【課件】2023屆高三生物一輪復(fù)習(xí)課件：發(fā)酵工程復(fù)習(xí)

重點：①制作原理？②各發(fā)酵菌種的代謝類型、來源、溫度？③制作流程？④畫出一套可以不用開蓋放氣的果酒、果醋制作裝置，并分析。⑤注意事項：見后面課件，最?？际马椚缦拢号莶酥谱髦宣}水煮沸的原因？用水密封泡菜壇的目的？P6泡菜壇裝八成滿的原因？—P6果酒發(fā)酵罐發(fā)酵液不可裝滿，要留出1/3的原因？—P7該補充課本的補充課本，整理+背誦+做題→理解通透、活學(xué)活用區(qū)分概念：發(fā)酵：指人們利用微生物，在適宜的條件下，將原料通過微生物的代謝轉(zhuǎn)化為人類所需要的產(chǎn)物的過程。（1）傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)：直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次發(fā)酵保存下來的面團、鹵汁等發(fā)酵物中的微生物進行發(fā)酵、制作食品的技術(shù)一般稱為傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)。P5（2）發(fā)酵工程：利用微生物的特定功能，通過現(xiàn)代工程技術(shù)，規(guī)?；a(chǎn)對人類有用的產(chǎn)品，它涉及菌種的選育和培養(yǎng)、產(chǎn)物的分離和提純等方面（章首頁P1）一、發(fā)酵菌種比較二、發(fā)酵原理P5需氧型水果果皮表面附著的野生酵母菌空氣中的毛霉孢子整理在課本整理在課本⑧向壇蓋邊緣的水槽中注滿水目的:⑩腌制過程會出現(xiàn)溶液量增多現(xiàn)象，原因？1.泡菜制作流程：4步配制鹽水用清水和食鹽配制質(zhì)量百分比為5%-20%的鹽水→鹽水煮沸→冷卻待用原料處理、蔬菜裝壇新鮮蔬菜洗凈→切條塊、混勻→晾干；裝至半壇→加調(diào)味料→繼續(xù)加菜至八成滿調(diào)味；抑制其他微生物生長a.殺滅鹽水中的微生物b.去除水中的溶解氧⑩裝八成滿原因：a.防止其他微生物發(fā)酵產(chǎn)生CO2而導(dǎo)致發(fā)酵液溢出壇外(發(fā)酵初期，酵母菌、大腸桿菌等較為活躍，發(fā)酵產(chǎn)物中有較多CO2)b.防止因裝太滿使鹽水未完全淹沒菜料而導(dǎo)致菜料腐爛變質(zhì)加鹽水封壇發(fā)酵將冷卻好的鹽水緩緩倒入壇中，鹽水沒過全部菜料→蓋好壇蓋向壇蓋邊緣的水槽中注滿水→發(fā)酵過程中經(jīng)常向水槽中補充水根據(jù)室內(nèi)溫度控制發(fā)酵時間抑菌、無氧環(huán)境防止高溫殺死菜料表面的乳酸菌增加乳酸菌的含量，使其在短時間內(nèi)形成菌種優(yōu)勢保證壇內(nèi)乳酸菌發(fā)酵所需的無氧環(huán)境⑨選用新鮮蔬菜的原因⑩調(diào)味料、香辛料作用：調(diào)味、抑菌新鮮蔬菜亞硝酸鹽含量少，營養(yǎng)物質(zhì)豐富外界溶液濃度高，使蔬菜滲透失水整理在課本P6過高：乳酸發(fā)酵將受抑制；過低：雜菌易繁殖，導(dǎo)致泡菜變質(zhì)1.泡菜制作中，哪些操作制造的“無氧環(huán)境”？a.選擇的泡菜壇要有很好的氣密性；b.鹽水煮沸后冷卻待用；c.加入蔬菜后要注入鹽水并沒過全部菜料；

d.蓋上壇蓋，并用水密封泡菜壇。2.泡菜發(fā)酵初期，泡菜壇的水槽內(nèi)會有間歇性的氣泡冒出，試分析產(chǎn)生氣泡的原因。3.泡菜壇內(nèi)有時會長一層白膜，白膜的形成原因？4.制出的泡菜“咸而不酸”，最可能原因？P8-2

食鹽過多（、溫度過低）抑制了乳酸菌的發(fā)酵。5.泡菜發(fā)酵時間是否越長越好？不是，一方面,發(fā)酵時間過長，可能產(chǎn)生其他有害物質(zhì)；

另一方面，發(fā)酵時間過長，乳酸含量過高，口味不佳。酵母菌等微生物進行細胞呼吸產(chǎn)生CO2思考泡菜制作的其他問題：白膜是由于產(chǎn)膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厭氧菌，泡菜發(fā)酵液營養(yǎng)豐富，表面O2含量豐富，適合酵母菌繁殖。整理在課本P64.腌制中乳酸菌、乳酸和亞硝酸鹽含量的變化發(fā)酵時期乳酸菌乳酸亞硝酸鹽發(fā)酵前期發(fā)酵中期發(fā)酵后期變化曲線

增加

(蔬菜中的硝酸鹽------→亞硝酸鹽)

