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文檔簡介
高效液相色譜法測定19個鷹嘴豆品種中寡糖的含量Abstract
Theextractionprocedureofoligosaccharidesfromchickpeaseedswasoptimizedandsufficientextractionwasachievedwith50%ofethanol-waterinaratioof10:1forsolventtodefattedchickpeamealat50°Cfor30min.Undertheoptimalextractionconditions,thecontentsofoligosaccharidesin19cultivarsofchickpeaseedsweredeterminedbyHPLC.Theresultsshowedthatthemainα-galactooligosaccharides(α-GOS)inchickpeaseedswereraffinose,stachyose,verbascoseandanunknownglycoside,whichwasisolated,purified,andidentifiedasciceritol.Ciceritol,themainsugarinallthechickpeasamples,accountedforabout50%ofthetotalα-GOS.
Therewereconsiderablevariationsinthelevelsofα-GOSandsucrosebetweenspecies,especiallyverbascosewhichcouldonlybedetectedin7samples.Withthehighestamountofα-GOSandalowamountofsucrose,the171wasthebestchoiceforobtainingα-GOSforuseasaprebioticinfunctionalfoods.Keywords:Chickpea(CicerarietinumL)seed;α-Galactooligosaccharide;Sucrose;Optimization;Extractionmethod;HPLC通過實驗對鷹嘴豆種子中寡糖的提取進行優(yōu)化,最終確定了寡糖的提取條件為石油醚脫脂,料液比1:10,提取溶劑為50%乙醇,50℃水浴加熱30分鐘,并運用HPLC對19個鷹嘴豆品種中低聚糖的含量進行了測定。結(jié)果表明:鷹嘴豆種子中主要含有的α-低聚半乳糖有棉子糖(三糖),水蘇糖(四糖),毛蕊花糖(五糖),和一個未知的糖,并對其進行了分離,鑒定,確定為Ciceritol。并且Ciceritol是鷹嘴豆中含量最多的低聚糖,約占α-GOS的50%。α-GOS和蔗糖(二糖)的含量在不同品種間存在較大差異,尤其是毛蕊花糖,只在7個品種中檢測到。通過含量測定,找到了19個鷹嘴豆品種中,171鷹嘴豆中α-低聚半乳糖的含量最高,同時蔗糖含量相對較低,是制作功能性食品的最佳選擇。Abstract
EthanolconcentrationTempera-tureExtractiontimeRatio(m/v)10%20℃15min1:5230%50℃30min1:10350%70℃60min1:15470%90℃1:20580%
Opitimizationofextractionconditionsforoligosachharides寡糖的提取與制備1.先將種子在85℃下干燥2小時,粉碎過6號篩。2.取500g干粉,用2L石油醚脫脂,得到脫脂鷹嘴豆。3.取脫脂鷹嘴豆,一式三份,每份1g,用10ml50%乙醇50℃溫浸3次,每次30min,合并上清,減壓濃縮成浸膏。4.浸膏復溶于5.0ml的流動相(乙腈:水=75:25)Fig.1Chromatographicprofileoffreesugarsinextractionofchickpeaseeds.1,Ribose;2,Fructose;3,Sucrose;4,Unknowncompound;5,Maltose;6,Raffinose;7,Ciceritol;8,Stachyose;9,Vebascose.Agilent1100seriesSugar-DColum(4.6*250mm)Ace:Water=75:25Flowrate=1ml/minInjvolume=20ul核糖果糖蔗糖(二糖)未知麥芽糖Ciceritol(三糖)水蘇糖(四糖)毛蕊花糖(五糖)棉子糖(三糖)ExtractionandIdentificationofCiceritol
Theextractofchickpeaseedswasloadedontoacolumn(3×50cm)ofcharcoal–Celite(1:1,w/w)andsuccessivelyelutedwithwaterandincreasingconcentrationsofethanol(5–30%).ThefractionswerescreenedbyreactionwithnaphthoresorcinolandthosewithsugarswerefurtherdetectedbyHPLC.Thefractionscontainingciceritolwerecombined,concentratedinvacuo,andpurifiedbygelpermeationonacolumn(1.5×90cm)ofBiogelP-2.Degassedwaterwasusedastheeluentataflowrateof20ml/h.Thefractionscontainingpureciceritol,analyzedbyHPLC,werecombined,concentrated,andfreeze-dried.ThestructurewasconfirmedbyESI-TOF-MS(AppliedBiosystemsmassspectrometer)andNMR(BrukerDRX500)withD2Oasthesolvent.該級分通過間二萘酚反應進行篩選并用HPLC進一步檢測。將含ciceritol的餾分進行合并,減壓濃縮,并通過BiogelP-2凝膠色譜柱(1.5×90厘米)進行純化,并以20ml/h的流速用脫氣水進行洗脫。通過HPLC分析該級分,合并,濃縮,冷凍干燥得到純的Ciceritol。其結(jié)構(gòu)經(jīng)ESI-TOF-MS儀(AppliedBiosystems質(zhì)譜儀)和NMR(Bruker公司DRX500)進行鑒定。將鷹嘴豆種子的提取物裝載到木炭硅藻土柱(3×50厘米)上,并依次用水及濃度不斷增加的乙醇(5-30%)進行梯度洗脫。Fig.2Thechemicalstructureofciceritol.α-D-吡喃半乳糖基–(1→6)?-α-D-吡喃半乳糖基–(1→2)-4-O-甲基-手性肌醇O-α-
D-galactopyranosyl-(1→6)-O-α-D-galatopyranosyl-(1→2)-1D-4-O-
methyl-chiro-inositol123456123456123456被甲基化的肌醇(環(huán)己六醇)M/Z
541[M+的Na]
+=518α-1,6糖苷鍵Fig.3Theeffectsofextractionconditionsonthecontentsofα-GOSandsucroseinachickpeaseeds.Concentrationsof
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