半滑舌的人工催產(chǎn)和人工授精

半滑舌的人工催產(chǎn)和人工授精

半津舌是中國特有的經(jīng)濟(jì)海水魚類。它屬于嗜水性的底魚類，通常分布在中國沿海地區(qū)。它主要屬于開目、舌科和舌科。具有生長速度快、適應(yīng)性好、營養(yǎng)成分低、口感清新優(yōu)美、口感細(xì)膩、營養(yǎng)豐富、市場價(jià)值高等特點(diǎn)。這是理想的增加育種對(duì)象。近年來,我國科技人員對(duì)半滑舌鰨人工繁殖和生殖調(diào)控進(jìn)行了大量研究,并對(duì)自然海區(qū)半滑舌鰨的生殖習(xí)性和繁殖生態(tài)進(jìn)行調(diào)查,于1993年首次突破半滑舌鰨人工育苗技術(shù),隨后進(jìn)行了半滑舌鰨人工養(yǎng)殖和生殖調(diào)控技術(shù)的研究,建立了半滑舌鰨親魚培育、采卵技術(shù)和半滑舌鰨苗種生產(chǎn)技術(shù),同時(shí)還進(jìn)行了半滑舌鰨染色體分析和溫度對(duì)性別分化的影響等研究工作.另外和苗種生產(chǎn)相關(guān)的研究工作還有溫度對(duì)胚胎發(fā)育方面的影響、早期發(fā)育、饑餓對(duì)苗種發(fā)育影響以及耗氧率和窒息點(diǎn)方面的研究.但目前的半滑舌鰨苗種生產(chǎn),基本是以人工控溫、控光等人工條件下進(jìn)行自然產(chǎn)卵為主,附以捕撈極少部分為野生苗.這種生產(chǎn)模式的可操控性差,親魚產(chǎn)卵率低,不利于有計(jì)劃的安排生產(chǎn),也嚴(yán)重影響了半滑舌鰨苗種的推廣及養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的形成.采用激素誘導(dǎo)魚類卵母細(xì)胞最終成熟和排卵是獲得魚類未受精卵的有效技術(shù),這項(xiàng)技術(shù)在淡水魚類上用得比較多,也很成功,但在海水鲆鰈魚類上,用得比較少,特別是在半滑舌鰨上,由于半滑舌鰨魚性格暴躁、抗應(yīng)激能力差、不耐人工操作,而半滑舌鰨懷卵親魚更是嬌嫩,只要擠壓腹部幾次,親魚就會(huì)死亡,因此,半滑舌鰨親魚的人工催產(chǎn)和人工授精操作難度很大,目前尚未見成功報(bào)道.1材料和方法1.1半滑舌親魚的人工催產(chǎn).利用萊州市明波水產(chǎn)有限公司人工培育的半滑舌鰨雌性親魚100尾,雄性親魚約1000尾,經(jīng)過生殖調(diào)控達(dá)到性成熟并達(dá)到可以催產(chǎn)程度進(jìn)行人工催產(chǎn).半滑舌鰨親魚雌性親魚應(yīng)選擇體質(zhì)健壯、體表無損傷、體重在1.5㎏以上個(gè)體.雄性親魚要求體重在100g以上,活力較強(qiáng)即可.在催產(chǎn)前兩個(gè)月進(jìn)行控溫控光,按每平方米一雌二雄的密度室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖,鹽度不低于30‰,并投喂優(yōu)質(zhì)高蛋白全價(jià)配合餌料和沙蠶等新鮮活餌料.當(dāng)水溫升到23℃后維持此溫度,雌魚的性腺明顯發(fā)育后可準(zhǔn)備進(jìn)行人工催產(chǎn).1.2兩種激素組合的單因素試驗(yàn)結(jié)果HCG:雌魚50-150IU/㎏,雄魚300-500IU/㎏;LRH-A2:雌魚0.5-2.5μg/㎏,雄魚3-6μg/㎏;LRH-A3:雌魚0.4-2.0μg/㎏,雄魚2-5μg/㎏;另外,幾種激素組合也有很好的效果:HCG+LRH-A3:雌魚HCG40-60IU+LRH-A30.4-1.5μg/㎏;LRH-A3+DOM:雌魚LRH-A30.4-2.0μg/㎏+DOM1-2mg/㎏.1.3人工生產(chǎn)和人工產(chǎn)品的培養(yǎng)1.3.1產(chǎn)親魚的選擇1.3.2麻醉、直接注射選好親魚后,按以上催產(chǎn)劑量進(jìn)行注射催產(chǎn)激素.催產(chǎn)親魚數(shù)量比例按雌:雄=1:4進(jìn)行.注射時(shí)可以用MS-222進(jìn)行麻醉或直接注射,直接注射時(shí)要在桌上鋪一層厚度>4cm的海綿,在海綿上鋪上一塊海水浸濕的大毛巾,親魚從水中撈起后,迅速用大毛巾包住,以防其受傷.注射時(shí)要注意,總注射量雌魚不要超過1ml,雄魚不要超過0.2ml,注射部位為側(cè)線上方頭部后方的肌肉較厚部分,進(jìn)針角度不要超過45°,雄魚注射時(shí)還要注意進(jìn)針深度,不要穿透魚體.1.3.3成蟲的操作和孵化到達(dá)效應(yīng)時(shí)間以后,要每30min檢查一次,當(dāng)雌魚性腺由硬明顯變軟,并感覺性腺內(nèi)的卵有明顯的流動(dòng)感,即可進(jìn)行擠卵和人工授精.