達到最多后開始下降原因：①缺氧和酸性環(huán)境抑制硝酸鹽還原菌

生長，使亞硝酸鹽產(chǎn)生量降低②部分亞硝酸鹽被分解

下降至保持相對穩(wěn)定（硝酸鹽還原菌被完全抑制）少（壇內(nèi)有O2，乳酸菌活動受抑制。大腸桿菌、酵母菌等進行有氧呼吸，消耗O2，為乳酸菌提供無氧環(huán)境，乳酸菌開始繁殖，產(chǎn)生乳酸）乳酸菌最多；乳酸積累增多，PH下降（由于前期乳酸的積累、無氧環(huán)境的形成，乳酸菌逐漸占據(jù)優(yōu)勢，乳酸積累增多，其他微生物受到抑制）乳酸菌數(shù)量下降；乳酸含量繼續(xù)增加（乳酸增加，PH下降，當(dāng)達到一定程度時，抑制了乳酸菌的活性，發(fā)酵速度逐漸變緩甚至停止）整理在課本P8硝酸鹽還原菌泡菜制作過程中影響亞硝酸鹽含量的因素有哪些？P6

腌制方法、腌制時間長短、溫度高低等量的變化：菌種的（先增后穩(wěn)定（占優(yōu)勢）、減少（營養(yǎng)物質(zhì)、PH下降、代謝物積累等））、

雜菌的（先增后減，不占優(yōu)勢）、

產(chǎn)物的、

亞硝酸鹽的充氣口：排氣口：出料口：取樣檢測、放出發(fā)酵液2.考察重點——果酒、果醋的發(fā)酵裝置改良P8-3作用：酒精發(fā)酵時，排出CO2。排氣口要通過曲頸管與瓶身連接目的？

防止空氣中雜菌的污染。改進：充氣口塞入棉花或安裝其他過濾裝置，防止雜菌污染密封：泡菜——密封，無氧環(huán)境果酒——密封但要排氣、

果醋——通氣①泡菜壇：要有很好的氣密性；蓋上壇蓋，并用水密封泡菜壇。

②鹽水煮沸后冷卻待用；③鹽水沒過全部菜料下面是家庭釀造甜米酒的具體操作過程：先將米加熱煮至七成熟，待其冷卻至30℃左右，加少許的水和一定量的“酒藥”（實際是酵母菌菌種），與米飯混合后置于一瓷壇內(nèi)，在米飯中央挖一小洞，加蓋后置于適當(dāng)?shù)胤奖兀s20℃)即可。請從以下幾個方面對此發(fā)酵過程進行簡單的分析。（1)先將米煮一煮的目的主要是（2)為什么要冷卻到30℃左右后才能加入“酒藥”？（3)在米飯中央挖一小洞的原因是（4)發(fā)酵壇并沒有完全密封，壇內(nèi)無氧發(fā)酵的環(huán)境是如何形成的？（5)家庭釀酒的關(guān)鍵是保溫和放“酒藥”，如果米的量很多而放的“酒藥”太少，常常導(dǎo)致甜米酒變質(zhì)而使釀造失敗，其主要原因是殺滅其他雜菌，并使淀粉易于利用過高的溫度會抑制或殺死酵母菌有利于透氣，保證酵母菌在開始生長時有足夠的氧氣，以便短時間內(nèi)能夠迅速繁殖酵母菌進行有氧呼吸消耗了大量氧氣，同時產(chǎn)生一部分水，使容器中發(fā)酵液增多，淹沒米飯，從而形成無氧環(huán)境加的“酒藥”太少，造成酵母菌起始密度過低，不能迅速增殖形成生長優(yōu)勢，從而導(dǎo)致雜菌污染學(xué)習(xí)活動1.結(jié)合教材和課件梳理發(fā)酵工程的基礎(chǔ)知識，邊梳理邊進行構(gòu)建，構(gòu)建內(nèi)容重點為第二節(jié)內(nèi)容2.參考課件11-21頁，提交到第十六單元發(fā)酵工程電子學(xué)程重構(gòu)拓展-單元知識重構(gòu)的提交卡中重點內(nèi)容提示：（1）培養(yǎng)基的類型、成分、特殊要求（2）消毒滅菌的具體方法、適用范圍（3）微生物純培養(yǎng)的過程，尤其滅菌、倒平板操作，平板劃線操作及注意事項（4）選擇培養(yǎng)的原理、稀釋涂布平板法注意事項、微生物數(shù)量測定中為什么用菌落數(shù)可以推測活菌數(shù)、選平板的原則、計數(shù)的原則公式、菌落數(shù)少于活菌數(shù)的原因、顯微鏡直接計數(shù)工具和誤差分析（5）土壤中分解尿素的細菌分離與計數(shù)、課后題分解纖維素的微生物的分離類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化或生物方法，殺死部分微生物（不包括芽孢、孢子）強烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高溫的液體62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化學(xué)藥物如用70%酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱,160～170℃加熱2～3h濕熱滅菌培養(yǎng)基等高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),100kPa,溫度121℃,15～30min接種室、接種箱，超凈工作臺一、無菌技術(shù)生物活體、水源等可以殺死微生物的營養(yǎng)細胞和一部分芽孢。酒精燈外焰

