苯磺酸氨氯地平片在健康人體的藥動(dòng)學(xué)等效性評(píng)價(jià) 3900字

苯磺酸氨氯地平片在健康人體的藥動(dòng)學(xué)等效性評(píng)價(jià)3900字【摘要】目的：研究苯磺酸氨氯地平片在健康人體的藥代動(dòng)力學(xué)特征及其生物等效性評(píng)價(jià).辦法：18名健康志愿受試者，口服苯磺酸氨氯地平試驗(yàn)品和參比品10mg，用規(guī)范二階段交叉設(shè)計(jì)自身對(duì)照試驗(yàn)辦法，以液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定服藥后120h內(nèi)不同時(shí)刻的血藥濃度，計(jì)算主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，并采用方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn)〔12α〕90%置信區(qū)間進(jìn)行生物等效性評(píng)價(jià).結(jié)果：受試者分別口服受試品和參比品后，其主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Tmax,Cmax,t1/2和AUC〔0-120h〕分別為：〔8.9±2.5〕和〔8.2±2.2〕h；〔5.1±2.3〕和〔5.0±2.2〕μg/L；〔45±10〕和〔48±24〕h；〔191±69〕和〔196±53〕μg/(L?h).受試品的相對(duì)生物利用度為(99±23)%.結(jié)論：結(jié)果說明，兩種制劑具有生物等效性.

【關(guān)鍵詞】苯磺酸氨氯地平片；藥代動(dòng)力學(xué)；生物利用度；液相色譜；光譜分析，質(zhì)量

0引言

苯磺酸氨氯地平片〔Amlodipinebesylate〕，臨床上主要用于高血壓和心絞痛的治療［1］.與同類型的其他藥物相比，該藥有服藥量低、藥效維持時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn).由于氨氯地平的血藥濃度低，我們采用精確度和靈敏度更高的液相質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定血漿中氨氯地平濃度.為確保用藥質(zhì)量，我們?cè)u(píng)價(jià)苯磺酸氨氯地平在人體內(nèi)的生物效應(yīng)，并對(duì)苯磺酸氨氯地平片和絡(luò)活喜片在健康志愿者體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)和生物等效度進(jìn)行了比擬，旨在為臨床合理用藥［2-5］提供理論依據(jù).

1材料和辦法

1.1材料

1.1.1儀器TSQ型液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有大氣壓化學(xué)電離源〔APCI源〕以及Xcalibur1.4數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，Surveyor輸液泵〔美國(guó)Finnigan公司〕.色譜柱ZorbaxXBDC18柱，5μm粒徑，150×4.6mmI.D〔美國(guó)Agilent公司〕.

1.1.2藥品和試劑受試制劑：苯磺酸氨氯地平片〔陜西正康醫(yī)藥化工有限公司，批號(hào)20220819，5mg/片〕；參比制劑：絡(luò)活喜片(輝瑞制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)45805012，5mg/片)；苯磺酸氨氯地平對(duì)照品〔寧波大紅鷹藥業(yè)，含量>99.0%〕；內(nèi)標(biāo)為鹽酸苯海拉明〔中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量>99.4%〕；甲酸〔分析純，天津市博迪化工有限公司〕和乙腈〔色譜純，天津康科德科技有限公司〕；二氯甲烷和乙醚〔分析純，天津市博迪化工有限公司〕；磷酸鈉〔分析純，沈陽化學(xué)試劑廠〕；空白人血漿〔沈陽中心血站〕.

1.1.3色譜條件流動(dòng)相為乙腈水甲酸〔80∶20∶0.5,V/V/V〕,流速為0.5mL/min,柱溫為室溫.

1.1.4質(zhì)譜條件檢測(cè)方式為正離子檢測(cè)，離子源為APCI源；電暈放電電流4.0μA；加熱毛細(xì)管溫度為280℃；氣化室溫度450℃；鞘氣〔N2〕壓力30Arb；輔助氣〔N2〕流量3Arb；碰撞氣〔Ar〕壓力1.5mTorr；碰撞誘導(dǎo)解離〔CID〕電壓分別為15eV〔氨氯地平〕和25eV〔苯海拉明〕；掃描方式為選擇反饋監(jiān)測(cè)〔SRM〕，用于定量分析的離子反饋分別為m/z409→m/z238〔氨氯地平〕和m/z256→m/z167〔內(nèi)標(biāo)苯海拉明〕；掃描時(shí)間為0.3s.

1.2辦法

1.2.1研究對(duì)象與給藥計(jì)劃以規(guī)范二階段交叉自身實(shí)驗(yàn)法，將18名健康男性志愿者隨機(jī)分為兩組.試驗(yàn)第一階段第一組口服受試制劑10mg，第二組口服參比制劑10mg.經(jīng)2wk清洗期后，兩組交換服藥品種進(jìn)行第二階段試驗(yàn).受試者于每次試驗(yàn)前日20：00開始禁食，于試驗(yàn)當(dāng)日07：00空腹按規(guī)定的劑量及辦法給藥，服藥后4h和10h進(jìn)食統(tǒng)一規(guī)范午餐.服藥前抽取空白血樣4mL，服藥后2，4，6，8，10，14，24，36，48，72，96和120h采集靜脈血4mL,立即移入經(jīng)肝素處理的試管中離心10min,別離血漿,置于無菌枯燥塑料管中,于-20℃冰箱保留待測(cè).由于氨氯地平對(duì)光不穩(wěn)定,因而采血過程避光操作，血漿樣品均避光保留.

