HPLC法測(cè)定阿莫西林雙氯西林鈉膠囊含量 3600字

HPLC法測(cè)定阿莫西林雙氯西林鈉膠囊含量3600字【摘要】目的：建立阿莫西林雙氯西林鈉膠囊中阿莫西林和雙氯西林鈉的含量測(cè)定辦法。辦法：采用ShimadzuVP《ODS色譜柱，流動(dòng)相為0.008mol/L十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)節(jié)至pH4.5)《甲醇(體積比68∶32),檢測(cè)波長(zhǎng)225nm。結(jié)果：阿莫西林和雙氯西林在該色譜條件下均有適宜的保存,測(cè)定可在10min內(nèi)完成。阿莫西林在0.0050～1.0000mg/mL，雙氯西林在0.0025～0.5036mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。阿莫西林和雙氯西林鈉平均回收率(n=9)分別為99.4%(RSD=1.0%)和99.1%(RSD=0.97%)。結(jié)論：該辦法準(zhǔn)確、重復(fù)性好、靈敏度高,可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】阿莫西林雙氯西林鈉膠囊/高效液相色譜法/阿莫西林/雙氯西林

阿莫西林、雙氯西林屬β《內(nèi)酰胺類抗生素，阿莫西林對(duì)需氧革蘭氏陽(yáng)性菌及局部革蘭氏陰性菌具抗菌活性，雙氯西林具耐酸、耐酶等特點(diǎn)，對(duì)葡萄球菌和革蘭陽(yáng)性菌具抗菌活性。研究說(shuō)明，阿莫西林—雙氯西林對(duì)常見(jiàn)的病原菌具良好抗菌作用,對(duì)傷寒沙門(mén)菌也具有良好抗菌作用,可作為治療呼吸道感染、單純性皮膚軟組織感染和傷寒等的首選藥物之一[1]。該品種目前在中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、日抗基和英國(guó)藥典均未收載。文獻(xiàn)[2-4]采用HPLC法同時(shí)測(cè)定阿莫西林、雙氯西林的含量，以磷酸鹽緩沖液和乙腈為流動(dòng)相。但是阿莫西林和雙氯西林的極性相差較大，兩者的保存時(shí)間相差較大，在該色譜條件下為了保證雙氯西林有合適的保存時(shí)間，阿莫西林往往在溶劑峰左右出峰，幾乎沒(méi)有保存。本文經(jīng)優(yōu)化色譜條件，改用離子對(duì)試劑和甲醇為流動(dòng)相的RP《HPLC法，使兩者均具有合適的色譜保存時(shí)間，可用于阿莫西林和雙氯西林制劑的含量測(cè)定。

1儀器和試藥

Agilent1100高效液相色譜儀，SartoriusBP211D萬(wàn)分之一電子天平。

甲醇(色譜純，天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司出品，批號(hào)：051221101);十二烷基硫酸鈉(廣州市醫(yī)藥公司進(jìn)口分裝，批號(hào)：980503);阿莫西林對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定，批號(hào)：130409《202208，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：86.2%);雙氯西林對(duì)照品(BrightFuturePharm.Fty,批號(hào)：B4520222，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：91.4%);阿莫西林雙氯西林鈉膠囊(香港澳美制藥廠提供，規(guī)格：0.375g);實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

2辦法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：ShimadzuVP《ODS(250mm×4.6mm);流動(dòng)相：0.008mol/L十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5)《甲醇(體積比68∶32);流速1mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)225nm;進(jìn)樣量20μL。色譜圖見(jiàn)圖1。

A空白品B對(duì)照品C樣品1.雙氯西林2.阿莫西林

圖1雙氯西林和阿莫西林的HPLC色譜圖(略)

Fig.1HPLCchromatogramsofamoxicillinanddicloxacillin

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的配制

取阿莫西林、雙氯西林對(duì)照品適量，精密稱定，加0.02mol/L磷酸鹽緩沖液制成每1mL含阿莫西林50μg、含雙氯西林25μg的混合液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的配制

取供試品20粒，除去囊殼，均勻研細(xì)并混合，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿莫西林200mg,雙氯西林100mg),置200mL容量瓶中，加0.02mol/L磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1mL，置20mL容量瓶中，加0.02mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3專屬性考察