充分燃燒層

人們按照__________________________，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，即培養(yǎng)基。二、培養(yǎng)基的配制1.概念：微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求2.作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。在液體的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)（選擇培養(yǎng)、擴大培養(yǎng)）的目的？分離篩選出特定的微生物并富集培養(yǎng)增加培養(yǎng)液中O2含量，有利于充分利用營養(yǎng)物質(zhì)2.按功能分類：完全培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基P10牛肉膏、蛋白胨分別提供什么營養(yǎng)？選擇培養(yǎng)基：P16

鑒別培養(yǎng)基：（鑒別不同微生物）概念：允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止（不是殺死）其他種類微生物生長（分離出一種或一類微生物）①以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基P18：分離尿素分解菌②添加某種抗生素的培養(yǎng)基：分離篩選某抗生素抗性菌株③以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基P20：分離纖維素分解菌④不加氮源的無氮培養(yǎng)基：分離固氮菌⑤不加含碳有機物的培養(yǎng)基：分離自養(yǎng)型微生物①鑒別纖維素分解菌：纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基+剛果紅染色②鑒別大腸桿菌P30：伊紅-亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基③鑒別醋酸菌：制備醋酸菌初篩平板時，滅菌后須在未凝固的培養(yǎng)基中加入無菌碳酸鈣粉末、充分混勻后倒平板，加入碳酸鈣的目的？使培養(yǎng)基不透明，從而使醋酸菌菌落周圍出現(xiàn)透明圈p14搖床、振蕩、攪拌的目的？對物質(zhì)的降解能力檢測指標(biāo)？（選擇培養(yǎng)基？液體培養(yǎng)？）挑選透明圈直徑與菌落直徑比值大的菌落4、培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成:（1）基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽。①碳源：無機碳源：CO2、CO32-、HCO3-有機碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等（自養(yǎng)微生物的碳源）（異養(yǎng)微生物的碳源）②氮源：無機氮源：NH4＋（銨鹽）、NO3-（硝酸鹽）、NH3、NH2等有機氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等注：含C、H、O、N的有機物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源。③無機鹽：Ca、K、Mg為

大量元素

Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素凡是能夠為微生物提供C、N等元素的營養(yǎng)物質(zhì)。思考：①是否一定要加入“碳源”？②除水以外的無機物只提供無機鹽①自養(yǎng)型微生物，不需要額外的加碳源②錯，如無機碳源、無機氮源乳酸桿菌：培養(yǎng)基中添加維生素霉菌：pH調(diào)至酸性厭氧微生物：提供無氧的條件細菌：pH調(diào)至中性或弱堿性（2）還需滿足微生物對的需求pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣KH2PO4、K2HPO4、（NH4）2SO4、MgSO4、CaCl2、Ca(NO3)2、NaCl、FeSO4等（1）參與酶的組成；①為細胞生命活動提供能量②為其他有機物的合成提供原料①提供無機營養(yǎng)

②作為緩沖劑，調(diào)節(jié)PH③調(diào)節(jié)滲透壓1.培養(yǎng)物：在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為培養(yǎng)物；2.純培養(yǎng)物、純培養(yǎng)：由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。（一）相關(guān)概念：微生物群分散或稀釋單個細胞單個菌落繁殖三、微生物的純培養(yǎng)——酵母菌（二）純培養(yǎng)的步驟包括配置培養(yǎng)基→滅菌→接種→分離和培養(yǎng)滅菌時避免水蒸氣浸濕棉塞，取出培養(yǎng)基時，也起到隔絕空氣中雜菌的作用稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20g葡萄糖、15-20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml（定容）。1.制備培養(yǎng)基2.滅菌將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15-30min。將5-8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160-170℃滅菌2h。培養(yǎng)基：用高壓蒸汽滅菌鍋濕熱滅菌培養(yǎng)皿：在干熱滅菌箱內(nèi)干熱滅菌防止污染和揮發(fā)干熱滅菌箱高壓蒸汽滅菌鍋思考：若要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，應(yīng)在何時進行？

判斷：指示劑和染料不需要滅菌滅菌之前3.倒平板待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。①左手拔出錐形瓶的棉塞目的：既可以防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。②將瓶口迅速通過火焰，灼燒滅菌③用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基（10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋。④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置。灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。1.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h，觀察是否有菌落存在確定是否被污染或滅菌是否徹底。2.怎么確定所倒平板未被雜菌污染？4.接種和分離酵母菌通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)過數(shù)次劃線后培養(yǎng)可以分離得到單菌落。(1)原理：單個細胞微生物群單個菌落連續(xù)劃線分散或稀釋生長繁殖(2)“平板劃線法”實驗操作（+稀釋涂布平板法①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞③試管口通過火焰④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞⑥將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線不要將最后一次劃線與第一次劃線相連培養(yǎng)酵母菌制備培養(yǎng)基（配制培養(yǎng)基、滅菌、倒平板）接種和分離酵母菌（1）劃3個平板（重復(fù)實驗）1個不劃線（空白對照）（2）觀察接種平板上菌落的顏色、形狀和大小是否一致接種的平板和一個未接種的平板倒置，28℃左右(酵母菌)、恒溫培養(yǎng)箱中接種方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時,為何仍需灼燒接種環(huán)？2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種3.在第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。4.全過程均在酒精燈火焰旁、培養(yǎng)皿打開一條縫、平板倒置灼燒次數(shù)？如何檢測是否有雜菌污染？1、實例：尋找耐高溫的DNA聚合酶微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)2.概念：

