冰凍切片和石蠟切片各自的優(yōu)劣之處之歐陽物創(chuàng)編

歐陽物創(chuàng)編冰凍切片和石蠟切片各自的優(yōu)劣之處是什么1、時間：2021.02.07命題人：歐陽物2、 從一抗的選擇方面來看。有的一抗既能做石蠟切片又能做冰凍切片，而有的一抗只能做冰凍切片，關(guān)鍵取決于所要檢測的抗原穩(wěn)定性，有的抗原不穩(wěn)定，經(jīng)過組織固定，脫水、透明、浸蠟、包埋、脫蠟等一系列的做石蠟切片的步驟，所檢測的抗原易被破壞，這時只能用冰凍切片來做，檢測這類抗原的一抗只能做冰凍切片，而那些穩(wěn)定的抗原，能經(jīng)受住石蠟切片的的考驗，一般來講也可以用冰凍切片來做，總得來講，對于既可以用冰凍切片也可以用石蠟切片檢測的抗原，用石蠟切片檢測的染色效果要比冰凍切片好一些。2、從研究目的來看。石蠟切片對組織細胞的定位很準確，而長期凍存組織的冰凍切片可能因冰晶的形成破壞組織細胞形態(tài)的結(jié)構(gòu)，并造成抗原的彌散，從而定位不準確。3、從抗原的保真性來看。冰凍切片對抗原的保真很好，而石蠟切片在組織固定，脫水、透明、浸蠟、包埋、脫蠟等過程中可能會對抗原的性質(zhì)造成影響。歐陽物創(chuàng)編2021.02.07

歐陽物創(chuàng)編2021.02.074、從操作步驟的繁瑣程度看。染色過程冰凍切片簡單，而石蠟切片要求脫蠟入水、抗原修復(fù)等過程，比較繁瑣。5、總之，石蠟切片對標本的長期保存較合適，且組織細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)保持好；而冰凍切片適合對新鮮組織的制片，然后立即固定、染色效果較好，且免疫熒光中可以相對避免石蠟自發(fā)熒光的干擾。冰凍切片（什。26門section）是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。冰凍切片的種類較多，有低溫恒冷箱冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。這些方法，隨著時代的變遷，科技的發(fā)展，許多年前被認為是非常重要的技術(shù)，現(xiàn)在也逐步被淘汰了。當(dāng)然有些技術(shù)，如低溫恒冷箱冰凍切片法，正在受到青睞。編輯本段冰凍切片的應(yīng)用（1）在手術(shù)進行中，突然發(fā)現(xiàn)病人的病變與原診斷原定手術(shù)方案不相符合，或者懷疑時，需要病理確定。歐陽物創(chuàng)編2021.02.07

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2021.02.07（2）了解淋巴結(jié)內(nèi)是否有轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞，或者轉(zhuǎn)移的程度，以利于確定是否需要徹底掃除淋巴結(jié)或者其它的治療措施。（3）對于已確定為惡性腫瘤的患者，則需要了解其手術(shù)范圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤組織。（4）在做剖腹探查時所發(fā)現(xiàn)的腫塊或者異樣的組織。（5）顯示組織中的脂肪和脂類物質(zhì)，這常見于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研組織等。（6）某些酶的顯示如ATP酶，琥珀酸脫氫酶等。（7）神經(jīng)病理學(xué)技術(shù)中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Hortega氏法和Holzer氏法等。（8）對某些物質(zhì)所進行的免疫熒光的研究。編輯本段冰凍切片的制作方法低溫恒冷箱冷凍切片制作法以ShandonAs620E型恒溫箱冷凍切片機為例，該機的箱面上有電子控制板，裝有即時冷凍鍵和除霜鍵，啟動即時冷凍鍵，機器馬上進行工作狀態(tài)，并可持續(xù)10mins。啟動即時除霜鍵，可將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除掉，并可持續(xù)15mins。有照明鍵一個，啟動該鍵可照明工作間，有利工作及觀察組織的冰凍狀況。配有消毒鍵一個，當(dāng)進行歐陽物創(chuàng)編2021.02.07歐陽物創(chuàng)編2021.02.07一周的工作或者一天的工作后，啟動該鍵，可對工作間進行消毒。當(dāng)每天工作完畢時，可啟動密鎖鍵，鎖住工作間。除此之外，箱面的左邊有四個按鍵，兩個為快速自動進退鍵，兩個為微小進退鍵，還有一個手動旋鈕，調(diào)節(jié)修組織塊時的進退。