5-3h后，加入TTC指示劑(三苯基四氮唑)不發(fā)生還原反應(yīng)，所以樣品呈無色狀態(tài)；如果牛奶中不含抗生素，則樣品呈紅色。TTC法檢測的各種抗生素靈敏度如下：青霉素為0.004單位、鏈霉素0.5單位、慶大霉素0.4單位、卡那霉素5單位。TTC法主要對于青霉素類和氯霉素藥物敏感，但對鏈霉素不太敏感，對新霉素根本不敏感，并且消毒劑可干擾TTC試驗。TTC法檢測抗生素殘留雖然費用較低，但檢測方法消耗時間也相對較長，因此應(yīng)用受到一定限制?？诖鳡栁謾z測(DelvotestSP)法口是由荷蘭其試劑是由荷蘭DSM公司生產(chǎn)并由AOAC認(rèn)證。原理是利用微生物——嗜熱芽胞菌在64^條件下培養(yǎng)2.5?3h后會產(chǎn)酸，酸引起指示劑BCP(漠甲酚紫)變?yōu)辄S色；若牛奶樣品中不含抗生素，培養(yǎng)后樣品呈黃色，如樣品中含有抗生素，嗜熱芽胞菌生長受到抑制而無法產(chǎn)酸，指示劑將不變色?？蓹z測到0-內(nèi)酰胺類抗生素在內(nèi)的更多抗生素，如磺胺類、四環(huán)素類等，其中對青霉素和磺胺類抗生素特別靈敏。DelvotestSP法操作方便，嚴(yán)格實用，容易判斷，結(jié)果可靠，費用適中等優(yōu)點；但也易出現(xiàn)假陽性，此方法適用于農(nóng)場、企業(yè)、實驗室及政府監(jiān)測部門。□BY法口BY法，也稱藍黃檢測法，是一種廣譜的微生物抑制法，能在較短的時間里檢測到乳制品中抗生素的殘留，通過顏色的對比判斷陽性、陰性和可疑樣品。B-Linage等通過這種方法對0-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類等25種抗生素進行了檢測，其殘留的檢測限與歐盟規(guī)定的檢測限很接近。此方法耗時短，操從簡單，檢測抗生素種類較多，但誤差較大，容易誤檢。口3.2現(xiàn)代儀器分析方法口是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應(yīng)或理化特性，借助現(xiàn)代儀器對抗生素殘留進行精確分析的一種方法。如色譜法、熒光法、毛細(xì)管電泳、色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等?？谏V法有氣相色譜(GS)、高效液相色譜(HPLC)法、反相高效液相色譜法等。檢測的過程運用了色譜理論，通過高靈敏度的檢測器，分離速度快、效率高和操作自動化。一般要經(jīng)過樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟，能檢測抗生素的具體含量。蔡穎用反相HPLC法測定乳制品中土霉素、四環(huán)素和金霉素殘留量。檢測限為：土霉素為15.0瞄/kg、四環(huán)素為20.0^g/kg、金霉素為18.0pg/kg。JianWang等運用超高效液相色譜和飛行質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC/Q-TofMS)和LC/MS/MS測定牛奶中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的殘留量，其檢測限為：紅霉素40ug/kg，泰樂菌素50ug/kg，替米考星50ug/kg，能滿足各國對這六種0-內(nèi)酰胺類抗生素的最低檢出要求。口儀器分析方法分離速度快、效率高和自動化程度高，能檢測抗生素的具體含量，敏感性較高，結(jié)果準(zhǔn)確，但待檢樣品需經(jīng)一系列的預(yù)處理，繁瑣費時，還必須有相應(yīng)的價格昂貴的儀器設(shè)備。一般在大型實驗室使用，適合于精確測定。口3.3生化免疫法口目前應(yīng)用的生化免疫分析技術(shù)，是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析技術(shù)。其基本原理是抗原抗體的競爭性結(jié)合?？煞譃槊嘎?lián)免疫測定法(ELISA)、熒光免疫測定法(FIA)、免疫分析技術(shù)與常規(guī)理化分析技術(shù)聯(lián)用的方法等?？诿嘎?lián)免疫吸附測定(ELISA)：以待測抗原(或抗體)與酶標(biāo)抗體(或抗原)的特異結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)，通過酶活力測定來確定抗原(或抗體)含量。因為結(jié)合了免疫反應(yīng)和酶催化反應(yīng)，所以是一種特異而又敏感的技術(shù)。