標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 18648-2002 非洲豬瘟診斷技術(shù)》是中國關(guān)于非洲豬瘟診斷方法的一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn),旨在為獸醫(yī)、實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員及動(dòng)物防疫相關(guān)部門提供一套統(tǒng)一、規(guī)范的非洲豬瘟檢測與確認(rèn)流程。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)闡述了多種診斷技術(shù)及其應(yīng)用要求,確保診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,對(duì)防控非洲豬瘟疫情具有重要意義。以下是該標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容概覽:
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范圍:規(guī)定了非洲豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷方法,包括臨床癥狀觀察、病理解剖學(xué)檢查、免疫學(xué)檢測和分子生物學(xué)檢測等,適用于疑似非洲豬瘟疫情的診斷與確認(rèn)。
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規(guī)范性引用文件:列出了執(zhí)行本標(biāo)準(zhǔn)時(shí)所依據(jù)或參考的其他標(biāo)準(zhǔn)文件,確保診斷過程的標(biāo)準(zhǔn)化和兼容性。
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術(shù)語和定義:明確了非洲豬瘟、抗原、抗體等專業(yè)術(shù)語的具體含義,為標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確理解和執(zhí)行奠定基礎(chǔ)。
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診斷原則:強(qiáng)調(diào)了綜合分析臨床癥狀、流行病學(xué)調(diào)查信息及實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的重要性,提倡采用多種診斷方法相互驗(yàn)證的原則。
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臨床癥狀與病理變化觀察:描述了非洲豬瘟感染豬只可能出現(xiàn)的典型臨床表現(xiàn)和病理學(xué)特征,如高熱、皮膚發(fā)紺、脾臟腫大等,作為初步判斷依據(jù)。
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免疫學(xué)檢測方法:
- 間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA):用于檢測血清中的特異性抗體,適用于流行病學(xué)調(diào)查和大規(guī)模篩查。
- 免疫熒光試驗(yàn)(IFAT):利用熒光標(biāo)記抗體檢測組織切片或細(xì)胞培養(yǎng)物中的非洲豬瘟病毒抗原,具有較高的敏感性和特異性。
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分子生物學(xué)檢測方法:
- 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR):包括常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR,能夠直接檢測樣本中的病毒核酸,是目前最常用的快速診斷方法之一。
- 核酸序列分析:通過測序確定病毒的基因型,有助于追蹤疫情來源和病毒變異情況。
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樣品采集、保存與運(yùn)輸:詳細(xì)說明了不同樣本類型(如血液、組織、分泌物)的采集方法、保存條件及運(yùn)輸要求,以保證樣本質(zhì)量滿足檢測需求。
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實(shí)驗(yàn)室生物安全:強(qiáng)調(diào)了在進(jìn)行非洲豬瘟檢測時(shí)應(yīng)遵循的生物安全操作規(guī)程,防止病毒擴(kuò)散和人員感染。
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診斷結(jié)果判定與報(bào)告:制定了診斷結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn),要求明確記錄檢測方法、結(jié)果及結(jié)論,并按規(guī)定格式出具正式報(bào)告。
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- 被代替
- 已被新標(biāo)準(zhǔn)代替,建議下載現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18648-2020
- 2002-02-19 頒布
- 2002-05-01 實(shí)施
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文檔簡介