在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。3.原理：

人為提供_________________的條件（包括_____、_____和_____等），同時___________________________。有利于目的菌生長抑制或阻止其他微生物的生長營養(yǎng)溫度pH4.實驗室中微生物的篩選：分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養(yǎng)型微生物③不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基②不加氮源的無氮培養(yǎng)基①加入青霉素的培養(yǎng)基高濃度食鹽的培養(yǎng)基

分離金黃色葡萄球菌二、微生物的選擇培養(yǎng)①土壤取樣：從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。注：取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌1、稀釋涂布平板法:是將菌液進行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。②樣品梯度稀釋：在火焰旁稱取土壤10g，加入90ml無菌水中，搖勻，制成稀釋10倍的土壤菌液。分別取1ml上清液，加入盛有9ml無菌水的試管中，制成不同稀釋倍數(shù)的菌液。取6支試管，分別加入9ml無菌水。①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中滴②取少量稀釋液（不超過0.1ml

），滴加到培養(yǎng)基表面灼③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8-10s。涂④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻。注：各梯度分別涂布3個平板,1個不涂布作空白對照浸取樣涂布平板：（5）培養(yǎng)與觀察：待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30～37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2d。二、計數(shù)1.稀釋涂布平板法：2.顯微鏡直接計數(shù)：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌①通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)為30～300、適于計數(shù)的平板。②選擇30～300個菌落的平板進行計數(shù)；③每個稀釋度至少取3個平板取其平均值；④統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低（原因：當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落）——間接計數(shù)法統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示；快速直觀三、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)1.基礎(chǔ)原理：只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細菌2.實驗流程：土壤取樣培養(yǎng)基的制備樣品稀釋涂布平板培養(yǎng)、觀察富含有機質(zhì)、酸堿度接近中性的潮濕土壤；距地表3-8cm土壤層制備選擇培養(yǎng)基（尿素為唯一氮源）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基另外還需兩個對照組：不涂布的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，驗證培養(yǎng)基是否有雜菌污染1.不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細菌一般在30-37℃的溫度下培養(yǎng)1-2d。2.每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目3.一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征，如形狀、大小和顏色等。4.鑒定：以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，說明該細菌能分解尿素不是表層土選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目細菌合成的脲酶將尿素分解為氨氣，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，pH升高，因此可以通過檢測培養(yǎng)基pH的變化來判斷是否發(fā)生了該化學(xué)反應(yīng)，進而判斷該菌是否為尿素分解細菌樣品的稀釋與涂布平板①每個濃度至少設(shè)置4個平板，1、2、3平板是選擇培養(yǎng)基（實驗組，三個重復(fù)）4為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用以判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用）②如何驗證培養(yǎng)基中是否含有雜菌？設(shè)置2個平板作為對照：不涂布稀釋液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進一步探究——分解尿素細菌的進一步鑒定可以觀察菌落周圍是否出現(xiàn)紅色環(huán)帶，紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說明分解能力越強。液體培養(yǎng)基：可以直接看液體的變色情況；固體培養(yǎng)基：內(nèi)容

現(xiàn)象結(jié)果分析是否有雜菌污染對照組培養(yǎng)基上無菌落生長未被雜菌污染對照組培養(yǎng)基上有菌落生長被雜菌污染實驗組選擇培養(yǎng)基上菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高有雜菌生長，培養(yǎng)基上可能混入其他氮源選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目選擇培養(yǎng)基是具有篩選作用樣品的稀釋操作是否成功得到2個或2個以上菌落數(shù)為30~300的平板操作成功重復(fù)組的結(jié)果若選取的是同一種土樣,統(tǒng)計的結(jié)果應(yīng)該接近A．3號試管的稀釋倍數(shù)為1×103倍B．4號試管中稀釋液進行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)恰為5號試管的10倍C．5號試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7×108個D．該實驗方法統(tǒng)計得到的結(jié)果往往會比實際活菌數(shù)目要低下圖為“土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)”實驗中樣品稀釋示意圖。據(jù)圖分析正確的是(

