菊花的組織培養(yǎng)上課

課題1：菊花的組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)是指在人工培養(yǎng)基上，離體培養(yǎng)植物的器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體，并使其生長、增殖、分化以及再生植株的技術(shù)。一、植物組織培養(yǎng)的基本過程（1）細(xì)胞的分化①概念：在個體發(fā)育中，相同細(xì)胞的后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程.②實(shí)例：如：受精卵增殖、生長、分化形成組織、器官、系統(tǒng).③特點(diǎn)：B.不可逆性：C.穩(wěn)定性：在整個分化過程中，細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)是不變的、穩(wěn)定的。A.持久性：是一種持久性的變化，它發(fā)生在生物體的整個生命過程中,在胚胎期達(dá)到最大限度.細(xì)胞分化是依次漸變，不可逆轉(zhuǎn)的.⑤原因：基因在特定的時間和空間條件下的選擇性表達(dá)的結(jié)果.④結(jié)果：形成不同的細(xì)胞和組織（2）植物組織培養(yǎng)的原理：植物細(xì)胞的全能性①概念：高度分化的植物細(xì)胞，仍具有發(fā)育為完整個體的潛能，植物細(xì)胞的這種特性叫做植物細(xì)胞的全能性②細(xì)胞具有全能性的原因：生物體的每一個細(xì)胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)，都有發(fā)育成為完整個體所必需的全部基因.③實(shí)例：美國生物學(xué)家斯圖爾德利用胡蘿卜根韌皮部細(xì)胞培養(yǎng)成胡蘿卜植株受精卵>生殖細(xì)胞>體細(xì)胞④全能性的比較:二、植物組織培養(yǎng)的基本過程:愈傷組織愈傷組織是通過細(xì)胞分裂形成的，其細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，高度液泡化呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。脫分化：由高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，又稱去分化。再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織在培養(yǎng)過程中重新分化根或芽等器官的過程愈傷組織:細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則,是高度液泡化的、成無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞.三、影響植物組織培養(yǎng)的因素：1、外植體的選取

不同植物的組織培養(yǎng)難度不同同一種植物的不同組織培養(yǎng)難度不同2、培養(yǎng)基的配制(MS培養(yǎng)基)

大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S

微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co

有機(jī)物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等植物激素：生長素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等未開花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝枝條中部的芽①常用的植物激素：生長素、細(xì)胞分裂素和赤霉素生長素類：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）細(xì)胞分裂素類：激動素（KT）、6－芐基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素類：赤霉酸（GA3）3、植物激素的影響討論：你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時能夠維持培養(yǎng)基的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)，無機(jī)鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。②生長素和細(xì)胞分裂素作用植物中生長素和細(xì)胞分裂素是啟動細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。在生長素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強(qiáng)的趨勢使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂，但不利分化先使用細(xì)胞分裂素后使用生長素細(xì)胞既分裂也分化同時使用分化頻率提高生長素細(xì)胞分裂素：>有利于根的分化生長素細(xì)胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的分化生長素細(xì)胞分裂素：＝促進(jìn)愈傷組織生長③生長素和細(xì)胞分裂素同時使用，用量的比例對植物細(xì)胞發(fā)育方向的影響思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問題？生長素/細(xì)胞分裂素高利于根的形成低利于芽的分化4、pH、溫度、光照

（菊花組培：

pH=5.8，溫度控制在18—22℃，每日光照12h）5、無菌環(huán)境在組織培養(yǎng)的整個過程中，都需要一個無菌環(huán)境，包括培養(yǎng)基的滅菌、外植體消毒以及接種過程的無菌操作等。注：植物組織培養(yǎng)過程離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素>生長素細(xì)胞分裂素<生長素植物細(xì)胞培養(yǎng)不需要光需要光制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒

接種

培養(yǎng)栽培四、實(shí)驗(yàn)操作

移栽沖洗—酒精—無菌水沖洗—氯化汞—無菌水沖洗至少三次之上配制各種母液配制培養(yǎng)基滅菌1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈——灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。在整個操作過程中，是如何來實(shí)現(xiàn)