發(fā)光及血流變

發(fā)光及血流變化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)是近二十年來發(fā)展非常迅速的非放射性免疫技術(shù)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫技術(shù)是一項免疫測定技術(shù)，繼酶免疫分析技術(shù)、放射免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)之后發(fā)展的一項新興測定技術(shù)。由于這種測定具備很高的特異性和很小的干擾，因此，如同放射免疫分析（RIA）、熒光免疫測定（FIA）等樣利用免疫反應(yīng)的特異性和化發(fā)光本身的信號特異性形成了目前所說的化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)。2021/4/272發(fā)光免疫分析技術(shù)直接化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析(CLEIA)電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECLIA)2021/4/273工作原理：

化學(xué)發(fā)光免疫分析儀是通過檢測患者血清從而對人體進行免疫分析的醫(yī)學(xué)檢驗儀器?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析(CLEIA)是用待測樣本與固相包被在白色不透明微孔板中的抗體結(jié)合，再與參與化學(xué)反應(yīng)的標(biāo)記已知抗體（或抗原）的酶發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體—待測抗原—酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌后加入底物，酶催化分解底物發(fā)光，由光量子檢測系統(tǒng)接受，光電倍增管將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯?，再把它們傳送至計算機數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計算出待測物的濃度。2021/4/274化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（CLEIA)的酶辣根過氧化物酶（HRP）堿性磷酸酶（ALP）2021/4/275辣根過氧化物酶（HRP）反應(yīng)原理：待測樣本與固相包被在白色不透明微孔板中的抗體結(jié)合，再與HRP標(biāo)記的已知抗體（或抗原）發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體—待測抗原—酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌后加入魯米諾、H2O2、供氫體（DH2）、化學(xué)發(fā)光增強劑底物：1.常用的發(fā)光劑為魯米諾（或其衍生物）2.參與催化反應(yīng)的H2O2和DH2化學(xué)發(fā)光增強劑：用于增強發(fā)光和延長發(fā)光時間，從而提高靈敏度*魯米諾和H2O2在無HRP催化時也能緩慢自行發(fā)光，故配置成兩瓶底物試劑2021/4/276堿性磷酸酶（ALP)反應(yīng)原理：待測樣本與固相包被在白色不透明微孔板中的抗體結(jié)合，再與標(biāo)記已知抗體（或抗原）的ALP發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體—待測抗原—酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌后加入金剛烷（AMPPD）、化學(xué)發(fā)光增強劑，在ALP的作用下AMPPD的磷酸脂基水解得到一個穩(wěn)定的中間體AMPD，AMPD經(jīng)分子內(nèi)電子轉(zhuǎn)移裂解為一分子金剛烷酮和一分子處于激發(fā)態(tài)的間氧苯甲酸甲酯陰離子，當(dāng)其回到基態(tài)時則產(chǎn)生470nm的光，可持續(xù)幾十分鐘。底物：常用的發(fā)光劑為金剛烷（AMPPD）2021/4/277血液流變學(xué)血流變儀的工作原理：采用錐/板式測量方式，通過一個低慣性的轉(zhuǎn)矩馬達對被測試液體施加一個受控應(yīng)力，驅(qū)動軸由一個低阻力磁浮軸承保持在中心位置，它將施加的應(yīng)力傳遞到被測液體上，其測試頭為錐板式。其測試原理是依據(jù)牛頓粘性定理。2021/4/2781920年提出流變的概念：物體產(chǎn)生流動與變形1948年提出生物流變學(xué)(Biorheology)：生命現(xiàn)象中的流變學(xué)，即血液、淋巴液其他體液、玻璃體，軟組織如血管、肌肉、晶體、甚至骨骼，細(xì)胞質(zhì)等均可發(fā)生流變。到1951年提出血液流變學(xué)(Hemorheology)：研究血液及其有形成分的流動性與形變規(guī)律及其相互作用的流變學(xué)一、發(fā)展史血液流變學(xué)2021/4/279二、血液流變學(xué)研究的內(nèi)容1.宏觀流變學(xué)（Macrohemorheology）

2.血細(xì)胞流變學(xué)（Cellularhemorheology）

3.分子血液流變學(xué)（Moleculehemorheology）研究全血在各種切變率下的表觀粘度及血漿粘度。從分子水平上研究血液成分的流變特性及其分子基礎(chǔ)，結(jié)構(gòu)和功能之間的相互關(guān)系。研究血液中有形成分的流變學(xué)特性。研究全血在各種切變率下的表觀粘度及血漿粘度。研究血液中有形成分的流變學(xué)特性。2021/4/2710三、血液的流變學(xué)特性層流(laminarflow)或滯流(viscousflow):當(dāng)流體在管中流動時，若其質(zhì)點始終沿著與管軸平行的方向作直線運動，質(zhì)點之間沒有遷移，互不混合，整個管的流體就如一層一層的同心圓筒在平行地流動。2021/4/2711血液在血管中是分層流動的，故越靠近中央流速越快，反之越慢.血液中的血細(xì)胞在血管中流動時，表現(xiàn)出明顯的趨軸性，血細(xì)胞處于血管的中央，其周圍是血漿層，稱為軸流人體內(nèi)血液的流動大都屬于層流，在血液流動很快或血管很粗的部位（如在主脈中）容易產(chǎn)生湍流。2021/4/2712四、血液的流變學(xué)基礎(chǔ)概念1.內(nèi)摩檫力（internalfriction）：相鄰快慢兩層之間驅(qū)使整體血液流動產(chǎn)生的摩檫力。f=(η·△V/△X)·△S