)D解析：3號試管的稀釋倍數(shù)為1×104倍，A錯誤；4號試管中稀釋液進行平板培養(yǎng)，稀釋倍數(shù)比5號試管的低10倍，如果稀釋倍數(shù)適當(dāng)，得到的菌落平均數(shù)可能是5號試管的10倍，B錯誤；5號試管進行稀釋涂布平板法計數(shù)的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為(168＋175＋167)÷3÷0.1×105×100÷10＝1.7×109個，C錯誤；稀釋涂布平板法培養(yǎng)得到的菌落可能存在兩個或多個細菌細胞長成一個菌落，使該實驗方法統(tǒng)計得到的結(jié)果往往會比實際活菌數(shù)目低，D正確。23（3）剛果紅可以與纖維素、淀粉等多糖形成紅色復(fù)合物。在CMC-Na（羧甲基纖維素鈉）為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，微生物繁殖的速度很慢，加入適量土豆汁后繁殖速度加快。這是由于微生物本身酶系統(tǒng)的影響，一般情況下，微生物會優(yōu)先利用淀粉，淀粉耗盡才會利用纖維素。從利于篩選纖維素分解菌的角度考慮，添加土豆汁的濃度不宜太__________（填"高"或"低"）。實驗結(jié)果顯示，相對于只能分解淀粉的菌落，纖維素分解菌的菌落周圍有更明顯的透明圈，原因？

隨著淀粉的耗盡，纖維素分解菌還能繼續(xù)分解利用纖維素，菌落周圍形成更明顯的透明圈高效降解菌株（如：纖維素分解菌）

的挑選要求？挑選透明圈直徑與菌落直徑比值大的菌落搖床、振蕩、攪拌的目的？增加培養(yǎng)液中O2含量，有利于充分利用營養(yǎng)物質(zhì)在液體的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)（選擇培養(yǎng)、擴大培養(yǎng)）的目的？篩選出…菌并富集培養(yǎng)發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié)分析思考：1.工業(yè)發(fā)酵要想在較短時間內(nèi)得到大量的發(fā)酵產(chǎn)物，則需要大量的菌體。如何得到大量菌體來縮短生產(chǎn)周期?2.怎樣對菌種進行擴大培養(yǎng)？1.需要經(jīng)過多次擴大培養(yǎng)。2.將培養(yǎng)到生長速度最快時期的菌體分開，再進行培養(yǎng)。微生物分解有機物釋放的能量，一部分用于合成ATP，另一部分散發(fā)到培養(yǎng)基中時，會引起發(fā)酵溫度升高；機械攪拌也會產(chǎn)生一部分熱量引起溫度升高。此外，發(fā)酵罐壁散熱，水分蒸發(fā)會帶走部分熱量，使發(fā)酵溫度降低。用冷卻水進行溫度的調(diào)節(jié)啤酒的工業(yè)化流程

思考：1.利用酵母菌進行酒精發(fā)酵為什么要“先通氣后密封”？2.啤酒生產(chǎn)中，發(fā)酵是重要環(huán)節(jié)，發(fā)酵后期，如果密封不嚴，會使啤酒變酸，你知道這是發(fā)生了什么變化嗎？3.與傳統(tǒng)的手工發(fā)酵相比，在下面啤酒的發(fā)酵生產(chǎn)過程中，哪些工程手段使啤酒的產(chǎn)量和質(zhì)量明顯提高?1.“通氣”的目的是使酵母菌進行有氧呼吸大量繁殖，“密封”的目的是使酵母菌進行酒精發(fā)酵產(chǎn)生酒精。2.醋酸菌是一種好氧菌，若發(fā)酵罐密封不嚴，酒精就會在醋酸菌的作用下被氧化產(chǎn)生乙醛，最后變?yōu)榇姿帷?.菌種的選育、對原材料的處理、發(fā)酵過程的控制、產(chǎn)品的消毒等。2．（2019?海南）回答下列問題。某同學(xué)在通過發(fā)酵制作果酒時，發(fā)現(xiàn)在制作原料中添加一定量的糖，可以提高酒精度，原因是

。在家庭以葡萄為原料制作葡萄酒時，可以不添加酵母菌，原因是

；在制作葡萄酒的過程中，如果密封不嚴混入空氣，發(fā)酵液會變酸，可能的原因是

。高考題典題訓(xùn)練1．（2020?江蘇）某同學(xué)在線提交了在家用帶蓋玻璃瓶制作果酒和果醋的實驗報告，錯誤的是（）A．選擇新鮮的葡萄略加沖洗，除去枝梗后榨汁

B．將玻璃瓶用酒精消毒后，裝滿葡萄汁

C．酒精發(fā)酵期間，根據(jù)發(fā)酵進程適時擰松瓶蓋放氣

D．酒精發(fā)酵后去除瓶蓋，蓋一層紗布，再進行醋酸發(fā)酵1B2答案：糖類是主要的能源物質(zhì)，可以為酵母菌的生長、繁殖提供能源物質(zhì)，還可以作為酒精發(fā)酵的原料

葡萄皮上附著有野生的酵母菌

醋酸菌大量增殖，進行醋酸發(fā)酵3．（2020?浙江）回答與泡菜制作有關(guān)的問題：（1）用蘿卜等根菜類蔬菜制作泡菜，用熱水短時處理，可抑制某些微生物產(chǎn)生

，從而使成品泡菜口感較脆。同時，該處理也會使泡菜發(fā)酵時間縮短，其原因是

。（2）泡菜發(fā)酵初期，由于泡菜罐加蓋并水封，會使

菌被逐漸抑制。發(fā)酵中期，乳酸菌大量繁殖，會使

菌受到抑制。發(fā)酵后期，乳酸生產(chǎn)過多，會使乳酸菌受到抑制。（3）從泡菜汁中可分離制作酸奶的乳酸菌，首先對經(jīng)多次發(fā)酵的泡菜汁進行過濾，然后取濾液進行

