GB/T 18090-2000豬繁殖和呼吸綜合癥診斷方法

TCS.65.020.30B41中華人民共和國國家標準GB/T18090—2000豬繁殖和呼吸綜合癥診斷方法Diagnosticmethodsofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome2000-04-26發(fā)布2000-10-01實施國家質量技術監(jiān)督局發(fā)布

GB/T18090—2000S前言·1圍2診斷方法的種類和選用病毒的分離與鑒定·4免疫過氧化物酶單層試驗(IPMA)5間接免疫熒光試驗（IFA）…6間接酶聯免疫吸附試驗（間接ELISA）……………·血清中和試驗（SN)…8綜合判定·附錄A(標準的附錄）血清學試驗中試劑的配制附錄B(標準的附錄)豬肺泡巨喔細胞(PAM)制備、鑒定、保存與復蘇附錄C（標準的附錄）繁殖和呼吸綜合癥病毒TCID.測定

GB/T18090—2000豬繁殖和呼吸綜合癥(簡稱PRRS)是由PRRS病毒引起的一種接觸傳染性疾病。各種年齡的豬均易感染。遷振母豬感染后可引起流產、死胎、木乃伊胎及弱胎·仔豬可發(fā)生呼吸障礙和高病死率，其他豬常呈隱性感染或僅出現輕度的呼吸道癥狀。PRRS病毒有歐洲型和美洲型兩種主要抗原型，分別以LV和VR-2332為代表株,型間具有明顯的抗原交叉反應性。據現有資料.我國流行的毒株為美洲型。本病幾乎發(fā)生于世界各養(yǎng)豬國家.并于九十年代中期傳入我國。由于其對養(yǎng)豬業(yè)的嚴重威脅性.國際獸疫局(1996)己將本病列為B類傳染病。大連動植物檢疫局在國內率先開展了PRRS的研究工作·建立了具有與國際同等水平的病毒分離鑒定、間接免疫熒光試驗和血清中和試驗等診斷方法。其他單位也相繼建立了多種酶聯免疫吸附試驗本標準是在綜合我國科研成果的基礎上,參照國際獸疫局(OIE)編寫的《哺乳動物、禽和蜜蜂A和B類疾病診斷試驗和疫苗標準手冊》第三版，1996)編寫的。其技術內容與〇IE所推薦的基本一致。本標準的附錄A、附錄B和附錄C都是標準的附錄。本標準由農業(yè)部提出。本標準起草單位：中華人民共和國大連動植物檢疫局。本標準起草人：孫穎杰、蘇永生、潘鳳城、孫延峰、簡中友

中華人民共和國國家標準豬繁殖和呼吸綜合癥診斷方法GB/T18090-2000Diagnosticmethodsofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome1范圍本標準規(guī)定了豬繁殖和呼吸綜合癥(PRRS)的診斷方法本標準適用于豬繁殖和呼吸綜合癥的診斷診斷方法的種類和選用PRRS的診斷方法有多種。依據臨床癥狀和病理變化只可作出初步診斷，確診必須依靠實驗室檢查。目前已建立和應用的實驗室診斷技術有病毒的分離與鑒定、免疫過氧化物酶單層試驗(IPMA)、間接免疫熒光試驗(IFA)間接酶聯免疫吸附試驗(間接ELISA)和血清中和試驗(SN)等。病毒的分離與鑒定多用于急性病例的確診和新疫區(qū)的確定。其余4種方法主要用于檢測PRRS病毒抗體。IPMA、IFA和間接ELISA三者特異性相似,但以間接ELISA的敏感性最高。應用這三種方法一般不易區(qū)別病毒的抗原類型，故多適用于確定病性。SN反應具有明顯的抗原型別差異,因此,它既適用于確定病性，也適用于鑒定病毒的抗原類型。中和抗體出現最晚，不適合于早期診斷。本標準指定上述五種實驗室診斷技術為我國進出境和國內生豬PRRS的診斷方法.保證了我國對PRRS的診斷與國外的一致性。在實際應用時，可根據需要和條件,從中選用1～2種方法即可。3病毒的分離與鑒定3.1材料準備3.1.1器材：96孔細胞培養(yǎng)板、微量移液器、恒溫水浴箱、二氧化碳(CO.)恒溫箱、普通冰箱及低溫冰箱、離心機及離心管、組織研磨器、孔徑0.2m的微孔濾膜、普通光學顯微鏡。3.1.2試劑：RPMI1640營養(yǎng)液、特牛血清、青霉素(10"IU/mL.)與鏈霉素(10"g/mL)溶液、7.5%碳酸氫鈉溶液等。3.1.3細胞培養(yǎng)物：豬原代肺泡巨喔細胞培養(yǎng)物（PAM)或MARC-145或HS.H細胞。PAM由無PRRS豬獲取.并經批次檢驗合格，制備和檢驗方法見附錄B。MARC-145或HSH細胞由國家指定單位提供。3.1.4樣品3.1.4.1樣品的采取和送檢;在發(fā)病早期，無菌地采取病豬的血清或腹水。對病死豬（如流產的死胎)和撲殺豬(如弱胎豬)應立即采取肺、扁桃體和牌等組織數小塊.置冰瓶內立即送檢。不能立即檢查者，應放－25℃～－30C冰箱中，或加50%甘油生理鹽水.4C保存送檢。3.1.4.2樣品的處理：血清和腹水可直接使用。肺、牌和扁桃體等組織可單獨使用.也可混合后使用。各組織剪碎后研磨成棚狀·加入RPMI1640營養(yǎng)液·制成10%懸液.3000×g離