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蛋白質(zhì)含量測定2004-0-112/1/20231介紹蛋白質(zhì)含量測定方法Lowry法（酚試劑法）考馬斯亮蘭G-250染色法雙縮脲法微量凱氏定氮法紫外光譜215和225吸收差法紫外光譜280和260吸收差法紫外光譜280吸收法2/1/20232方法原理靈敏度(mg/ml)備注Lowry法堿性條件下蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)銅復(fù)合物該復(fù)合物隨之將磷鉬酸磷鎢酸還原成藍(lán)色復(fù)合物0.025-0.25650nmG-250染色法蛋白質(zhì)的存在影響酸堿滴定中所用某些指示劑的顏色變化從而改變這些染料的光吸收.考馬斯亮藍(lán)G-250在酸性溶液中為棕紅色當(dāng)它與蛋白質(zhì)通過范德華鍵結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色0.01-1595nm凱氏定氮法有機物與濃硫酸共熱,有機氮轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機氮氨,氨與硫酸作用成硫酸銨,后者與強堿作用釋放出氨.借蒸汽將氨蒸至酸液中,根據(jù)此過量酸液被中和的程度即可計算出樣品的含氮量,再推知蛋白含量0.2-2雙縮脲法在堿性溶液中雙縮脲與銅離子結(jié)合形成復(fù)雜的紫紅色復(fù)合物。蛋白質(zhì)及多肽的肽鍵與雙縮脲的結(jié)構(gòu)類似，也能與銅離子在堿性環(huán)境中形成紫紅色復(fù)合物。1-1054Onm215&225吸收差法蛋白質(zhì)的肽鍵在200-250nm有強的紫外吸收，且波長越短光吸收越強。若選用215nm可減少干擾及光散射。用215nm和225nm光吸收差值可減少非蛋白質(zhì)成分引起的誤差。0.02-0.1mg/ml=0.144(A215-A225)280吸收法蛋白質(zhì)中的W和Y殘基的苯環(huán)中含共軛雙鍵，在280nm有最大吸收0.1-1280nm280&260吸收差法核酸260nm的吸收比280nm強，而蛋白質(zhì)正相反，0.1-1mg/ml=1.45A280-0.74A2602/1/20233Lowry法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法與材料結(jié)果蛋白濃度00.20.40.60.81OD650nm0.0920.1050.1180.1270.1430.15452/1/202342/1/20235TNF-a生物學(xué)活性檢測基本原理TNF的生物學(xué)活性之一是能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞。TNF的殺傷活性主要由TNFR1和TNFR2介導(dǎo)。用放線菌素D、絲裂霉素C、放線菌酮等處理細(xì)胞，可以明顯增強TNF-a殺傷腫瘤細(xì)胞活性。2/1/20236實驗方法標(biāo)準(zhǔn)品稀釋樣品稀釋細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)晶紫染色繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品活性曲線，計

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