GB/T 15805.5-2008魚類檢疫方法第5部分：鯉春病毒血癥病毒(SVCV)

犐犆犛６５．０２０．３０

犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜１５８０５．５—２００８

部分代替ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５

魚類檢疫方法

第５部分：鯉春病毒血癥病毒（犛犞犆犞）

犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犿犲狋犺狅犱狊狅犳犳犻狊犺—

犘犪狉狋５：犛狆狉犻狀犵狏犻狉犪犲犿犻犪狅犳犮犪狉狆狏犻狉狌狊（犛犞犆犞）

２００８０７３１發(fā)布２００８１１０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜１５８０５．５—２００８

前言

ＧＢ／Ｔ１５８０５《魚類檢疫方法》分為下列部分：

———第１部分：傳染性胰臟壞死病毒（ＩＰＮＶ）；

———第２部分：傳染性造血器官壞死病毒（ＩＨＮＶ）；

———第３部分：病毒性出血性敗血癥病毒（ＶＨＳＶ）；

———第４部分：斑點叉尾病毒（ＣＣＶ）；

———第５部分：鯉春病毒血癥病毒（ＳＶＣＶ）；

———第６部分：殺鮭氣單胞菌；

———第７部分：腦粘體蟲；

……

本部分為ＧＢ／Ｔ１５８０５的第５部分。

本部分代替ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５《淡水魚類檢疫方法第一部分》中的第７章。

本部分與ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５的第７章相比主要變化如下：

———刪除了臨床檢查；

———改用ＰＣＲ方法代替中和試驗鑒定ＳＶＣＶ；

———增加資料性附錄Ｂ“ＳＶＣ病毒Ｇ基因的全序列（１５８８ｂｐ）”；

———結構格式按ＧＢ／Ｔ１．１—２０００的規(guī)定，作為部分編寫。

本部分的附錄Ａ為規(guī)范性附錄，附錄Ｂ為資料性附錄。

本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本部分由全國水產(chǎn)標準化技術委員會歸口。

本部分起草單位：農(nóng)業(yè)部全國水產(chǎn)技術推廣總站、中華人民共和國深圳出入境檢驗檢疫局。

本部分主要起草人：孫喜模、江育林、陳愛平、陳輝、朱澤聞。

本部分所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１５８０５．１—１９９５。

Ⅰ

書

犌犅／犜１５８０５．５—２００８

魚類檢疫方法

第５部分：鯉春病毒血癥病毒（犛犞犆犞）

１范圍

ＧＢ／Ｔ１５８０５的本部分規(guī)定了細胞分離病毒后，用ＲＴＰＣＲ技術檢測ＳＶＣＶ的方法。

本部分適用于ＳＶＣＶ的分離和鑒定，ＳＶＣ的流行病學調(diào)查、診斷，以及口岸出入境、國內(nèi)跨區(qū)域移

動的檢疫。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過ＧＢ／Ｔ１５８０５的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文

件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵根據(jù)本部分達成

協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本

部分。

ＧＢ／Ｔ６６８２—１９９２分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法（ｎｅｑＩＳＯ３６９６：１９８７）

ＧＢ／Ｔ１８０８８—２０００出入境動物檢疫采樣

３試劑和材料

３．１水：ＧＢ／Ｔ６６８２—１９９２，一級。用于ＲＴＰＣＲ（包括核酸抽提）時所用的水要用焦碳酸二乙脂

（ＤＥＰＣ）處理以除掉ＲＮＡ酶。

３．２ＳＶＣＶ參考株：由農(nóng)業(yè)部指定的動物病原微生物菌（毒）種保藏機構提供。

３．３Ｔａｑ酶：－２０℃保存，不要反復凍融或溫度劇烈變化。

３．４逆轉錄酶ＡＭＶ：１０Ｕ／ｍＬ。－２０℃保存，不要反復凍融或溫度劇烈變化。

３．５ＲＮＡ抑制劑（ＲＮａｓｉｎ）：４０Ｕ／μＬ。－２０℃保存，不要反復凍融或溫度劇烈變化。

３．６ｄＮＴＰ（含ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ各１０ｍｍｏｌ／Ｌ）。

３．７引物：該試驗選用ＳＶＣＶ的糖蛋白基因作為ＰＣＲ的模板。該基因長１５８８ｂｐ，在這里用了兩對

引物：Ｆ１和Ｒ２擴增該基因中的７１４ｂｐ片斷，而Ｆ１和Ｒ４則從該片斷中再擴增６０６ｂｐ片斷。所以實

際上是“半套式”的ＰＣＲ（ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）。使用時濃度為４０μｍｏｌ／Ｌ。其序列如下：

Ｒ２：５′ＡＧＡＴＧＧＴＡＴＧＧＡＣＣＣＣＡＡＴＡＣＡＴＨＡＣＮＣＡＹ３′。

Ｒ４：５′ＣＴＧＧＧＧＴＴＴＣＣＮＣＣＴＣＡＡＡＧＹＴＧＹ３′。

Ｆ１：５′ＴＣＴＴＧＧＡＧＣＣＡＡＡＴＡＧＣＴＣＡＲＲＴＣ３′。

３．８無水乙醇：分析純，使