取阿莫西林雙氯西林鈉膠囊內(nèi)容物，分別用藥物光照試驗(yàn)儀強(qiáng)光照射24h和高溫95℃進(jìn)行24h強(qiáng)力破壞，分別取樣品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋成含阿莫西林2mg/mL和雙氯西林1mg/mL的溶液,用0.45μm濾膜濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20μL，按“2.1〞項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，雜質(zhì)峰與兩主峰均有較好的別離，不影響測(cè)定。

2.4線性范圍確實(shí)定

分別取阿莫西林、雙氯西林對(duì)照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成含阿莫西林為0.0050～1.0000mg/mL和雙氯西林為0.0025～0.5036mg/mL的溶液，按“2.1〞項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo)，得阿莫西林和雙氯西林的線性回歸方程分別為：A=27989ρ-26.88，r=0.9999(n=7);A=46883ρ-48.554，r=0.9999(n=7)。結(jié)果說(shuō)明，阿莫西林在0.0050～1.0000mg/mL,雙氯西林在0.0025～0.5036mg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.52.6溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品溶液于0、2、4、6、8h內(nèi)依法測(cè)定，結(jié)果阿莫西林及雙氯西林的峰面積RSD分別為1.0%和1.3%(n=5)，說(shuō)明溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品6份，分別按“2.2.2〞項(xiàng)平行制備溶液，進(jìn)樣測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算阿莫西林和雙氯西林的含量RSD分別為0.6%和0.8%(n=6)，說(shuō)明試驗(yàn)的重復(fù)性良好。

2.8干擾試驗(yàn)

取陰性空白樣品液，依法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果說(shuō)明空白輔料對(duì)樣品測(cè)定無(wú)干擾，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

取已知濃度的供試品溶液參加不同濃度的對(duì)照液，制成含阿莫西林標(biāo)示量的80%、100%、120%的溶液，按含量測(cè)定項(xiàng)下的辦法進(jìn)行試驗(yàn)，考察其加樣回收率。阿莫西林的平均回收率為99.4%,RSD為1.0%;雙氯西林的平均回收率為99.1%,RSD為0.970%。見(jiàn)表1。

表1阿莫西林雙氯西林鈉膠囊回收率(略)

Tab.1Recoverytestofamoxicillinanddicloxacillinsodium

2.9樣品測(cè)定

取樣品3批，按“2.2.2〞項(xiàng)辦法制備，依法測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2阿莫西林和雙氯西林的含量測(cè)定(n=3)(略)

Tab.2Contentsofamoxicillinanddicloxacillinsodium

3討論

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取供試品溶液適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋，在波長(zhǎng)200～600nm之間進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果阿莫西林和雙氯西林在225nm下均有較高的響應(yīng)。參照美國(guó)藥典24版中雙氯西林鈉HPLC法測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)225nm[5],選擇225nm為本法的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2離子對(duì)濃度的選擇

實(shí)驗(yàn)中考察了不同離子對(duì)濃度(0.005mol/L、0.006mol/L、0.007mol/L、0.008mol/L、0.01mol/L)對(duì)別離的影響，發(fā)現(xiàn)濃度低于0.007mol/L時(shí)，離子對(duì)不起作用，0.008mol/L時(shí)保存合適，別離效果好，而當(dāng)濃度大于0.01mol/L時(shí)，流動(dòng)相濁度較大，且長(zhǎng)鏈離子對(duì)濃度過(guò)高容易形成膠束，可使溶質(zhì)的k值出現(xiàn)極大值的現(xiàn)象，另外可能對(duì)柱效有一定的影響。實(shí)驗(yàn)證明，采用0.008mol/L的濃度可保證柱效、峰型及保存時(shí)間均較好。

3.3流動(dòng)相pH值的選擇

對(duì)流動(dòng)相的pH值進(jìn)行考察，流動(dòng)相pH值低于4.0，阿莫西林及雙氯西林的保存均加強(qiáng)，不易洗脫;pH值大于6.0時(shí),峰變形。經(jīng)考察，pH值在4.5時(shí)阿莫西林及雙氯西林的峰型最好，且柱效最正確。