GB/T 17494-2009馬傳染性貧血病間接ELISA診斷技術

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜１７４９４—２００９

代替ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８

馬傳染性貧血病間接犈犔犐犛犃診斷技術

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２００９０４２３發(fā)布２００９０９０１實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜１７４９４—２００９

前言

本標準參照世界動物衛(wèi)生組織（ＯＩＥ）最新公布的《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》２００４年版，并結

合我國現(xiàn)有動物衛(wèi)生法規(guī)及農(nóng)業(yè)部對馬傳貧的相關政策和措施修訂，其技術內容與ＯＩＥ所推薦的基本

一致。

本標準代替ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８《馬傳染性貧血病間接ＥＬＩＳＡ技術規(guī)程》。

本標準與ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８相比主要變化如下：

———“前言”部分作適當變動；

———刪除第２章的內容；

———第４章“儀器設備”和第５章“試劑”部分改為“材料準備”，并對內容作較大的改動；

———第６章“配制溶液”部分放置在附錄內；

———修訂原標準中的所有語句和計量單位等錯誤用法。

本標準的附錄Ａ、附錄Ｂ、附錄Ｃ和附錄Ｄ為規(guī)范性附錄。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本標準由全國動物防疫標準化技術委員會（ＳＡＣ／ＴＣ１８１）歸口。

本標準由中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所負責起草。

本標準主要起草人：相文華、郭巍、趙立平、戴玉坤。

本標準所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８。

Ⅰ

書

犌犅／犜１７４９４—２００９

馬傳染性貧血病間接犈犔犐犛犃診斷技術

１范圍

本標準規(guī)定了馬傳染性貧血病間接ＥＬＩＳＡ診斷技術的測定原理、材料準備、操作方法和結果判

定等。

本標準適用于檢測馬血清中的馬傳貧病毒抗體。可用于生產(chǎn)和經(jīng)營馬匹者對未注射馬傳貧疫苗馬

匹的檢疫、馬傳貧病馬的定性，也可用于對注射馬傳貧疫苗馬匹的免疫狀態(tài)進行測定。

２測定原理

用制備的馬傳貧病毒抗原，包被聚苯乙烯微量板孔，使免疫反應在固相載體上進行。當被檢血清中

有馬傳貧病毒抗體存在時，則與孔壁上的抗原形成抗原抗體復合物，再與酶標記的抗體（抗馬免疫球蛋

白）反應，最后通過測定酶作用底物催化后的產(chǎn)物，進行馬傳貧病毒抗體的定性、定量測定。

３材料準備

３．１器材

３．１．１９６孔平底微量反應板。

３．１．２微量移液器。

３．１．３酶標測定儀。

３．１．４恒溫箱。

３．１．５保濕盒等。

３．２試劑

３．２．１兔抗馬ＩｇＧ辣根過氧化物酶結合物（簡稱酶標抗體）為凍干品，見附錄Ａ。

３．２．２馬傳貧病毒抗原包被板見附錄Ｂ。

３．２．３馬傳貧病毒標準陽性血清和標準陰性血清均為凍干品。

３．２．４磷酸鹽緩沖液（０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２，ＰＢＳ）配制方法見第Ｃ．１章。

３．２．５洗滌緩沖液（０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２，ＰＢＳ０．０５％吐溫２０）的配制方法見第Ｃ．２章。

３．２．６血清及酶標記抗體稀釋液（０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２，ＰＢＳ０．０５％吐溫２００．１％白明膠１０％健康牛

血清）的配制方法見第Ｃ．３章。

３．２．７底物緩沖液（ｐＨ５．０磷酸鹽檸檬酸緩沖液，內含０．０４％鄰苯二胺及０．０４５％過氧化氫）的配制

方法見第Ｃ．４章。

３．２．８終止液（２ｍｏｌ／Ｌ，硫酸）的配制方法見第Ｃ．５章。

４操作方法

４．１沖洗包被板：向各孔注入洗滌緩沖液，浸泡３ｍｉｎ，甩干，再注入洗滌緩沖液，重復３次。甩干孔內

殘液，在濾紙上吸干。

４．２加被檢血清及對照血清：將每份被檢血清樣品各?。担唉蹋碳尤氲窖逑♂尠宓母骺變龋賹⑾♂?/p>

液０．９５ｍＬ依次加入各孔內，作１∶２０倍稀釋。混勻后分別?。保埃唉蹋桃来渭尤肟乖环磻字?，每

份血清加兩個孔。每塊反應板設陰性血清和陽性血清對照各兩孔，每孔１００μＬ。蓋好包被板置３７