獸醫(yī)微生物學腸桿菌科

獸醫(yī)微生物學腸桿菌科第一頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件0022

本科共同特性為：革蘭氏陰性、無芽孢的兼性厭氧菌，共28屬、110種。多為正常腸道菌群成員。沙門氏菌屬、志賀菌屬、以及埃希菌屬和耶爾森菌屬的部分成員對人和動物有廣泛的致病性，在公共衛(wèi)生和獸醫(yī)臨有重要意義。

第一節(jié)埃希菌屬本屬現有5個種，其中最重要的種是大腸埃希菌(E.coli)，俗稱大腸桿菌，下分血清型。本菌系人和溫血動物腸道內正常菌群成員之一。大腸桿菌常被用作糞便直接或間接污染的檢測指標（水、空氣）；本菌還是分子生物學和基因工程中重要的實驗材料和研究對象，原核表達。第二頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件0023一、形態(tài)染色特性大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢的桿菌，大小0.4-0.7um×2-3um，兩端鈍圓、散在，周身鞭毛可運動，多有菌毛。二、培養(yǎng)及生化特性本菌為兼性厭氧菌，在普通培養(yǎng)基上生長良好，在營養(yǎng)瓊脂上，形成圓形凸起、光滑、濕潤、半透明、灰白色菌落，徑約2-3mm；本菌大多可以發(fā)酵乳糖產酸產氣，麥康凱瓊脂上形成紅色菌落；在伊紅美藍瓊脂上產生黑色帶金屬閃光的菌落；一些致病性菌株在綿羊血平板上呈β溶血。第三頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件0024糞便中大腸桿菌的分離與鑒定10倍遞增稀釋鑒定、保存第四頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件0025空氣中大腸桿菌的分離與鑒定樣本37℃培養(yǎng)24h染色鏡檢純培養(yǎng)先進行初步生化鑒定，不確定的菌株再用API20E鑒定API20E鑒定試條第五頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件0026三、抗原及血清型大腸桿菌抗原主要有O、K和H三種，是本菌血清型鑒定的物質基礎。已確定的大腸桿菌O抗原有173種，K抗原有80種，H抗原有56種。大腸桿菌血清型可高達數萬種，但致病性大腸桿菌的血清型數量是有限的。1.O抗原耐熱，121C加熱2h不破壞其抗原性?？乖蕴禺愋詻Q定于脂多糖-LPS的特異多糖側鏈的結構。每個菌株只含有一種O抗原，用單因子抗O血清做玻板或試管凝集試驗鑒定之。2.K抗原熱不穩(wěn)定抗原，為被膜或莢膜、菌毛抗原。具有K抗原菌株不被抗O血清凝集，稱為O不凝集性。一個菌落可含1-2種不同K抗原，也有無K抗原的菌株。第六頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件0027第七頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件0028產腸毒素大腸桿菌(ETEC)ETEC系一類致人和幼畜(初生仔豬黃痢、犢牛、羔羊及斷奶仔豬腹瀉)腹瀉的最常見的病原性大腸桿菌。

其毒力因子主要由黏附素性菌毛和腸毒素兩類構成。初生幼畜被ETEC感染后常因劇烈水樣腹瀉和迅速脫水死亡，發(fā)病率和死亡率均很高。

(1)黏附性菌毛，能黏附于宿主的小腸上皮細胞，故又稱其為黏附素或定居因子，對其抗原稱作黏附素抗原或定居因子抗原。第八頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件0029(2)腸毒素是ETEC在體內或體外生長時產生并分泌到胞外的一種蛋白質性毒素。分為:

不耐熱腸毒素(LT：heat-labileenterotoxin)和

耐熱腸毒素(ST:heatstabileenterotoxin)二種。可使腸細胞分泌機能亢進，引起水樣腹瀉和迅速脫水。

LT對熱敏感，有抗原性，65℃30min即被滅活。

ST耐熱，無抗原性，它耐100℃加熱30min而不失活，能抵抗多種蛋白酶作用。2.產類志賀毒素大腸桿菌(SLTEC)

系一飛在體內或體外生長時可產生類志賀毒素(SLT)的病原性大腸桿菌。第16章第九頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00210

