奶牛日糧及牛奶中克百威的測(cè)定

奶牛日糧及牛奶中克百威的測(cè)定

食用農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全與人們的身心健康和社會(huì)穩(wěn)定密切相關(guān)，也是一個(gè)現(xiàn)在的突出問(wèn)題。近年來(lái),出現(xiàn)的一系列牛奶安全問(wèn)題,嚴(yán)重打擊了消費(fèi)者對(duì)奶制品的信心,而克百威(carbofuran)作為一種常用高效廣譜的殺蟲劑和殺螨劑,其在農(nóng)產(chǎn)品中是否有殘留,已引起人們的高度重視?？税偻r(nóng)藥是氨基甲酸脂類農(nóng)藥的一種,別名呋喃丹或蟲螨威,也叫大扶農(nóng),化學(xué)名2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基甲氨基甲酸脂,具有胃毒、觸殺和內(nèi)吸等殺蟲作用,廣泛用于棉花、水稻、甘蔗、花生、大豆、煙草等作物害蟲的防治。在酸性土壤中克百威不易降解,易污染土壤和水源,殘效期長(zhǎng),尤其在蔬菜和糧食生產(chǎn)中違規(guī)使用克百威,會(huì)對(duì)公眾的健康構(gòu)成直接威脅。雖然我國(guó)近年在蔬菜上已禁用該農(nóng)藥,但由于其對(duì)某些作物具生長(zhǎng)刺激作用,所以仍有不少違章使用現(xiàn)象。目前,國(guó)內(nèi)關(guān)于克百威殘留檢測(cè),只有在果蔬、土壤等相關(guān)樣品的研究,而在奶牛日糧及牛奶中是否有殘留的研究尚未見報(bào)道。GC-MS(GasChromatography-MassSpectrometry,氣相色譜質(zhì)譜)法可以同時(shí)進(jìn)行定量測(cè)定和陽(yáng)性確證,具有高靈敏性,是檢測(cè)克百威殘留的一種有效方法,本試驗(yàn)利用GC-MS技術(shù)檢測(cè)了克百威在奶牛日糧及牛奶中的殘留量。1材料和方法1.1u3000儀器1200液相色譜(FLD),組織搗碎機(jī)(DS-1型),恒溫水浴振蕩機(jī)(SHZ-88型),谷物粉碎機(jī)(FW-100型),超聲波清洗器(KQ-250DE型),旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器(BUCHIR-200型)。1.2牧草飼料及牛奶樣品處理同一個(gè)牛場(chǎng)內(nèi)12頭健康奶牛,分3組,分別采集試驗(yàn)期間牧草、飼料及牛奶樣品,每組4個(gè)樣本。由于牛奶樣品是可被直接飲用食品,本試驗(yàn)對(duì)采集回的牛奶樣品進(jìn)行早、中、晚跟蹤采樣和測(cè)定,采集回樣品置于-20℃保存。1.2.1乙腈的預(yù)處理分別稱取牧草、飼料及牛奶樣品20g放入組織搗碎機(jī)中,向其中加入80mL乙腈,組織搗碎約3min,在鋪有助濾劑的布氏漏斗中減壓抽濾,收集的濾液轉(zhuǎn)移到裝有6gNaCl的具塞量筒中,振蕩150下,靜置1min,再振蕩100下靜置60min,使水相和乙腈相充分分層。1.2.2淋洗氨基柱的制備吸取上層清液20mL置于燒瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干,2mL二氯甲烷和甲醇(V/V=95∶5)的混合溶液定容,待凈化。用10mL的淋洗液(二氯甲烷:甲醇=95∶5)淋洗氨基柱,待液面接近上層底部時(shí),加入樣品的溶解液。用二氯甲烷和甲醇(V/V=95∶5)的混合溶液10mL淋洗層析柱,淋洗液全部收集,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上(40℃)減壓濃縮至干,用甲醇定容至2mL,過(guò)膜,進(jìn)行液質(zhì)分析。1.3柱溫、進(jìn)樣量、激發(fā)波長(zhǎng)色譜柱:4.6m×150mm×5μm;柱溫:42℃;進(jìn)樣量:5μL;流動(dòng)相:甲醇∶水=20∶80;激發(fā)波長(zhǎng):330nm;發(fā)射波長(zhǎng):465nm。1.4檢測(cè)方法1.4.1定性法采用克百威的標(biāo)準(zhǔn)樣品質(zhì)譜圖進(jìn)行定性分析(圖1)。1.4.2定性法2試驗(yàn)結(jié)果2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限向不含農(nóng)殘的奶牛日糧及牛奶中,添加0.5μg/mL的克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液,根據(jù)克百威的最小進(jìn)樣量峰高為噪聲3倍量計(jì)算,最小檢出限為1.5×10-11g。