類風(fēng)濕因子多重微珠免疫法檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

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類風(fēng)濕因子多重微珠免疫法檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書（RFIgM抗體產(chǎn)品編號(hào)：A91001M宙斯（Zeus）AtheNAMulti-LyteIgM抗體。本試劑盒用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診斷。本試劑盒用于體外診斷。背景：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）是一種慢性病，往往會(huì)發(fā)展為關(guān)節(jié)炎。RA是一種高度變異疾病，從輕微持久的病癥到破壞性的多發(fā)性關(guān)節(jié)炎伴隨系統(tǒng)性脈管炎11-2的發(fā)生率（2男性的兩倍1。早期病癥的臨床特征包括淋巴結(jié)病、厭食、虛弱、疲勞和晨僵或疼痛3RAR、抗核AN（3RFIgMRA較為重要而且可以幫助疾病預(yù)后診斷（6。RF（或其他屬種的Fc部分發(fā)生反應(yīng)的抗體14RF是一種多克隆抗體，與IgG的多數(shù)部位發(fā)生反應(yīng)。分為三個(gè)主IgIgGIg，而IgERF也有提及5IgMIgG是最常見RA75IgMR（4RF與一些細(xì)菌性或亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎和癌癥（16515的RF水平有上升（4。AtheNAMulti-LyteTM抗核抗體類風(fēng)濕因子檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)原理：AtheNAMulti-LyteIgM抗體。整個(gè)檢測(cè)步驟包括兩步溫育過程。1、待測(cè)血清（經(jīng)過稀釋）同熒光編碼的聚苯乙烯微粒（polystyrenemicrospheres);不同顏色的微粒上結(jié)合有不同的抗原。如果病人血清中含有類風(fēng)濕因子，就會(huì)和微粒特異性地結(jié)合。2(藻紅蛋白)（Phycoerythrin，PE）標(biāo)記的羊抗人鏈RFIgMAtheNAMulti-Lyte(PE)。利用孔內(nèi)校正技術(shù)（Intra-WellCalibration，內(nèi)對(duì)照顆粒上的熒光信號(hào)可以將讀到的熒光強(qiáng)度轉(zhuǎn)換成濃度（單位）結(jié)果。試劑盒組分：（所有活性成分都含有濃度為0.1%w/v）15.6IgG在病人標(biāo)本中檢測(cè)出非特異性抗體的系統(tǒng)和四套校正系統(tǒng)。2、熒光素(藻紅蛋白)（Phycoerythrin，PE）標(biāo)記的羊抗人IgM（ 鏈?？梢越邮褂?，15ml琥珀色瓶子。3、人陽(yáng)性血清對(duì)照：0.2ml1管。4、人陰性血清對(duì)照：0.2ml1管。5、樣本稀釋液：50ml一瓶含磷酸緩沖鹽，可以直接使用。注：樣本稀釋液加入血清后會(huì)變色。非活性成分：1、96孔聚苯乙烯分析板一塊2、96孔稀釋盤兩塊3、數(shù)據(jù)標(biāo)簽：一張標(biāo)簽貼于試劑盒蓋內(nèi)，另一張?jiān)谠噭┖袃?nèi)。4、使用說(shuō)明書5、校正CD。包括所有批間特異性的試劑盒校正值，用于標(biāo)本分析和質(zhì)量控制。預(yù)先警告：安全警告：1、本試劑盒用于體外診斷。應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室操作的常規(guī)規(guī)定。如果接觸到眼睛，/備。不要呼吸到蒸汽。處理廢棄物時(shí)遵守相關(guān)法規(guī)。2、本試劑盒內(nèi)微珠上沒有活性的有機(jī)物。但應(yīng)將之視為有潛在生物毒性的物質(zhì)并小心處理。3潛在生物毒性的物質(zhì)。產(chǎn)品的原材料經(jīng)檢測(cè)對(duì)HIV-1抗原和HBsAgHCVHIV2疾病控制中心和國(guó)家健康控制研究院手冊(cè)“微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物OSH’有潛在傳染性的人血清或血液制品（9。4、樣品稀釋液、對(duì)照、微珠懸浮液和結(jié)合劑含有0.1%w/v的疊氮鈉，而疊氮鈉據(jù)報(bào)告在實(shí)驗(yàn)室管道內(nèi)可能會(huì)形成疊氮鉛或疊氮銅造成爆炸。為了避免發(fā)生此類情況，當(dāng)處理含疊氮鈉的溶液時(shí)用大量的水沖洗。