YONGJIN運用酶聯(lián)免疫法(ELISA)對慶大霉素的檢測限度為0.5ng/mL。Bucknal等運用免疫檢測法測定了在牛奶中幾種喳諾酮藥物的殘留量。酶聯(lián)免疫法測定，其敏感性和特異性好，檢測的靈敏度以普遍使用的0-內(nèi)酰胺類計：青霉素為5ppb，阿莫西林為10ppb，氨芐西林為10ppb，頭抱西林為8ppb。其檢測結(jié)果快速準(zhǔn)確，9分鐘內(nèi)即可檢測出牛奶中0-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、磺胺類等抗生素的殘留含量，可監(jiān)控牧場用藥的情況?？跓晒饷庖邷y定(FIA)法原理是應(yīng)用一對單克隆抗體的夾心法。底物用磷酸-4-甲基傘形酮，檢測產(chǎn)物發(fā)出的熒光，熒光強度與抗原抗體復(fù)合物(Mb)濃度呈正比，可在8min內(nèi)得出結(jié)果。結(jié)果以Mb每小時釋放的速率表示(AMb)表示。Huth已經(jīng)用熒光免疫法測定了牛奶中的6種0-內(nèi)酰胺類抗生素，得到它們的最低檢測限為：青霉素G3.2pg/kg、氨芐青霉素2.9^g/kg、羥氨芐青霉素3.6^/kg、頭抱匹林16.3^/kg；該法重復(fù)性好，具有快速、敏感、準(zhǔn)確的特點。留靈敏度極高，達到ng級水平；檢測快速、專一性強。由于此法的高度專一性，每檢測一種抗生素就要制備或購買相應(yīng)的抗原或抗體，導(dǎo)致檢測費用較高。因此生化免疫檢測法不可能取代色譜或光譜等常規(guī)分析方法，只能作為其重要的補充。□4專一試劑盒法口ECLIPSE試劑盒的原理是含有芽抱桿菌的瓊脂培養(yǎng)基和pH指示劑，當(dāng)在(65±1)°C下培養(yǎng)時，抱子發(fā)育生長，降低培養(yǎng)基pH值，在pH指示劑的作用下，藍(紫)色變?yōu)榫G-黃色。生鮮牛乳中的抗生素殘留使微生物生長和酸的產(chǎn)生受到抑制，由于沒有酸生成，顏色將不會改變。?！鮁CLIPSE試劑盒有ECLIPSE50和ECLIPSE100兩種試劑盒。ECLIPSE50的精確度雖然沒有ECLIPSE100的高，但其檢測限都符合歐盟標(biāo)準(zhǔn)，彌補了快速方法只能單一檢測某類抗生素的缺陷，同時提高了檢測的廣譜性和高靈敏度，同時也可以同歐盟等國家的先進檢測技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)接軌我國的牛奶事業(yè)提供非常有效和準(zhǔn)確的抗生素殘留檢測方法。且操作簡單，靈活性強，無需對樣品進行任何的處理，只需嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的方法進行操作，就能獲得理想的效果，且不易出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象，被檢樣品的需要量少，且費用低，越來越被廣泛應(yīng)用。口乳制品抗生素殘留的檢測方法很多，有的操作煩瑣,有的實驗條件要求高，有的檢驗時間太長；這些不僅會給乳制品生產(chǎn)企業(yè)造成經(jīng)濟上和時間上的損失，而且檢測結(jié)果常常會被原輔材料和人為操作等因素所影響。牛奶中抗生素殘留是涉及人類健康的公共衛(wèi)生問題，開發(fā)出越來越準(zhǔn)確、快速，誤差越來越小的檢測方法，方便地檢出乳和乳制品中抗生素殘留，凈化消費環(huán)境，就能為居民的身心健康提供保障，促進中國乳業(yè)健康發(fā)展?！鯀⒖嘉墨I口[1]□SHENGHUICUI,JINGYUNLI,CHANGQINHU,etal.DevelopmentofaMethodfortheDetectionof-LactamasesinMilkSamples[J].CUIETAL:JOURNALOFAOACINTERNATIONAL,2007,90(4):1128-1130.口[2]□盧兆蕓.乳和乳制品中抗生素殘留的危害及檢測方法[J].中國乳品工業(yè),2006,34(11):43-45.口[3]□Egna5J.FmarnadFoodReseacrh[J].JAPPIMieorbiol,1983,14(2):46-47.□[4]□JonesGM.On-farmtestfordrugresiduesinmilk[J].VirginiaTech,1995,26(5)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