ICS.11.220B41中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18648—2002非洲豬癌診斷技術(shù)DiagnostictechniquesforrAfricanswinefever2002-02-19發(fā)布2002-05-01實(shí)施中華人民共和國發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)非洲豬診斷技術(shù)GB/T18648-2002中中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復(fù)興門外三里河北街16號(hào)郵政編碼:100045電話:63787337、637874472002年7月第一版2004年11月電子版制作書號(hào):155066·1-18544版權(quán)專有侵權(quán)必究舉報(bào)電話:(010)68533533
GB/T18648-2002非洲豬癌(Africanswinefever,簡稱SF)是由非洲豬癌病毒(ASFV)引起的豬的一種急性、熱性高度接觸傳染性疾病。其特征為病程短·病死率高·臨床癥狀和病理變化均類似于急性豬癌,表現(xiàn)高熱皮膚充血、流產(chǎn)、水腫及臟器出血。為世界動(dòng)物衛(wèi)生組織WorldOrganizationforAnimalHealth(英)OfficeIntentionaldesEpizootic(法),OIE和我國規(guī)定的動(dòng)物一類疾病。病毒在鮮肉和腌肉中能存活數(shù)ASF的實(shí)驗(yàn)室診斷分為兩類:第一類包括病毒分離、病毒抗原和基因組DNA的檢測;第二類包括抗體的檢測。試驗(yàn)方法的選擇主要依據(jù)本國或本地區(qū)的疾病情況而定。在沒有ASF但又懷疑該病存在的國家,實(shí)驗(yàn)室診斷必須應(yīng)用無感染性的診斷方法,即應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測病毒基因組DNA和應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測血清抗體。我國是無ASF國家,目前尚無ASF的檢疫方法。農(nóng)業(yè)部動(dòng)物檢疫所于1997年與美國梅島動(dòng)物病研究中心進(jìn)行了ASF的無感染性快速檢測方法的合作研究,建立了適合于我國使用的由可疑感染動(dòng)物血液和內(nèi)臟器官中直接檢測ASFVDNA的PCR技術(shù).以及檢測血清中ASFV抗體的ELISA方法。本標(biāo)準(zhǔn)對(duì)這兩種方法技術(shù)要求作了規(guī)定。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B和附錄C都是標(biāo)準(zhǔn)的附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:農(nóng)業(yè)部動(dòng)物檢疫所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:蔣正軍、王樹雙、尹燕博、蔡麗娟、郭福生、陸明哲、孫淑芳、龔振華
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18648-2002非洲豬癌診斷技術(shù)DiagnostictechniquesforAfricanswinefever1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了非洲豬癌(ASF)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)的技術(shù)要求本標(biāo)準(zhǔn)適用于生豬和野豬等易感動(dòng)物及其產(chǎn)品ASF的診斷和檢疫,2PCR試驗(yàn)2.1材料準(zhǔn)備2.1.1樣品DNA制備方法見附錄A(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)2.1.2電泳液緩沖液的配制方法見附錄B(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)2.1.3標(biāo)準(zhǔn)ASFV-BA株DNA、引物1、引物2、1.25mmol/LdNTP和載樣緩沖液2.1.4臺(tái)克(Taq)DNA聚合酶、分子量為100堿基對(duì)(bp)Ladder(標(biāo)準(zhǔn)DNAMarker)0和10倍濃度的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增緩沖液。2.1.5自動(dòng)DNA熱循環(huán)儀2.2操作方法2.2.1將下列試劑按要求量加入到0.75mL的離心管中:滅菌蒸留水(24.5PL.);10倍濃度的PCR擴(kuò)增緩沖液(5PL):1.25mmol/LdNTP存液(8PL);引物1(1L);引物2(1PL);樣品DNA溶液(10L)見附錄A):TaqDNA聚合酶(0.5L)。2.2.2設(shè)定兩個(gè)對(duì)照,陽性對(duì)照為標(biāo)準(zhǔn)的ASFV-BA株的10LDNA含量為10{g:陰性對(duì)照為不含DNA的滅菌蒸留水10/L。2.2.3取50″L礦物油覆蓋在混合液上。2.2.4將加有樣品或?qū)φ栈旌衔锏腅ppendorf管放入自動(dòng)DNA熱環(huán)儀中按下述程序和條件進(jìn)行DNA擴(kuò)增:94C5min.50C2min.72C3min循環(huán)一次94C1min.50C2min.72C3min循環(huán)30次94C1min.50C2min,72C10min循環(huán)一次,最后置于4C保存2.2.5上述步驃完成后,從礦物油下小心取出每種反應(yīng)混合物20“L·放入另一支干凈的Eppendorf管中并加2載樣緩沖液,2.2.6將所有樣品按編號(hào)加入到對(duì)應(yīng)2%瓊脂凝膠(見附錄B1)板的各孔中.其中一孔加標(biāo)準(zhǔn)陽性DNA樣品,在凝膠的邊孔中加入標(biāo)準(zhǔn)分子量DNAMarker。2.2.7將凝膠在150V恒定電壓下電泳2h。2.2.8結(jié)果判定:用紫外光源檢查凝膠。如為陽性樣品則出現(xiàn)一條孤立的、與陽性對(duì)照PCR產(chǎn)物的同步遷
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