在動物SLTEC可致豬的水腫病，以頭部、腸系膜和胃壁漿液性水腫為特征，常伴有共濟失調、麻痹或驚厥等神經癥狀，發(fā)病率較低但致死率很高。發(fā)現SLTEC與犢牛出血性結腸炎有關，在致幼兔腹瀉的大腸桿菌菌株中也查到SLT。

其毒力因子包括粘附性菌毛和致水腫病2型類志賀毒素。

(1)粘附性菌毛，F18菌毛是豬水腫病的SLTEC菌株的一個重要的毒力因子，它有助于細菌在豬腸黏膜上皮細胞定居和繁殖。

(2)致水腫病2型類志賀毒素。第十頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00211毒力島EHEC具有35kbLEE毒力島p105禽致病性大腸桿菌（APEC）:引起禽類急性的、系統(tǒng)性疾病的病原性大腸桿桿菌。表現為：氣囊炎、肺炎、心包炎、肝周炎等第十一頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00212（四）大腸桿菌主要毒素基因的檢測5重PCR方法檢測5種主要毒素基因—STa、STb、LTa、Stx1和Stx2/Stx2e；對動物舍環(huán)境中分離到的380株大腸桿菌進行了檢測：

5個雞舍—117株

5個豬舍—120株

6個牛舍—143株380株第十二頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00213Multiplex-PCR特異性檢測N

M

123456789

M664bpStx1

484bpStx2/Stx2e

360bpSTb

282bp

LTa

183bpSTa

1,E.coliC83600;2,E.coliC83710;3,E.coliC83600;4,E.coliisolatedfromair;5,E.coliSDZ21;6,E.coliSDZ15;7,E.coliH30;8and9,E.coliisolatedfromair;N,Negativecontrol;M,DL2000DNAMarker第十三頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00214五、微生物學診斷分離與鑒定程序可參見圖8-1,p106。采病料分離培養(yǎng)敗血癥病例采集內臟組織（肝\脾\腎等），對幼畜腹瀉及豬水腫病病例應取其各段小腸內容物或黏膜刮取物以及相應腸段的腸系膜淋巴結，分別在麥康凱平板和血平板上劃線分離培養(yǎng)。2.可疑菌落生化鑒定挑取麥康凱平板上的紅色菌落或血平板上呈β溶血(仔豬黃痢與水腫病菌株)的典型菌落幾個，分別轉種三糖鐵（TSI）培養(yǎng)基和普通瓊脂斜面做初步生化鑒定和純培養(yǎng)。第十四頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件002153.純培養(yǎng)物抗原鑒定將TSI瓊脂反應模式符合埃希氏菌屬的生長物或其相應的普通斜面純培養(yǎng)物做O、K抗原鑒定。4.檢測毒力因子確定其屬于何類致病性大腸桿菌。六、防治

1.目前已有菌苗，包括抗粘附素的含單價或多價菌毛抗原的滅活全菌苗或亞單位苗；

2.抗腸毒素的類毒素苗；

3.表達一種或兩種粘附素以及同時表達一種粘附素和腸毒素的基因工程菌苗等。用這些菌苗免疫懷孕母畜后，均能使其后代從初乳中獲得抗體而被動保護。第十五頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件002164.用多種常見O抗原的雞大腸桿菌滅活油佐劑菌苗，給各種日齡雞注射后可獲得較好的預防效果，免疫力可達3-5月不等。

5.對豬水腫病預防，用由幾種常見O抗原菌株制成的滅活菌苗，小試結果表明，此苗能較顯著減少仔豬群中該訴的發(fā)病率，保護率約60％-70％。

6.生物學方法微生態(tài)制劑。

7.抗菌藥物耐藥菌株產生，藥敏試驗。第十六頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00217第二節(jié)沙門氏菌屬