2.切應(yīng)力（shearstress）：在單位面積上所承受的粘滯力,驅(qū)動各層向切線方向形變的力。τ=f/△S3.切變率（shearrate）：層流中單位距離的兩個液層的流速之差。g=△V/△X單位(秒-1,s-1)△X△V△S兩層接觸面積η內(nèi)摩擦系數(shù)沒有顆粒混合的單一性流體在管腔內(nèi)呈層狀流動，其截面上的流速分布呈拋物線。2021/4/27134.粘度（η）：衡量液體在外力作用下以層流形式流動時，流體內(nèi)不同的薄層以不同的速度移動的內(nèi)摩擦力或分子間的內(nèi)聚力阻礙分子間的相對運動而產(chǎn)生阻力的度量。為切應(yīng)力（τ）與切變率（g）之比。單位：毫帕斯卡·秒（mPa·S）5.比粘度：比粘度指某液體的粘度與標(biāo)準(zhǔn)參照液的粘度的比值，常與水或生理鹽水（NS）作比較。比粘度值與粘度成正比，液體的粘度愈大通過毛細(xì)血管所需的時間愈長，其比粘度也愈高，所以比粘度可以反映粘度的大小。6.非牛頓液體和牛頓液體：全血是非牛頓液體，即全血的粘度是隨切變率的變化而變化；而血漿被看作是牛頓液體，它的粘度與切變率無關(guān)。

2021/4/27147血液的相對粘度(ηr)：全血粘度（ηb）/血漿粘度（ηp）8表觀粘度（ηa）：全血等非牛頓液體,在一定切變率下的粘度稱為這種液體的表觀粘度。9還原粘度（ηre）：用HCT校正后的表觀粘度，HCT越高，全血的表現(xiàn)粘度度越大，用全血粘度（ηb）/HCT，以消除HCT對粘度的影響。10血漿粘度：血漿粘度的特點是不隨切變率的變化而變化，不論在高或低切變率范圍內(nèi)總是一個常數(shù),即為牛頓液體。血漿粘度的高低與其中所含各種蛋白質(zhì)、糖類、脂類等高分子物質(zhì)含量有關(guān)。其中蛋白質(zhì)對血漿粘度影響最大。2021/4/271511卡松粘度(c):是足夠高切變率下（紅細(xì)胞變形到極限）血液粘度趨向的極限值?！苔?√τc+√ηc√gτ:為切應(yīng)力τc:為卡森屈服切應(yīng)力ηc:為卡松粘度g:為切變率12屈服切應(yīng)力(τc):屈服切應(yīng)力是低切變率下，纖維蛋白原的橋聯(lián)作用使紅細(xì)胞形成立體網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)而致。故與Hct和血漿蛋白含量有關(guān)，其大小影響微循環(huán)中的血液流動性，反映了微循環(huán)中的血液淤積狀況；也影響低切變率下血液流動中的紅細(xì)胞的取向和相互作用2021/4/2716五、血液的流變學(xué)參數(shù)1.全血粘度：（也稱全血表觀粘度）即一定切變率下的粘度，切變率低時全血粘度高，隨切變率的逐漸升高粘度逐漸下降，最后趨向一個平穩(wěn)的數(shù)值。低切變黏度反映紅細(xì)胞的聚集能力，若紅細(xì)胞相互聚集，則血液黏度升高；高切變黏度反映紅細(xì)胞的變形能力，若變形能力低，則血液黏度高牛頓粘滯定律：全血粘度是衡量血液流動性的指標(biāo)，粘度愈高流動性愈差，粘度愈低流動性愈好。全血粘度受紅細(xì)胞壓積的改變而改變，一般來說紅細(xì)胞壓積高的，全血粘度高。2021/4/2717正常：低切：男17.63～24.47mPa·s；女13.79～20.13mPa·s高切：男3.53～5.05mPa·s；女3.36～4.62mPa·s。增高：提示血細(xì)胞壓積或血漿粘度增高，紅細(xì)胞聚集性增高，紅細(xì)胞變形能力或彈性差。如腦血管病、紅細(xì)胞增多癥、冠心病、糖尿病、高血壓、慢性支氣管炎、鏈狀血紅蛋白癥、白血病等。減低：貧血，病理性出血**出現(xiàn)全血粘度較大幅降低時，一般都是儀器或抽血錯誤所致，要看紅細(xì)胞壓積是不是有降低，如有是結(jié)果可靠性較大。多種疾病僅在低切變率時全血黏度升高，這與低切變引起血流緩慢、紅細(xì)胞易于聚集有關(guān)。

