標準解讀

《GB/T 18641-2002 偽狂犬病診斷技術》是一項由中國發(fā)布的國家標準，旨在為偽狂犬病的診斷提供統(tǒng)一的技術規(guī)范和方法。該標準詳細闡述了實驗室檢測偽狂犬病病毒（PRV）的各種技術和要求，確保診斷結果的準確性和可靠性。以下是該標準的主要內容概覽：

  1. 范圍：標準明確了適用范圍，即規(guī)定了動物樣本中偽狂犬病病毒的檢測方法，包括臨床樣品的采集、保存、運輸以及實驗室檢測技術。

  2. 規(guī)范性引用文件：列出了實施該標準時需要參考的其他相關國家標準或國際標準文獻，確保所有操作均有據(jù)可依。

  3. 術語和定義：對偽狂犬病、偽狂犬病病毒等專業(yè)術語進行了明確界定，便于讀者理解。

  4. 診斷技術：

    • 病毒分離與鑒定：介紹了在適宜細胞系上進行病毒分離培養(yǎng)的方法，以及通過細胞病變效應（CPE）、免疫熒光法（IFA）等技術鑒定病毒。
    • 血清學試驗：包括酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、中和試驗等，用于檢測動物血清中的特異性抗體。
    • 分子生物學方法：如聚合酶鏈反應（PCR）及實時熒光定量PCR（RT-qPCR），用以直接檢測樣本中的病毒核酸，提高檢測靈敏度和速度。

  5. 樣品的采集、保存與運輸：詳細說明了不同種類動物（如豬、牛、羊等）的適宜采樣部位、采樣方法，以及樣品在保存和運輸過程中的條件要求，以保證樣品質量不受影響。

  6. 質量控制：強調了實驗過程中應實施的質量控制措施，包括陽性對照、陰性對照的使用，以及定期進行方法驗證和實驗室間比對，確保檢測結果的準確性和可比性。

  7. 安全防護：提供了實驗操作中應遵循的安全防護措施，以防病毒傳播和人員感染。

  8. 附錄：可能包含具體的操作步驟、參考品信息或其他補充材料，進一步細化和指導實際操作。


如需獲取更多詳盡信息，請直接參考下方經(jīng)官方授權發(fā)布的權威標準文檔。

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  • 被代替
  • 已被新標準代替，建議下載現(xiàn)行標準GB/T 18641-2018
  • 2002-02-19 頒布
  • 2002-05-01 實施
?正版授權
GB/T 18641-2002偽狂犬病診斷技術_第1頁
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文檔簡介

ICS.11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T18641—2002偽狂犬病診斷技術DiagnostictechniquesforAujeszk'sdisease2002-02-19發(fā)布2002-05-01實施中華：人民共和國發(fā)布國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局

中華人民共和國國家標準偽狂犬病診斷技術GGB/T18641-2002中中國標準出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復興門外三里河北街16號郵郵政編碼：100045電話：63787337、637874472002年7月第一版2004年11月電子版制作書號：155066·1-18545版權專有侵權必究舉報電話：（010)68533533