擠卵時(shí)的操作和注射催產(chǎn)激素時(shí)一樣進(jìn)行.當(dāng)雌魚從水中撈起后,要注意用手按住生殖孔部位,以防卵流出或噴出并迅速用毛巾包好魚體,生殖孔一側(cè)露在外側(cè)并擦去海水.用手在上下兩側(cè)從后到前輕壓性腺部位,即可將卵擠出,接在燒杯中.雄魚可以握住其頭部,直接將精液擠到有卵的燒杯中即可.每雌魚的卵用2-3條雄魚的精液即可.將精卵混均勻,加入海水,20min后沖去過多的精液即可轉(zhuǎn)入孵化系統(tǒng)進(jìn)行孵化.1.3.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析同批次魚按柳學(xué)周等的方法采取部分自然產(chǎn)卵進(jìn)行對(duì)照.人工授精2h后在有目微尺的顯微鏡下測量卵徑,在原腸中期計(jì)算受精率(約受精后12h),孵化前期計(jì)算出卵率(孵化前浮卵量占人工授精后浮卵的百分比,約受精后34h),孵化后計(jì)算孵化率.試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示,用SPSSforWindows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-WayANOVE),S-N-K法進(jìn)行多重比較,差異顯著性水平設(shè)置為α=0.05,極顯著水平設(shè)為α=0.01.2結(jié)果2.1不同濃度hcg的效應(yīng)時(shí)間效應(yīng)時(shí)間和水溫之間關(guān)系極為密切,本研究是在水溫23±0.5℃下進(jìn)行,發(fā)現(xiàn)除單獨(dú)使用HCG的效應(yīng)時(shí)間稍長,在45-52h之間,其他激素,無論單獨(dú)使用還是混合使用,效應(yīng)時(shí)間均在40h左右,但各組試驗(yàn)的效應(yīng)時(shí)間之間均差異不顯著(圖1).2.2人工催卵徑及自然產(chǎn)卵卵徑經(jīng)對(duì)5個(gè)批次的人工催產(chǎn)卵的卵徑進(jìn)行測量,發(fā)現(xiàn)人工催產(chǎn)卵徑為1.02±0.13mm,明顯低于自然產(chǎn)卵的卵徑,自然產(chǎn)卵卵徑為1.11±0.08mm.2.3綜合繭率、繭率和孵化率統(tǒng)計(jì)10次自然產(chǎn)卵和人工催產(chǎn)卵的受精率、出卵率和孵化率發(fā)現(xiàn)和對(duì)照組差異不明顯.但受精率變化幅度較大.2.4多次催產(chǎn)效果10尾雌魚用不同激素催產(chǎn)結(jié)果見表1.總浮卵率89.4%,總受精率65.3%,總孵化率為44.8%.共收孵化前卵1060ml,孵化魚苗約83萬尾.綜合比較多次催產(chǎn)的結(jié)果,其中以LRH-A3+DOM的效果稍好,除上浮卵率稍高外,效應(yīng)時(shí)間相對(duì)準(zhǔn)確.3親魚和激素用量過大時(shí)導(dǎo)致親魚死亡通過人工催產(chǎn)可以使半滑舌鰨的苗種繁育工作有計(jì)劃的進(jìn)行,提高半滑舌鰨苗種產(chǎn)量,并可提前2-3個(gè)月進(jìn)行苗種的生產(chǎn).特別適合人工控溫控光技術(shù)不是很成熟的情況下,也可穩(wěn)定獲得苗種.對(duì)這種魚的養(yǎng)殖推廣有重要意義和應(yīng)用價(jià)值.在催產(chǎn)過程中,發(fā)現(xiàn)半滑舌鰨的人工催產(chǎn)的難度還是很大的,主要表現(xiàn)在以下的幾個(gè)方面:一是操作難度,親魚很容易受傷并引起死亡;二是這種魚對(duì)激素過于敏感,一定要嚴(yán)格按體重以適當(dāng)?shù)膭┝看弋a(chǎn),激素劑量稍大就會(huì)引起親魚死亡;三是雄魚取精難度較大,由于雄魚個(gè)體一般較小,雖然注射催產(chǎn)激素,但精液量仍然很少,人工授精存在一定的難度.另外在研究中還發(fā)現(xiàn),半滑舌鰨盡管對(duì)催產(chǎn)激素十分敏感,但對(duì)激素幾乎沒有選擇性,催產(chǎn)的成功取決于雌性親魚的成熟度上.雌魚性腺發(fā)育的過于飽滿和發(fā)育程度過低幾乎可以100%的引起催產(chǎn)魚的死亡,因此關(guān)于如何更準(zhǔn)確的判斷何種發(fā)育程度可以進(jìn)行催產(chǎn)還需進(jìn)一步的研究.通過反復(fù)的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),半滑舌鰨對(duì)各種催產(chǎn)激素均十分敏感,各種激素均能用于催產(chǎn)生產(chǎn).但是,各種激素的催產(chǎn)劑量范圍較小,稍高的劑量即可引起親魚