操作時(shí)注意事項(xiàng)：1、本試劑盒用于體外診斷。2、稀釋或摻雜其他試劑會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。3、請(qǐng)勿使用其他廠家的試劑。4、微珠懸浮液和結(jié)合劑是光敏感的試劑，都裝于避光容器內(nèi)。在試驗(yàn)過程中常規(guī)光條件下并不會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果，但應(yīng)避免將之暴露于不必要的強(qiáng)光下。5、微珠懸浮液在使用前應(yīng)徹底混勻以獲得最佳讀取結(jié)果時(shí)間。最有效的方法是將微珠懸浮液振蕩30秒然后超聲儀處理30秒。6、切勿用嘴吸移液管。避免試劑和病人樣品與皮膚或粘膜接觸。7、避免試劑被微生物污染，這將產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果。8、試劑和樣本的交叉污染會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。9、嚴(yán)格按照說(shuō)明書中指定的溫育時(shí)間和溫度操作是獲得正確結(jié)果的重要保證。實(shí)驗(yàn)前一定要使所有試劑的溫度回復(fù)至室溫（20~25℃。立即放回到冰箱。10、 避免溶液飛濺或產(chǎn)生氣溶膠。11、 廢棄溶液用10%的家用漂白劑次氯酸鈉）處理。避免試劑與漂劑的煙霧接觸。12、 不要讓任何反應(yīng)試劑接觸到含有漂白劑的溶液。微量的漂白劑（次氯鈉）會(huì)影響試劑盒內(nèi)很多試劑的生物活性。儲(chǔ)存條件：1、未開封的試劑盒：保存在2-8 C。2、多重微珠懸浮液：保存在2-8 C。使用時(shí)吸取需要量后將之放回2-8℃。3、PE標(biāo)記的羊抗人抗體：保存在2-8 C。4、人對(duì)照品：保存在2-8 C。5、樣品稀釋液：保存在2-8 C。標(biāo)本采集：建議根據(jù)NCCLS 的M29號(hào)文件來(lái)采集標(biāo)（接觸有傳染性疾病的實(shí)驗(yàn)室工作者的防護(hù)沒有已知的試驗(yàn)方法可以完全證明人的血液標(biāo)本不會(huì)導(dǎo)致感染因此，所有的血液都應(yīng)視為有潛在的傳染性。本試驗(yàn)選用的標(biāo)本為無(wú)菌靜脈穿刺取得的血液，經(jīng)新鮮沉降和冷藏獲得的血清7，8清。882-8C48小時(shí)。如時(shí)間更久，應(yīng)把標(biāo)本放在-20C反復(fù)凍融標(biāo)本以免造成抗體活力降低并影響最終結(jié)果。操作步驟：自備材料：110200ul的移液器2、多通道移液器，能精確吸取50-200ul3、適用于多通道移液器的貯液槽4、專用于吸血清的移液器5、一次性吸頭6、實(shí)驗(yàn)室用的計(jì)時(shí)器以便控制溫育時(shí)間試驗(yàn)過程建立：把各成分從儲(chǔ)存條件中取出使之回復(fù)至室溫20-2℃A1B13030秒。800RPM301/2體積的反應(yīng)液體反復(fù)吸打至少5次。血清溫育：1、按1：200倍數(shù)稀釋陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和每個(gè)病人的血清樣品（例如：將10 l血清+90 l樣本稀釋液在一個(gè)稀釋盤中混勻[此為1：10稀釋]。然后取10 l經(jīng)1：10稀釋的樣品加190 l樣本稀釋液在另一個(gè)稀釋盤中此為1：200稀釋）加入樣本稀釋液和血清標(biāo)本結(jié)合后發(fā)生顏色變化。正確的操作要求樣本稀釋液混合均勻，可按上述注2操作。如果您按2步法稀釋則必須每步都混合均勻。2、在確定檢測(cè)所需的總數(shù)量后，使用多通道移液器或重復(fù)使用移液器在每個(gè)中加入50 l微珠懸浮液。3、加入10 l經(jīng)過1：200稀釋的標(biāo)本和對(duì)照。按上述注2混合均勻。4、室溫（20-25℃）溫育30 10分鐘。結(jié)合劑溫育：1、每孔中加入150 l結(jié)合劑，按照樣品加入的順序以相同的速率和順序依加入微孔板中。按上述注2混合均勻。2、室溫（20-25℃）溫育30 10分鐘。標(biāo)本分析：注：按照使用說(shuō)明書操作本設(shè)備，讀取結(jié)果前請(qǐng)先閱讀設(shè)備的使用說(shuō)明書。1AtheNAMulti-LyteRF模塊分析試驗(yàn)結(jié)果，并按說(shuō)明書操作。26015簡(jiǎn)明操作步驟1234567操作1：20010室溫溫育30l5010分鐘。l150l室溫溫育30搖勻（可選。1060熒光值與單位值的轉(zhuǎn)換：A：計(jì)算1AtheNAMulti-Lyte類風(fēng)濕因子檢測(cè)系統(tǒng)設(shè)備應(yīng)用的是孔內(nèi)校正技術(shù)（Intra-WellCalibrationCD中。