，再用

的方法在某種含牛乳的專用的培養(yǎng)基中進行初步篩選。該培養(yǎng)基必須含有

，以便于觀察是否產(chǎn)酸。（4）自然界中醋桿菌常與乳酸菌共同生長。若要篩選出醋桿菌，則其專用的培養(yǎng)基中應(yīng)添加

。3答案：（1）果膠酶

細胞破裂，細胞內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)外流使乳酸菌快速地獲得營養(yǎng)物質(zhì)（2）好氧的

不耐酸的

（3）稀釋

涂布分離

酸堿指示劑

（4）乙醇P20課后題1.(1)√;(2)√;(3)√。

2.D。拓展應(yīng)用1.反芻動物瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會死亡。因此從中分離能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)備尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，還應(yīng)該參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進行實驗設(shè)計。2.(2)提示纖維素分解菌大多分布在富含纖維素的環(huán)境中，采集土樣時，可以選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹林中多年落葉形成的腐殖土等。(3)提示這是人工創(chuàng)建適合纖維素分解菌生存的環(huán)境，腐爛的濾紙上很可能有纖維素分解菌。P28課后題(1)x;(2)√;(3)√;(4)x。1(1)可以用基因工程的方法，將血紅蛋白基因轉(zhuǎn)入青霉素生產(chǎn)菌來提高菌體對氧的吸收和利用率。(2)可以對兩種酶的基因進行改造或敲除其中中一種酶的基因，從而使青霉素生產(chǎn)菌只生產(chǎn)一種產(chǎn)物。2.這一風(fēng)險是存在的。在生產(chǎn)燃料乙醇時，為了規(guī)避這一風(fēng)險，應(yīng)該使用陳化糧(如陳化稻谷等)或者非糧食生物材料(如秸稈等)。使用陳化糧生產(chǎn)燃料乙醇，還有利于防止問題糧食流人市場。P30復(fù)習(xí)與提高1(1)篩選出可以降解化合物A的微生物選擇(2)顯著降低擴增。(3)細菌計數(shù)板計數(shù)S型增長(4)目的菌用于環(huán)境保護實踐時，還需解決的問題：目的菌能否在自然環(huán)境中大量生長繁殖、否產(chǎn)生對環(huán)境有害的代謝物、降解化合物A后是否會產(chǎn)生二次污染等(5)可行。P30復(fù)習(xí)與提高（答案整理）2.(1)①不同意。原因：只檢測一個冰激凌數(shù)據(jù)太少，不能排除偶然因素的影響。②沒有必要。

原因：根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，自來水中的大腸桿菌數(shù)目應(yīng)該是非常少的。即使冰激凌中大腸桿菌數(shù)目超標(biāo)了，也不可能很離譜，如果進行梯度稀釋，最后培養(yǎng)出來的菌落數(shù)可能不在計數(shù)要求的范圍內(nèi)，從而導(dǎo)致結(jié)果誤差大。③需要設(shè)置對照組。應(yīng)該設(shè)置兩組對照組。一組為陰性對照組，不進行涂布或者用無菌水涂布平板，說明培養(yǎng)基是否被污染;另一組為陽性對照組，涂布大腸桿菌，說明該培養(yǎng)基能否培養(yǎng)出大腸桿菌。(2)B。(3)說明冰激凌中不僅有大腸桿菌，還有其他細菌或真菌等。統(tǒng)計結(jié)果比實際值偏少。原因：因為當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落P18；

并且這種計數(shù)方法統(tǒng)計的是活菌數(shù)。(4)提示應(yīng)該馬上去小店告知店主這批冰激凌不能再賣了;還要告知食品衛(wèi)生管理部門,以對這批冰激凌的來源進行追蹤調(diào)查。其他合理答案也可。拓展題1．（2021?河北）葡萄酒生產(chǎn)過程中會產(chǎn)生大量的釀酒殘渣（皮渣）。目前這些皮渣主要用作飼料或肥料，同時研究者也采取多種措施拓展其利用價值。回答下列問題：（1）為了解皮渣中微生物的數(shù)量，取10g皮渣加入90mL無菌水，混勻、靜置后取上清液，用稀釋涂布平板法將0.1mL稀釋液接種于培養(yǎng)基上。104倍稀釋對應(yīng)的三個平板中菌落數(shù)量分別為78、91和95，則每克皮渣中微生物數(shù)量為

個。（2）皮渣堆積會積累醋酸菌，可從中篩選優(yōu)良菌株。制備醋酸菌初篩平板時，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至

性，滅菌后須在未凝固的培養(yǎng)基中加入無菌碳酸鈣粉末、充分混勻后倒平板，加入碳酸鈣的目的是

。培養(yǎng)篩選得到的醋酸菌時，在缺少糖源的液體培養(yǎng)基中可加入乙醇作為

。（3）皮渣堆積過程中也會積累某些兼性厭氧型乳酸菌。初篩醋酸菌時，乳酸菌有可能混入其中，且兩者菌落形態(tài)相似。請設(shè)計一個簡單實驗，區(qū)分篩選平板上的醋酸菌和乳酸菌。（簡要寫出實驗步驟和預(yù)期結(jié)果）