GB/T18641-2002偽狂犬?。╬seudorabies.PR:Auieszky'sdisease.AD）是危害豬、牛、羊、狗、貓、家免等多種家畜和野生動物的一種急性傳染病。除豬以外的動物感染偽狂犬病病毒后·主要是以發(fā)熱、奇癢和腦脊髓炎癥狀為特征以死亡為結局，并呈散發(fā)形式。本病對養(yǎng)豬業(yè)危害最大，豬感染后可引起姓振母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎;仔豬大量死亡，15日齡內死亡率為100%.斷奶仔豬死亡率10%～20%,種豬不育，母豬返情，空懷，公豬宰丸發(fā)炎腫脹、菱縮、失去種用能力：育肥豬增重緩慢、飼料報硼降低。本病呈世界性分本標準規(guī)定的病原學診斷方法主要用于死亡動物的病料檢測和活體動物的鼻技子樣品檢測，其中聚合酶鏈反應具有快速、靈敏的特點，可用于大批樣品的檢測。血清學診斷主要用于非免疫動物的診斷、血清流行病學調查和免疫動物的抗體水平監(jiān)測。中和試驗特異性強，是國際通用的法定方法，可用于口岸進出口檢疫;膠乳凝集試驗，簡便快速、敏感性高、特異性強，適用于基層現(xiàn)場檢測：酶聯(lián)免疫吸附試驗適用于實驗室大批樣品檢查、產(chǎn)地檢疫、流行病學調查和無本病健康豬群的建立。本標準的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D都是標準的附錄，附錄E是提示的附錄。本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術委員會歸口本標準由華中農(nóng)業(yè)大學畜牧獸醫(yī)學院負責起草，農(nóng)業(yè)部動物檢疫所參加起草，本標準主要起草人：陳煥春、何啟蓋、李曉成、吳斌、方六榮、金梅林、邱德新、吳美州

中華人民共和國國家標準GB/T18641-2002偽狂犬病診斷技術DiagnostictechniquesforAujeszk'sdisease1范圍本標準規(guī)定了偽狂犬病的診斷方法。本標準適用于豬、羊、犬、貓等及其他易感動物偽狂犬病的診斷。其中病毒分離鑒定、聚合酶鏈式反應、家免接種試驗適用于偽狂犬病病毒的檢測：中和試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗適用于非免疫動物偽狂犬病抗體的檢測以及免疫后抗體水平的監(jiān)測：膠乳凝集試驗適用于實驗室和現(xiàn)場對偽狂犬病抗體的早期檢測。病毒分離鑒定2.1試驗材料改良最低要素營養(yǎng)液(DMEM)培養(yǎng)基配方見附錄A(標準的附錄)倉鼠腎細胞(BHK.)或豬腎細胞系（PK-15)細胞，新生牛血清，青霉素·鏈霉素·0.22m微孔濾膜，細胞培養(yǎng)瓶。2.2操作步驃2.2.1病料的采集：對死亡病畜或活體送檢并處死的動物，以無菌手術采集大腦、三叉神經(jīng)節(jié)、扁桃體肺等組織，冷藏送實驗室檢測。2.2.2樣品處理：待檢組織在滅菌乳缽內剪碎，加入滅菌玻璃砂研磨,用滅菌生理鹽水或DMEM培養(yǎng)液（見附錄A）制成1：5乳劑.反復凍融三次，經(jīng)3000r/min離心30min后.取上清液經(jīng)0.22m微孔濾膜過濾，加入青霉素溶液至最終濃度為300TU/mL、鏈霉素為100g/mL,-70℃保存作為接種材料。2.2.3病料接種：將病料濾液接種已長成單層的BHK細胞(或PK-15細胞)接種量為培養(yǎng)液量的10%.37℃恒溫箱中吸附1h.加入含10%新生牛血清(已經(jīng)過56C水浴滅活30min,過濾除菌,無支原體)的DMEM培養(yǎng)液，置37C溫箱中培養(yǎng)。2.2.4觀察結果：接種后36h～72h.細胞應出現(xiàn)典型的細胞病變效應(CPE)表現(xiàn)為細胞變圓，拉網(wǎng)、脫落。如第一次接種不出現(xiàn)細胞病變.應將細胞培養(yǎng)物凍融后盲傳三代.如仍無細胞病變.則判為偽狂犬病病毒檢測陰性。2.2.5病毒的鑒定：將出現(xiàn)細胞病變的細胞培養(yǎng)物，用聚合酶鏈反應或家免接種試驗，或作進一步監(jiān)定。3聚合酶鏈反應3.1試驗材料蛋白酶K，十二烷基硫酸鈉(SDS).苯酚,三氯甲烷,異戊醇(分析純)溴化乙鍵(EB).TEN緩沖液【見附錄B(標準的

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