2、cutoff值cutoff值，cutoffCD中。3、計(jì)算通過孔內(nèi)校正技術(shù)，AtheNAMulti-Lyte系統(tǒng)自動(dòng)計(jì)算結(jié)果?？變?nèi)校正技術(shù)對(duì)內(nèi)標(biāo)做回歸分析，并通過附加標(biāo)準(zhǔn)和血清標(biāo)本的特征值調(diào)整計(jì)算出來(lái)的單位值。B、結(jié)果解釋：1、RF結(jié)果判斷：本試劑盒的試驗(yàn)結(jié)果分析可按下述標(biāo)準(zhǔn)判斷：?jiǎn)挝恢店幮詷?biāo)本陽(yáng)性標(biāo)本

<6IU/ml6IU/ml>25IU/ml質(zhì)量控制：1、每次試驗(yàn)都必須包括陰性對(duì)照（A1孔）和陽(yáng)性對(duì)照（B1孔。2、本系統(tǒng)通過陽(yáng)性和陰性對(duì)照來(lái)控制試驗(yàn)的有效性?？變?nèi)校正技術(shù)對(duì)以下標(biāo)準(zhǔn)做自動(dòng)分析。陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照對(duì)非特異性和對(duì)照抗原的微珠結(jié)果應(yīng)為陰性。陰性對(duì)照對(duì)多重微珠懸浮液中每個(gè)指標(biāo)都應(yīng)為陰性。 RFCD中。任何一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)不符合，整個(gè)試驗(yàn)就應(yīng)判為無(wú)效而需重復(fù)。3、標(biāo)本檢測(cè)的有效性取決于校正微珠及其與病人血清的反應(yīng)情況，通過孔內(nèi)校正技術(shù)可以對(duì)各參數(shù)自動(dòng)調(diào)整。任一標(biāo)準(zhǔn)不符合即可視為試驗(yàn)無(wú)效需重復(fù)。如果發(fā)生此類情況，數(shù)據(jù)報(bào)告會(huì)發(fā)出提示。4、根據(jù)地方或聯(lián)邦法規(guī)等要求還可以加入其他對(duì)照。外部控制應(yīng)能夠代表普通AtheNA非人血清標(biāo)本則可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。5、本質(zhì)量控制參照NCCLS的C24號(hào)文件：定性測(cè)試的統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)量控制。限制：1、本試劑盒不能作為唯一的診斷依據(jù)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床評(píng)價(jià)和其他診斷方法結(jié)果進(jìn)行病情判斷。2、避免使用溶血、脂血等血清標(biāo)本以免影響結(jié)果判斷，另外標(biāo)本中IgG濃度異常的也會(huì)有影響，因此要避免使用此類標(biāo)本。3、陰性結(jié)果并不能排除類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的可能，大約25%的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人的RF檢測(cè)結(jié)果為陰性。預(yù)期值：148例普通獻(xiàn)血標(biāo)本組中，128/148（86.5%）為陰性，18/148（12.2%）為陽(yáng)性，2/148（1.4%）為強(qiáng)陽(yáng)性。在已診斷為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床病人標(biāo)本組中，1/150（0.7%）為陰性，149/150（99.3%）為陽(yáng)性。其中，12/149（8%）為陽(yáng)性而137/149（92%）為強(qiáng)陽(yáng)性。WHOWHO64/225IU/ml24.25IU/ml。技術(shù)特征值：比較試驗(yàn)RFIgMELISA450150RF是已診斷為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病人標(biāo)本。試驗(yàn)結(jié)果如下。ELSIA結(jié)果AtheNA結(jié) 果ELSIA結(jié)果AtheNA結(jié) 果陽(yáng)性陰性總計(jì)陽(yáng)性30811319陰性0129129總計(jì)308140448*95%置信區(qū)間相對(duì)靈敏度：100%98.21-99.99%相對(duì)特異性：92.1%86.38-96.01%相對(duì)符合率：97.5%95.65-98.77%*450在外。