冷凍箱內(nèi)左邊的冷凍臺，溫度可達-60℃左右，冷凍箱的中間為一臺切片機，工作間的溫度在0-30℃間可任意調(diào)節(jié)，并在箱面上的熒屏顯示出來。操作方法及步驟①取材，未能固定的組織取材，不能太大太厚，厚者冰凍費時，大者難以切完整，最好為24x24x2mm。②取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺上，冰凍。小組織的應(yīng)先取一支承器，滴上包埋劑讓其冷凍，形成一個小臺后，再放上細小組織，滴上包埋劑。③將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機持承器上，啟動粗進退鍵，轉(zhuǎn)動旋鈕，將組織修平。④調(diào)好欲切的厚度，根據(jù)不同的組織而定，原則上是細胞密集的薄切，纖維多細胞稀的可稍為厚切，一般在5?10um間。歐陽物創(chuàng)編2021.02.07歐陽物創(chuàng)編

2021.02.07⑤調(diào)好防卷板。制作冰凍切片，關(guān)鍵在于防卷板的調(diào)節(jié)上，這就要求操作者要細心，準確地將其調(diào)較好，調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈恢?。切片時，切出的切片能在第一時間順利地通過刀防卷板間的通道，平整地躺在持刀器的鐵板上。這時便可掀起防卷板，取一載玻片，將其附貼上即可。⑥應(yīng)視不同的組織選擇不同的冷凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根據(jù)不同的組織而定，不能一概而論。如：切未經(jīng)固定的腦組織，肝組織和淋巴結(jié)時，冷凍箱中的溫度不能調(diào)太低，在-10--15℃左右，切甲狀腺、脾、腎、肌肉等組織時，可調(diào)在-15?20℃左右，切帶脂肪的組織時，應(yīng)調(diào)至-25℃左右，切含大量的脂肪時，應(yīng)調(diào)至-30℃。冰凍切片時的注意事項①防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應(yīng)保持干凈，需經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因為這個地方是切片通過和附貼的地方，如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上，將會破壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。②多例多塊組織同時需做冰凍切片時，可各自放于不同的支承器上，于冷凍臺上凍起來，然后依據(jù)不同的編號，依序切片，這樣做既不費時也不會亂。歐陽物創(chuàng)編2021.02.07歐陽物創(chuàng)編2021.02.07③放置組織冰凍前，應(yīng)視組織的形狀及走勢來放置，所謂〃砍柴看柴勢〃，切片也是如此，如果胡亂放置，就不能收到很好的效果。④組織塊不須經(jīng)各種固定液固定，尤其是含水的固定液，在未達到固定前，更不能使用。臨床快速冰凍切片，不須要預(yù)先固定，一是為了爭取時間，二是固定了的組織，反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片，就會出現(xiàn)冰晶。這是因為含水的固定液在組織未經(jīng)固定前，其中的水份也可滲入到組織中去，當(dāng)冰凍發(fā)生時，這些水份就存留于組織中，形成了冰晶。⑤當(dāng)切片時，如果發(fā)現(xiàn)冰凍過度時，可將冰凍的組織連同支承器取出來，在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來軟化組織，再行切片。另者，調(diào)高冰凍點。⑥用于附貼切片的載玻片，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因為當(dāng)附貼切片時，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當(dāng)溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時，由于兩種物質(zhì)間溫度的差別，當(dāng)它們碰撞在一起時，分子彼此間發(fā)生轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片，由于溫度相同，沒有發(fā)生上述的現(xiàn)象。