沙門氏菌屬是一群革蘭氏陰性無芽孢桿菌，通常都以周生鞭毛運動。在三糖鐵瓊脂上常產生H2S，大多沙門氏菌不發(fā)酵乳唐。絕大多數沙門氏菌對人和動物有致病性，能引起人和動物的多種不同臨床表現的沙門氏菌病，并為人類食物中毒的主要病原之一，在醫(yī)學、獸醫(yī)和公共衛(wèi)生上均十分重要。沙門氏菌血清型復雜，有2500種以上。幾乎包括所有對人和動物致病的血清型菌株。第十七頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00218一、形態(tài)及染色特性形態(tài)染色特性與同科其他菌屬相似，呈桿狀，，革蘭氏陰性。除雛沙門氏菌和雞沙門氏菌無鞭毛不運動外，其余均有周生鞭毛可運動，大多數有菌毛。二、培養(yǎng)及生化特性本屬大多數細菌的培養(yǎng)特性與埃希氏菌屬相似。沙門氏菌在肉湯瓊脂上生長貧瘠，形成較小的菌落。在腸道菌鑒別或選擇性培養(yǎng)基上，大多數菌株因不發(fā)酵乳糖而形成無色菌落。

在SS培養(yǎng)基生長良好!第十八頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00219三、抗原及變異沙門氏菌具有O、H、K和菌毛四種抗原。

O和H抗原是其主要抗原，構成沙門氏菌血清型抗原。

O抗原是耐熱多糖LPS抗原，100℃2.5h不被破壞。一個菌體可有幾種O抗原成分，以數字表示。將有共同O抗原(群因子)的血清型菌歸為一群，以大寫英文字母表示A-F。

K抗原是部分沙門氏菌表面包膜抗原，又稱為Vi抗原，不耐熱，60℃1h破壞。

H抗原是鞭毛抗原，有63種，不耐熱，60℃30-60min破壞。H抗原可分為第1相和第2相兩種。

第十九頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00220

本菌屬至少已有2500個血清型。對人和動物致病的血清型絕大多數屬于A-F群，在疾病中經常出現的卻不足50種。四、致病性本屬菌均有致病性，具有極其廣泛的動物宿主。感染動物后常導致嚴重的疾病，并成為人類沙門氏菌病的傳染源之一。因此，沙門氏菌病是一種重要的人畜共患病。發(fā)病本菌最常侵害幼、青年動物，使之發(fā)生敗血癥、胃腸炎及其他組織局部炎癥。第二十頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00221第16章

對成年動物則引起散發(fā)性或局限性沙門氏菌病，發(fā)生敗血癥的懷孕母畜可表現流產，在一定條件下亦引起急性流行性暴發(fā)。傳播沙門氏菌常在動物與動物、動物與人、人與人之間通過直接或間接的途徑傳·播，沒有中間宿主。

主要傳染途徑是消化道。許多環(huán)境條件，如衛(wèi)生不良、過度擁擠、氣候惡鄉(xiāng)等均可增加易感動物發(fā)病。五、致病性類型根據對宿主嗜性不同，可將沙門氏菌分成三群。第二十一頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00222第一群具有高度專嗜性沙門氏菌，它們只對人或某種動物產生特定的疾病。例如雞白痢和雞傷寒沙門氏菌僅使雞和火雞發(fā)病，馬流產、牛流產和羊流產等沙門氏菌；豬傷寒沙門氏菌僅侵害豬。第二群是在一定程度適應于特定動物的偏嗜性沙門氏菌，如豬霍亂和都柏林沙門氏菌，分別是豬和牛羊的致病菌。第三群是泛嗜性沙門氏菌，它們有廣泛宿主譜，能引起人和各種動物的沙門氏菌病，具有重要的公共衛(wèi)生意義。如鼠傷寒和腸炎沙門氏菌等。第二十二頁，共二十四頁，2022年，8月28日課件00223六、毒力因子沙門氏菌毒力因子有多種，主要有脂多糖(LPS)

、

腸毒素、細胞毒素及毒力基因等。七、免疫性體液抗體與細胞免疫在抗沙門氏菌感染中都很重要。認為細胞免疫在抗沙門氏菌感染中具有重要作用。八、微生物學診斷

1.未污染病料直接接種普通瓊脂、血瓊脂或SS鑒別培養(yǎng)基平板分離細菌；

2.污染材料如飲水、糞便、飼料、腸內容物和已敗壞組織等，常需要增菌培養(yǎng)基增菌后再行分離。第二十三頁，共二十四頁，2022年，