版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
分離以尿素為氮源的微生物實(shí)驗(yàn)2實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.使用專一的培養(yǎng)基(含有尿素)分離專一的細(xì)菌。(如有脲酶的細(xì)菌)2.利用指示劑顏色的變化檢知酶(脲酶)所催化的反應(yīng)。一、實(shí)驗(yàn)原理尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的某類細(xì)菌能夠合成脲酶將尿素分解成氨,之后被植物利用。(NH2)2C=O
+H2O脲酶+CO2NH3思考:怎么從土壤中分離出以尿素為氮源的微生物呢?利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。一、實(shí)驗(yàn)原理氮源為尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖,而受到抑制,所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。一、實(shí)驗(yàn)原理(NH2)2C=O
+H2O脲酶+CO2NH3思考:如何檢驗(yàn)細(xì)菌產(chǎn)生脲酶水解尿素?
尿素NH3
中性堿性
酚紅指示劑:
(酸性)黃色
紅色1.在100ml燒杯中裝入50ml70%酒精;2.配制25mLLB全營(yíng)養(yǎng)固體培養(yǎng)基;3.配制25mL尿素固體培養(yǎng)基;4.將盛有4.5ml蒸餾水的5支有塞試管;5.在250ml三角瓶中裝入99ml蒸餾水;6.土樣1g。二、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)步驟1、制備無菌的LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基LB固體培養(yǎng)基NaCl0.25g蛋白胨0.25g酵母提取液0.12g
水25mL
瓊脂糖
0.5g
全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基尿素固體培養(yǎng)基NaCl0.12g
K2HPO4
0.12g葡萄糖0.025g
水15mL
瓊脂糖
0.5g
酚紅
0.25mg選擇培養(yǎng)基三角瓶中配制,加封口膜滅菌尿素
10mL三角瓶中配制,加封口膜滅菌G6玻璃砂漏斗三、實(shí)驗(yàn)步驟2、倒平板:思考:倒平板的具體操作是什么?在60℃左右時(shí),將三角瓶中已經(jīng)滅菌的LB全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基,在酒精燈火焰旁分別倒在兩個(gè)培養(yǎng)皿中,在水平的超凈臺(tái)上搖勻,平放至凝固。3、制備細(xì)菌懸液三、實(shí)驗(yàn)步驟在無菌條件下,將1g土樣加到有99mL無菌水的三角瓶中,震蕩10min,即成10-2土壤稀釋液。依此法制備10-3、10-4和10-5土壤稀釋液。取樣時(shí),盡量只取懸液。搖勻,放在試管架上。4、用涂布法分離細(xì)菌三、實(shí)驗(yàn)步驟取10-5和10-4的土壤稀釋液各0.1mL,分別加到有LB培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中。再將保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精燈火焰上,待刮刀上火焰熄滅,在酒精燈火焰旁打開培養(yǎng)皿,將菌液涂布到整個(gè)平面上。槍頭移液器(移液槍)玻璃刮刀(涂布器)5、培養(yǎng)三、實(shí)驗(yàn)步驟將培養(yǎng)皿倒置,在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48小時(shí),觀察菌落數(shù)。6、觀察全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中有較多的菌落,而尿素為氮源的培養(yǎng)基中只有少量菌落。LB培養(yǎng)基稀釋度10-6LB培養(yǎng)基稀釋度10-7尿素培養(yǎng)基稀釋度10-4尿素培養(yǎng)基稀釋度10-5按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)10-5
、10-4,、