2021/4/27182.全血比粘度正常：低切男：7.5～10.0,女：5.8～8.1高切男：5.6～6.7,女：4.7～6.01增加：常見于高血壓病、腦血管意外、冠心病和心肌梗塞等。減少：常見于貧血疾病。2021/4/27193.全血還原粘度：指全血粘度與紅細(xì)胞壓積之比，即單位紅細(xì)胞壓積時的全血粘度值。意義同全血粘度，受紅細(xì)胞壓積的改變而改變，一般來說紅細(xì)胞壓積高的，全血還原粘度高。正常：男；高切3.74～9.48；低切31.94～58.02

女；高切3.69～9.60；低切26.87～53.91增高：見于腦血管病、紅細(xì)胞增多癥、冠心病、糖尿病、高血壓、慢性支氣管炎、鏈狀血紅蛋白癥、白血病等。2021/4/27204.全血還原比粘度：當(dāng)血細(xì)胞壓積濃度為1時的全血粘度值。以全血粘度與血細(xì)胞壓積濃度之比表示，即（全血粘度－1）/血細(xì)胞壓積。其中（全血粘度－1）為增比粘度，還原比粘度則實際反映單位血細(xì)胞壓積產(chǎn)生增比粘度的量，使血液粘度校正到同一血細(xì)胞比積濃度的基礎(chǔ)上，以之比較。增比黏度(specificviscosity，ηsp）：表示溶液粘度ηr較溶劑粘度η0增加的倍數(shù)正常：低切男：14～20女：12～21高切男：10～13女：9～132021/4/2721*全血高、中、低切值的判斷：（1）高、中、低切都升高，且幅度較大：危險程度依次為高纖維蛋白原＞高紅細(xì)胞聚集指數(shù)＞高Hct。這是高危人群、一般有高血壓、冠心病等心血管疾病。但是如果其它指標(biāo)正常，或增加不明顯，那么檢測結(jié)果可能有問題，要復(fù)查。（2）低切高、高切不高：這一類多為緡錢樣紅細(xì)胞聚集引起，可能是紅細(xì)胞電荷減少，也可能是溫度過低紅細(xì)胞易聚集，引起粘度升高。而這種聚集因為高切變速度的稀釋效應(yīng)而減少，所以高切不高。由于末梢微循環(huán)是在低切變速度下進行的，所以對于末梢微循環(huán)不好的病人，如老年人、高危人群也有很大的危險性2021/4/2722（3）高、中、低切都略有升高：如果其他指標(biāo)正常，只有Hct升高一般是正常的生理現(xiàn)象（如到高原）;有時Hct可能很高，而粘度上升并不高,這主要是正常情況下人體有調(diào)節(jié)血粘度的能力。當(dāng)然也可能是高粘血癥代償期。但若其他正常，而血漿粘度高，也可引起全血粘度高,這類病人有可能處于高凝前期，有很強的預(yù)報作用。2021/4/27235.血漿粘度：反映體內(nèi)生物大分子(纖維蛋白原、球蛋白、血脂)對血細(xì)胞粘度的影響。正常：男：1.26——1.66增高：主要見于巨球蛋白血癥、白血病、腦血栓降低：對全血粘度有影響，但不大。2021/4/27246.血漿比粘度實際測定時采用血漿和已知粘度的凈水互相比較的方法，二者通過毛細(xì)血管的所用時間之比即粘度之比，即血漿的比粘度。正常情況：1.64～1.78增加：常見于高血壓、冠心病、心肌梗塞、由于血漿粘度升高，最大的可能是纖維蛋白原等鏈狀蛋白升高，這類病人可因為鏈狀蛋白形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)引起全血粘度升高，一般血液處于高凝狀態(tài)，比較危險。由血糖、血脂高引起的血漿粘度一般只是略有升高2021/4/27257.紅細(xì)胞沉降率（ESR、血沉）抗凝血放入血沉管中垂直靜置，以紅細(xì)胞在一小時后下沉的距離表示紅細(xì)胞的沉降速度。反映血細(xì)胞的聚集性。正常：男：0～15mm/h；女：0～20mm/h血沉增快,若血沉方程K值正常，則不是因為紅細(xì)胞聚集增強，而是因為紅細(xì)胞下降逆阻力減低導(dǎo)致血沉增快（如貧血或血液被稀釋時，紅細(xì)胞壓積低）。通過血沉方程K值，可排除貧血或血液稀釋對血沉的影響。血沉增快，若血沉方程K值高，則是因為紅細(xì)胞聚集性增強導(dǎo)致血沉增快。K正常；0～80.48ESR=K〔-(1-H+lnH)〕→K=ESR/〔-(1-H+1nH)〕ESR：紅細(xì)胞沉降率;H：紅細(xì)胞壓積;1n：自然對數(shù)（1n=log10（），1nH:以e為底的H的對數(shù)）2021/4/27268.紅細(xì)胞壓積（HCT）：指紅細(xì)胞在血液中所占的容積之比。反映血液中血細(xì)胞與血漿間的比例，反映血液濃稠性。是影響血液粘度的重要因素，血液粘度隨紅細(xì)胞壓積改變而改變。正常：男：0.40～0.50；女：0.35～0