1答案：（1）8.8×106（2）中性或弱堿

使培養(yǎng)基不透明，從而使醋酸菌菌落周圍出現(xiàn)透明圈

碳源（3）實驗步驟：將平板置于無氧環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)和透明圈大小預(yù)期結(jié)果：若菌落繼續(xù)生長，且透明圈增大，則為兼性厭氧型的乳酸菌菌落，若菌落不能繼續(xù)生長，透明圈不再擴大，則為醋酸菌菌落2．（2020?新課標(biāo)Ⅰ）某種物質(zhì)S（一種含有H、N的有機物）難以降解，會對環(huán)境造成污染，只有某些細菌能降解S．研究人員按照如圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細菌菌株。實驗過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機鹽、水和S，乙的組分為無機鹽、水、S和Y。（1）實驗時，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用

的方法進行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是

。甲、乙培養(yǎng)基均屬于

培養(yǎng)基。（2）實驗中初步估測搖瓶M中細菌細胞數(shù)為2×107個/mL，若要在每個平板上涂布100μL稀釋后的菌液，且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋

倍。（3）在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時，某菌株對S的降解量反而下降，其原因可能是

（答出1點即可）。（4）若要測定淤泥中能降解S的細菌細胞數(shù)，請寫出主要實驗步驟：

。（5）上述實驗中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細菌的生長提供4類營養(yǎng)物質(zhì)，即

。2．

答案：（1）高壓蒸汽滅菌

瓊脂

選擇

（2）104（3）細菌細胞由于滲透作用失水過多，喪失活性（S的濃度超過某一值時會抑制菌株的生長）（4）淤泥中取樣，然后進行梯度稀釋，微生物的培養(yǎng)與觀察，計數(shù)[取淤泥加入無菌水，涂布（或稀釋涂布）到乙培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計數(shù)]（5）水、無機鹽、碳源、氮源3．（2019?新課標(biāo)Ⅱ）物質(zhì)W是一種含氮有機物，會污染土壤。W在培養(yǎng)基中達到一定量時培養(yǎng)基表現(xiàn)為不透明。某研究小組欲從土壤中篩選出能降解W的細菌（目標(biāo)菌）?；卮鹣铝袉栴}。（1）要從土壤中分離目標(biāo)菌，所用選擇培養(yǎng)基中的氮源應(yīng)該是

。（2）在從土壤中分離目標(biāo)菌的過程中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上甲、乙兩種細菌都能生長并形成菌落（如圖所示）。如果要得到目標(biāo)菌，應(yīng)該選擇

菌落進一步純化。選擇的依據(jù)是

。（3）土壤中的某些微生物可以利用空氣中的氮氣作為氮源，若要設(shè)計實驗進一步確定甲、乙菌能否利用空氣中的氮氣作為氮源，請簡要寫出實驗思路、預(yù)期結(jié)果和結(jié)論，即

。（4）該小組將人工合成的一段DNA轉(zhuǎn)入大腸桿菌，使大腸桿菌產(chǎn)生能降解W的酶（酶E）。為了比較酶E與天然酶降解W能力的差異，該小組擬進行如下實驗，請完善相關(guān)內(nèi)容。①在含有一定濃度W的固體培養(yǎng)基上，A處滴加含有酶E的緩沖液，B處滴加含有相同濃度天然酶的緩沖液，C處滴加

，三處滴加量相同。②一段時間后，測量透明圈的直徑。若C處沒有出現(xiàn)透明圈，說明

；若A、B處形成的透明圈直徑大小相近，說明

。3答案：（1）W（2）乙

乙菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明乙菌能降解W（3）將甲、乙菌分別接種在無氮源培養(yǎng)基上，若細菌能生長，則說明該細菌能利用空氣中的氮氣作為氮源

（4）①緩沖液

②緩沖液不能降解W酶E與天然酶降解W的能力相近4．（2019?新課標(biāo)Ⅰ）已知一種有機物X（僅含有C、H兩種元素）不易降解，會造成環(huán)境污染。某小組用三種培養(yǎng)基篩選土壤中能高效降解X的細菌（目標(biāo)菌）。Ⅰ號培養(yǎng)基：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入X（5g/L）。Ⅱ號培養(yǎng)基：氯化鈉（5g/L），硝酸銨（3g/L），其他無機鹽（適量），X（15g/L）。Ⅲ號培養(yǎng)基：氯化鈉（5g/L），硝酸銨（3g/L），其他無機鹽（適量），X（45g/L）?；卮鹣铝袉栴}。（1）在Ⅰ號培養(yǎng)基中，為微生物提供氮源的是

。Ⅱ、Ⅲ號培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的有機物是

。（2）若將土壤懸浮液接種在Ⅱ號液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時間后，不能降解X的細菌比例會

，其原因是

。（3）Ⅱ號培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基，若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標(biāo)菌并對菌落進行計數(shù)，接種時，應(yīng)采用的方法是