1.2.2血漿樣品的處理與測(cè)定取血漿1.0mL,加甲醇水〔50∶50，V/V〕100μL,內(nèi)標(biāo)溶液〔200μg/L鹽酸苯海拉明〕100μL，磷酸鈉緩沖液〔10mmol/L,pH12〕500μL,混勻；加提取試劑乙醚二氯甲烷〔2∶1，v/v〕3.0mL,渦流1min,往復(fù)振蕩10min,離心5min,取上層有機(jī)相于40℃空氣流下吹干，殘留物于100μL流動(dòng)相中溶解，取20μL進(jìn)行LC/MS/MS分析.

1.2.3規(guī)范曲線的制備取空白血漿1.0mL，加氨氯地平規(guī)范系列溶液100μL，配制成相當(dāng)于濃度為0.2，0.5，1.6，4.0，8.0和16.0μg/L的血漿樣品，每種濃度做兩份樣品，按1.2.2操作，記錄各色譜峰的峰面積.以待測(cè)物濃度為橫坐標(biāo)，待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乘法［6］進(jìn)行回歸運(yùn)算，求得規(guī)范曲線回歸方程，氨氯地平的線性范圍為0.2~16.0μg/L.

1.2.4辦法的精密度與準(zhǔn)確度取空白血漿參加適量氨氯地平規(guī)范溶液，分別配制成0.2，4.0，16.0μg/L的低、中、高三個(gè)濃度的質(zhì)量控制〔QC〕樣品各兩份，在1日內(nèi)測(cè)3次，并以同法配制濃度連續(xù)測(cè)定3d，1次/d，并與規(guī)范曲線同時(shí)進(jìn)行，與配制溶液對(duì)照，求得本法的日內(nèi)精密度和日間精密度.

1.2.5提取回收率取空白血漿3份，參加適量氨氯地平規(guī)范溶液，分別配制成0.2，4.0，16.0μg/L的低、中、高3個(gè)濃度的樣品，按樣品測(cè)定法各測(cè)定含量6次，３種濃度下樣品的提取回收率分別為：84.0%，77.2%和81.2%.

1.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)文獻(xiàn)［7-8］報(bào)道，氨氯地平血漿樣品-20℃避光放置6mo穩(wěn)定，日照4h，即有30%以上的分解產(chǎn)物.所以，全部試驗(yàn)過程均要求避光操作.本試驗(yàn)考察了經(jīng)液液萃取處理后的氨氯地平血漿樣品室溫放置24h以及血漿樣品經(jīng)歷3次冷凍解凍循環(huán)的穩(wěn)定性.每一種儲(chǔ)存條件的穩(wěn)定性考察時(shí)，取空白血漿1.0mL，配制氨氯地平低、高兩濃度的血漿樣品，每一濃度進(jìn)行三樣本分析，采用LC/MS/MS法測(cè)定，結(jié)果說明處理后的氨氯地平血漿樣品室溫放置24h穩(wěn)定〔RE為±6.3%〕；經(jīng)過3次冷凍解凍循環(huán)后穩(wěn)定〔RE為±12.7%〕.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:Tmax,Cmax采用實(shí)測(cè)值，以打消相血藥濃度對(duì)數(shù)與對(duì)應(yīng)點(diǎn)時(shí)間的線性進(jìn)行回歸求算苯磺酸氨氯地平的體內(nèi)打消半衰期，采用梯形法計(jì)算AUC〔0-120h〕和AUC(0-∞)，得到兩制劑的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù).將AUC和Cmax參數(shù)進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后，以雙單側(cè)t檢驗(yàn)和〔12α〕%置信區(qū)間法評(píng)價(jià)兩種苯磺酸氨氯地平制劑在人體內(nèi)的相對(duì)生物等效性.

2結(jié)果

2.1辦法的專屬性色譜圖見圖1.在本試驗(yàn)所采用的色譜質(zhì)譜條件下，氨氯地平和內(nèi)標(biāo)的保存時(shí)間為2.67,2.70min,氨氯地平和內(nèi)標(biāo)的峰形良好，無雜質(zhì)干擾，基線平穩(wěn)，可確保分析的專一性.

2.2辦法的日內(nèi)、日間精密度見表1.表1血中苯磺酸氨氯地平測(cè)定辦法的日內(nèi)、日間精密度(略)

2.3藥代動(dòng)力學(xué)Tmax,Cmax采用實(shí)測(cè)值，以打消相血藥濃度對(duì)數(shù)與對(duì)應(yīng)點(diǎn)時(shí)間的線性回歸求算苯磺酸氨氯地平的體內(nèi)打消半衰期，采用梯形法計(jì)算AUC〔0-120h〕,AUC(0-∞),所得的兩制劑的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表2.表2分別口服苯磺酸氨氯地平兩制劑〔10mg〕后的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比擬(略)

2.4生物等效性的評(píng)價(jià)兩種制劑中氨氯地平的AUC〔0-120h〕,Cmax,Tmax和T1/2ke無差別(表3).進(jìn)一步采用雙單側(cè)t檢驗(yàn)和〔12α〕置信區(qū)間法分析，AUC〔0-120h〕,AUC(0-∞),Cmax均拒絕不等效若(P3討論

國(guó)內(nèi)外關(guān)于氨氯地平含量測(cè)定的辦法多采用HPLCUV，但其靈敏度較低，而本研究采用的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)的線性范圍到達(dá)0.2~16.0μg/L.其具有高度的檢驗(yàn)靈敏性，操作簡(jiǎn)便，可確保測(cè)定血漿中的微量氨氯地平濃度的準(zhǔn)確性和可靠性.在流動(dòng)相的選擇上，選用乙腈水甲酸，甲酸為有機(jī)酸，可增加氨氯地平的溶解.

從氨氯地平血藥濃度的測(cè)定結(jié)果可見，18例受試者服用受試制劑和參比制劑后，兩組之間各參數(shù)間均無顯著性差別，表明兩種苯磺酸氨氯地平片在18例健康受試者體內(nèi)的處置情況較為相似.