2.2克百威在牧草、飼料和牛奶上的最低檢測(cè)濃度樣品取20g,定容至80mL,進(jìn)樣5L,克百威在牧草上的最低檢測(cè)濃度為1.21×10-3mg/kg,飼料最低檢測(cè)濃度為1.22×10-3mg/kg,牛奶上的最低檢測(cè)濃度為1.20×10-3mg/kg。2.3相對(duì)保留時(shí)間即雜質(zhì)峰的保留時(shí)間與主峰保留時(shí)間的比值,是一種化合物在規(guī)定條件下在層析系統(tǒng)中的運(yùn)行時(shí)間。克百威為18.0~18.2min。2.4檢測(cè)物品與標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖的分析采用氣象色譜圖(圖3~6),將實(shí)際檢測(cè)物品與標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖進(jìn)行對(duì)比分析。在相對(duì)保留時(shí)間之內(nèi),通過(guò)比較峰值高度來(lái)判定,若峰值未超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品峰值,則無(wú)農(nóng)藥殘留。3克百威在牛牛日糧及牛奶中的殘留檢測(cè)殘留農(nóng)藥嚴(yán)重超標(biāo)并危害人體,常用的氨基甲酸酯類農(nóng)藥,能通過(guò)呼吸道、消化道及皮膚進(jìn)入人體后,其分子全部與膽堿酯酶的陰離子部位相結(jié)合,通過(guò)可逆性與競(jìng)爭(zhēng)性相互作用,兩者形成同一中間產(chǎn)物,在適當(dāng)條件下又分解為膽堿酯酶與氨基甲酸酯,但在整個(gè)反應(yīng)過(guò)程中,膽堿酯酶與氨基甲酸酯并未發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。氨基甲酸酯類農(nóng)藥重度中毒者會(huì)出現(xiàn)胸悶、肌肉顫抖等,嚴(yán)重的可出現(xiàn)脈搏、呼吸加快,甚至昏迷癥狀。而慢性中毒沒(méi)有上述明顯癥狀,反而更加深了人們對(duì)殘留農(nóng)藥的麻痹大意?？税偻侔被姿狨ヮ愞r(nóng)藥,原是我國(guó)生產(chǎn)和應(yīng)用的氨基甲酸酯類殺蟲劑主要品種之一,殘留克百威長(zhǎng)期作用于人體,可能導(dǎo)致基因突變,由于克百威與膽堿酯酶結(jié)合不可逆,因此毒性較高。本實(shí)驗(yàn)室采用氣象色譜法,建立一套適應(yīng)當(dāng)前畜牧業(yè)發(fā)展的快速檢測(cè)方法,也為克百威在牛牛日糧及牛奶中的殘留量檢測(cè)提供理論依據(jù)。目前,有關(guān)克百威在農(nóng)藥中的殘留檢測(cè),在奶牛日糧及牛奶中的研究未見報(bào)道。本試驗(yàn)采用具有高靈敏性及特異性的高效氣相色譜質(zhì)譜法,通過(guò)將克百威水解或衍生化反應(yīng),以提高克百威及其代謝物的熱穩(wěn)定性后進(jìn)行測(cè)定。曹殿潔等用氣象色譜法檢測(cè)常見果蔬中克百威的殘留;王建等運(yùn)用氣相色譜法檢測(cè)克百威的殘留;譚頭云等用氣相色譜法測(cè)定大豆中克百威及其代謝物的殘留量。陽(yáng)海等研究發(fā)現(xiàn),在弱堿性條件下,克百威降解速率最快,在酸性條件下不易降解,水溶液中的K+、Na+等金屬陽(yáng)離子對(duì)克百威降解起抑制作用,推測(cè)牛瘤胃的酸性環(huán)境不利于含克百威農(nóng)藥的日糧降解,食用此類牛肉或乳制品,易對(duì)人體健康造成危害。另外,克百威的超標(biāo)殘留能否通過(guò)日糧的飼喂造成乳制品的安全問(wèn)題,目前還不清楚,我們將在下一步實(shí)驗(yàn)進(jìn)行更深一步的研究。本試驗(yàn)通過(guò)比較色譜圖中可疑峰是否為克百威殘留,采用SCAN對(duì)可疑峰進(jìn)行定性分析,將標(biāo)準(zhǔn)圖與色譜圖進(jìn)行比較,對(duì)18min6.5質(zhì)量數(shù)處特征離子組進(jìn)行離子掃描(SIM)、定性分析,結(jié)果未檢測(cè)到克百威殘留。研究結(jié)果表明,克百威在牛奶中無(wú)殘留,在牧草和飼料中有殘留,但殘留量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于最低殘留限量(0.1mg/kg)要求,綜上奶牛日糧及牛奶中克百威的殘留量符合《GB2763-2005食品中最大農(nóng)藥殘留限量》標(biāo)準(zhǔn),對(duì)食品安全無(wú)不利影響。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量分析。準(zhǔn)確稱取克百威標(biāo)準(zhǔn)品0.0100g,用丙酮定容至10mL,配制成1000μg/mL