本試劑盒臨床特異性的評(píng)價(jià)：150RF抗體。其中，128/148RFIgM128/14886.5%95%0.799-0.916。本試劑盒臨床靈敏度的評(píng)價(jià)：臨床靈敏度用150149/150為RFIgM抗體陽(yáng)性。靈敏度為149/150或99.3%。95%置信區(qū)間為0.963-0.999。重復(fù)性：intra-assayinter-assay6248IU/ml值、標(biāo)準(zhǔn)差和CV62。表2：精密度試驗(yàn)總結(jié)標(biāo)本編號(hào)特性第1天結(jié)果第2天結(jié)果第3天結(jié)果稀釋1稀釋2稀釋1稀釋2稀釋1稀釋21陰性1121111陰性1112111陰性1122111陰性1111112陰性1141112陰性1112112陰性1122112陰性1112113強(qiáng)陽(yáng)性2261971931852092193強(qiáng)陽(yáng)性2002042302142262113強(qiáng)陽(yáng)性2242261962022172133強(qiáng)陽(yáng)性2072171922182202034強(qiáng)陽(yáng)性1631661721741621584強(qiáng)陽(yáng)性1631451981601441584強(qiáng)陽(yáng)性1521621911741651514強(qiáng)陽(yáng)性1461601671751541575陽(yáng)性98991195陽(yáng)性98891085陽(yáng)性10119910105陽(yáng)性9810101096陽(yáng)性881091096陽(yáng)性10987996陽(yáng)性8810711106陽(yáng)性1099898第1天第2天第3天Intra-assay值Intra-assay值Intra-assay值 Inter-assay值平均值1平均值2平均值1平均值1標(biāo)本1SD0SD0.534522SD0SD0.38069CV%0.0CV%35.6CV%0.0CV%32.6平均值1平均值2平均值1平均值1標(biāo)本2SD0SD0.991031SD0SD0.69025CV%0.0CV%52.9CV%0.0CV%53.4平均值213平均值204平均值215平均值210標(biāo)本3SD12.04678SD15.42493SD7.225945SD12.49630CV%5.7CV%7.6CV%3.4CV%5.9平均值157平均值176平均值156平均值163標(biāo)本4SD8.253787SD12.36282SD6.53425SD13.07164CV%5.3CV%7.0CV%4.2CV%8.0平均值9平均值9平均值10平均值9標(biāo)本5SD1.069045SD0.64087SD0.916125SD0.89685CV%11.9CV%7.0CV%9.5CV%9.7平均值9平均值9平均值9平均值9標(biāo)本6SD0.886405SD1.195229SD0.916125SD1.034472CV%10.1CV%14.1CV%9.8CV%11.7交叉試驗(yàn)和影響物質(zhì)：38182AtheNAMulti-LyteRFIgM是有活性的，2ELISARFIgM也是有活性的。20個(gè)標(biāo)本中含潛在影響物質(zhì)。有溶血素含量異常（n=，膽紅素含量異常n=IgG濃度偏高n=）或脂質(zhì)含量偏高n=2044ELISA方法檢測(cè)也是陽(yáng)性。參考文獻(xiàn)：1、Turgeon, M.L.: Rheumatoid Arthritis. In: Immunology and Serology LaboratoryMedicine,2ndED.Shanahan,J.,ed.MosbyYearBookInc.,St.Louis,MO,Ch.28,pp387-398.19962、Wilske, K., Yocum,D.: Rheumatoid Arthritis. The status and Future CombinationTherapy.J.ofRheumatol.23(suppl44):1.19963、Jackson,G.:ImmunodeficiencesandAutoimmuneDisorders,In:ClinicalLaboratoryMedicine,Tilton,R.et.al.Eds.MosbyYearBookInc.,St.Louis,MO,Ch.36,pp485-504.19924、Richardson,C.,Emergy,P.LaboratoryMarkersofDiseaseActivity.J.ofRheumatol.Vol23(suppl44),23-30.19965Zuraw,B.,et.al.ImmunoglobulinE-RheumatoidFactorintheSerumofPatien