歐陽物創(chuàng)編2021.02.07歐陽物創(chuàng)編2021.02.07冰凍切片的快速染色法冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分鐘后即可染色。以往，為了防止切片脫落，當(dāng)切片附貼于載玻片后，即用電吹風(fēng)吹干后再固定。根據(jù)實驗對比認為這種做法欠妥未經(jīng)固定的切片，強熱作用后，蛋白發(fā)生變性，核內(nèi)含有的物質(zhì)由于熱的作用融合在一起，染色后鏡下分辨不出核內(nèi)的各種物質(zhì)。冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，這樣可以使切片中細胞內(nèi)各種物質(zhì)都在沒有任何變化的情況下被固定起來，核染色質(zhì)清晰，核仁明顯，其他物質(zhì)都完好保存。方法：①切片固定30秒-1分鐘。②水洗。③染蘇木素3-5分鐘。④分化。于堿水中返藍20秒。伊紅染色10-20秒。⑦脫水，透明，中性樹膠封固。冰凍組織1-2分鐘，切片1分鐘，固定1分鐘，染色共五分鐘?？偣苍?0分鐘內(nèi)完成快速制片過程，結(jié)果與石蠟切片不相上下。歐陽物創(chuàng)編2021.02.07歐陽物創(chuàng)編2021.02.07冰凍切片的方法還有很多種，如甲醇循環(huán)的半導(dǎo)體冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，半導(dǎo)體冰凍切片法和氯乙烷冰凍切片法等，這些方法在目前來說已很少使用，因此在這里不作闡述。編輯本段優(yōu)缺點（一）優(yōu)點：?簡便，可以不需要對組織固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)即可進行切片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。?快速，用時短。?組織變化不大。4?能很好保存脂肪，類脂等成分。5?能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類，特別是對于那些對有機溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細胞膜表面抗原和水解酶保存較好。（二）缺點：1?不容易做連續(xù)切片。2?切取的組織不能過大，組織過大不容易凍結(jié)或者組織凍結(jié)不均，影響切片及染色效果。3?不容易制作較薄的切片。歐陽物創(chuàng)編2021.02.07歐陽物創(chuàng)編2021.02.074?組織塊在凍結(jié)過程中容易產(chǎn)生水的結(jié)晶而影響細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及抗原物質(zhì)的定位，并且組織結(jié)構(gòu)也不如石蠟切片清晰。編輯本段冰凍切片操作中的注意事項（1）新鮮的組織制備組織盡可能新鮮、驟冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的驟冷劑有：①CO2氣（-78℃）②丙酮干冰冷卻的輕石油醐、乙烷和庚烷（-80℃）③液氮（-190℃）④液氮冷卻的丙烷（-19℃）。液氮適用于組織化學(xué)，較安全。缺點：組織塊易發(fā)生龜裂。（2）固定組織的制備為防止水解酶和其他物質(zhì)的移位、彌散，常用4℃、24小時的甲醛固定能很好地保存酶類。但對許多脫氫酶和轉(zhuǎn)移酶能滅活。故不宜使用，低溫，冷甲醛短時間固定（10分鐘左右）固定，可顯示琥珀酸脫氫酶。電鏡出現(xiàn)后，需要保存細胞的超微結(jié)構(gòu)，以4%緩沖戊二醛（25%戊二醛16ml;0.1M二甲腫酸（pH7）84ml;蔗糖8g）固定較好。這些固定液主要用于水解酶，而不適于許多氧化還原酶和轉(zhuǎn)移酶。歐陽物創(chuàng)編2021.02.07歐陽物創(chuàng)編2021.02.07(3)恒冷箱溫度一般在冷凍后10分鐘，到接近冷室溫度時再切，一般組織在-15?-20℃切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度，Pearse及Bancroft的經(jīng)驗如下：組織刀溫度組織溫度恒冷箱溫度肝-18-10-5腎-15-8-5皮膚-35-10-5腦-18-5-5固定組織一般高3-5度(4)切片機的使用抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過?？咕戆迓愿哂诘睹娴淖罡唿c。可憑經(jīng)驗調(diào)整刀對組織的