。（4）假設(shè)從Ⅲ號培養(yǎng)基中得到了能高效降解X的細菌，且該菌能將X代謝為丙酮酸，則在有氧條件下，丙酮酸可為該菌的生長提供

和

。4答案：（1）牛肉膏、蛋白胨X（2）下降

不能降解X的細菌因缺少碳源而不能繁殖，而降解X的細菌能夠繁殖（3）稀釋涂布平板法

（4）能量

合成其他物質(zhì)的原料高考題——發(fā)酵工程的應(yīng)用（2021?廣東）中國科學(xué)家運用合成生物學(xué)方法構(gòu)建了一株嗜鹽單胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的廢棄液，含較多蔗糖）為原料，在實驗室發(fā)酵生產(chǎn)PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整體利用價值。工藝流程如圖。（1）為提高菌株H對蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液體培養(yǎng)基中將蔗糖作為

，并不斷提高其濃度，經(jīng)多次傳代培養(yǎng)（指培養(yǎng)一段時間后，將部分培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入新配的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)）以獲得目標(biāo)菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用

的方法進行菌落計數(shù)，評估菌株增殖狀況。（2）基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強等特性，研究人員設(shè)計了一種不需要滅菌的發(fā)酵系統(tǒng)，其培養(yǎng)基鹽濃度設(shè)為60g/L，pH為10，菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上。該系統(tǒng)不需要滅菌的原因是

。（答出兩點即可）（3）研究人員在工廠進行擴大培養(yǎng)，在適宜的營養(yǎng)物濃度、溫度、pH條件下發(fā)酵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中菌株H細胞增殖和PHA產(chǎn)量均未達到預(yù)期，并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì)，說明發(fā)酵條件中

可能是高密度培養(yǎng)的限制因素。（4）菌株H還能通過分解餐廚垃圾（主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等）來生產(chǎn)PHA，說明其能分泌

。唯一碳源

血細胞計數(shù)板計數(shù)

鹽濃度為60g/L的條件下，其他雜菌因失水過多而死亡；pH為10的條件下，其他雜菌的酶變性失活，生長繁殖受抑制氧氣（O2或溶解氧）

蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等透明圈(溶血圈)金黃色葡萄球菌具有高度耐鹽性，在血平板（培養(yǎng)基中添加適量血液）上生長時，可破壞菌落周圍的紅細胞，使其褪色。下面是某研究小組測定自來水中金黃色葡萄球菌濃度的實驗操作。請回答下列問題：（1）金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基為7．5％NaCl牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，此培養(yǎng)基能為金黃色葡萄球菌的生長提供___

___及水和無機鹽。培養(yǎng)基中加入7．5％NaCl利于金黃色葡萄球菌的篩選，原因是________________

。（2）上述培養(yǎng)基的滅菌方法是_________。在制作血平板時需等平板冷卻后，方可加入血液，以防止___________。血平板在使用前，需置于恒溫培養(yǎng)箱中一段時間的目的是_________。（3）取10mL自來水樣，加入_____mL無菌水稀釋成101稀釋自來水樣，依次操作，制作102、103、104稀釋自來水樣。（4）將0.1mL10l～104的四個稀釋樣液，分別接種到4組（每組3個）血平板上的方法是__________。在血平板上，金黃色葡萄球菌菌落的周圍會出現(xiàn)___________。若在103組的3個血平板上，金黃色葡萄球菌菌落數(shù)分別為39、38和37，則每升自來水中的活菌數(shù)約為____________。實驗結(jié)果統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低其原因是____________

。當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落P18碳源、氮源不影響金黃色葡萄球菌的生長，同時抑制其它雜菌的生長P16高壓蒸汽滅菌法高溫破壞血細胞檢測血平板是否符合無菌要求90稀釋涂布平板法3.8x108葡萄球菌的選擇培養(yǎng)、鑒別、計數(shù)（2020?山東）野生型大腸桿菌可以在基本培養(yǎng)基上生長，發(fā)生基因突變產(chǎn)生的氨基酸依賴型菌株需要在基本培養(yǎng)基上補充相應(yīng)氨基酸才能生長。將甲硫氨酸依賴型菌株M和蘇氨酸依賴型菌株N單獨接種在基本培養(yǎng)基上時，均不會產(chǎn)生菌落。某同學(xué)實驗過程中發(fā)現(xiàn)，將M、N菌株混合培養(yǎng)一段時間，充分稀釋后再涂布到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后出現(xiàn)許多由單個細菌形成的菌落，將這些菌落分別接種到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后均有菌落出現(xiàn)。該同學(xué)對這些菌落出現(xiàn)原因的分析，不合理的是（）A．操作過程中出現(xiàn)雜菌污染

操作過程當(dāng)中出現(xiàn)雜菌污染，基本培養(yǎng)基上生長的為雜菌，A合理

B．M、N菌株互為對方提供所缺失的氨基酸

若M、N菌株互為對方提供所缺失的氨基酸形成的菌落，需要MN混合在一起才能生存，而該菌落來自于單個細菌形成的菌落，單個細菌不可能混合培養(yǎng)的細菌。C．混合培養(yǎng)過程中，