在同一稀釋度下,至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù),然后求出平均值,并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。分析與討論:1.為什么要用瓊脂糖代替瓊脂配制固體培養(yǎng)基?2.有脲酶的細(xì)菌在生態(tài)穩(wěn)態(tài)上起什么作用?瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合物,如果用瓊脂固定培養(yǎng)基,會(huì)為細(xì)菌提供一定量的非尿素類氮源,這樣會(huì)在尿素固體培養(yǎng)上產(chǎn)生大量以非尿素為氮源的細(xì)菌,不利于以尿素為氮源的細(xì)菌的篩選。如土壤中有許多尿素,在自然界較高溫度下會(huì)被水解,水解后的氨使土壤變成堿性,與其他陰離子形成化合物會(huì)使土壤板結(jié)。有脲酶的細(xì)菌使植物廢棄物和動(dòng)物尸體降解,并利用所形成的氨,有利于自然界的氮循環(huán)。3.有脲酶細(xì)菌菌落周圍為什么有紅色環(huán)帶?4.與全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)比較,為什么尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落?能利用尿素的細(xì)菌在土壤菌群中只占極少數(shù)量。分析與討論:紅色環(huán)狀區(qū)域的大小代表脲酶活性的強(qiáng)弱和含量的多少。紅色區(qū)域越大,表明菌株利用尿素的能力越強(qiáng)。
細(xì)菌分泌脲酶,使培養(yǎng)基中尿素水解,并產(chǎn)生氨NH3(堿性)。而酚紅在酸性環(huán)境里呈黃色,堿性里呈紅色。所以培養(yǎng)基中酸堿指示劑變紅,標(biāo)志著存在尿素被水解成氨的現(xiàn)象,從而證明這一菌株以尿素為氮源。實(shí)踐訓(xùn)練2016年10月選考題取適量含產(chǎn)脲酶細(xì)菌的10-4,10-5兩種土壤稀釋液,分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上,培養(yǎng)48小時(shí),推測(cè)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)最少的是
。A.10-5稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基B.10-5稀釋液+LB固體培養(yǎng)基C.10-4稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基D.10-4稀釋液+LB固體培養(yǎng)基在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)
,其原因是細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生
所致。A紅色環(huán)帶1.使用選擇培養(yǎng)基的目的是()
A.培養(yǎng)細(xì)菌
B.培養(yǎng)真菌
C.使需要的微生物大量繁殖
D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 整車總布置圖 課程設(shè)計(jì)
- 實(shí)驗(yàn)分析與設(shè)計(jì)課程設(shè)計(jì)
- 《四種海洋生物的化學(xué)成分及其生物活性研究》
- 《影響中職學(xué)生日語閱讀理解的因素調(diào)查研究》
- 《城市黑臭水體治理研究》
- 幼兒建筑課程設(shè)計(jì)
- 2024-2030年中國(guó)汽車前輪齒環(huán)項(xiàng)目可行性研究報(bào)告
- 2024-2030年中國(guó)水工金屬結(jié)構(gòu)行業(yè)發(fā)展規(guī)劃及投資戰(zhàn)略分析報(bào)告
- 2024-2030年中國(guó)水冷式冷干機(jī)商業(yè)計(jì)劃書
- 2024-2030年中國(guó)氣動(dòng)系統(tǒng)資金申請(qǐng)報(bào)告
- 預(yù)應(yīng)力錨索施工全套表格
- 風(fēng)電場(chǎng)場(chǎng)內(nèi)集電線路建安工程施工組織設(shè)計(jì)
- 數(shù)據(jù)庫原理與MySQL應(yīng)用-5 存儲(chǔ)函數(shù)與存儲(chǔ)過程
- 倉(cāng)庫安全檢查記錄表
- DBJ04-T 434-2022 隱式框架鋼結(jié)構(gòu)工程技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)
- 玉米區(qū)域試驗(yàn)技術(shù)規(guī)程與田間調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)
- 上海市崇明區(qū)2021屆一模作文《走出“撕裂感”》等5篇
- 履帶吊安裝、拆除安全交底
- (完整版)地質(zhì)制圖一般規(guī)定
- 我們的衣食之源教案-四年級(jí)道德與法治下冊(cè)
- 互換性與技術(shù)測(cè)量全書ppt課件匯總(完整版)
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論