GB/T 19524.1-2004肥料中糞大腸菌群的測定

ICS65.080B10中華人民共和國國家標準GB/T19524.1--2004肥料中糞大腸菌群的測定Determinationoffecalcoliformsinfertilizers2004-05-31發(fā)布2004-10-01實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標準化管理委員會

GB/T19524.1—2004前本標準的附錄A、附錄B為規(guī)范性附錄.本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部種植業(yè)管理司提出。本標準起草單位：農(nóng)業(yè)部微生物肥料質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心。本標準主要起草人：曹鳳明、沈德龍、李俊、姜昕、李力。

GB/T19524.1一2004肥料中糞大腸菌群的測定范圍本標準規(guī)定了肥料中糞大腸菌群的測定方法2定義下列定義適用于本標準。糞大腸菌群fecalcoliforms-群在44.5℃±0.5C條件能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌糞大腸菌群數(shù)為每克(毫升)肥料樣品中糞大腸菌群的最可能數(shù)(MPN)。儀器設(shè)備高壓蒸汽滅菌器：顯微鏡：恒溫水浴或隔水式培養(yǎng)箱;恒溫旋轉(zhuǎn)式搖床：干燥箱；天平：酸度計或精密PH試紙;接種環(huán);試管(15mmX150mm);小套管(杜蘭管);移液管;三角瓶;培養(yǎng)血;載玻片；玻璃珠；酒精燈；試管架。養(yǎng)基和試劑4.1培養(yǎng)基：遵照附錄A的規(guī)定4.2革蘭氏染色液：遵照附錄B的規(guī)定5檢驗步驃5.1樣品稀釋在無菌操作下稱取樣品10,0g或吸取樣品10mL,加入到帶玻璃珠的90mL無菌水中,置于搖床上200r/min充分振蕩30min.即成10-1稀釋液。用無菌移液管吸取5.0mL上述稀釋液加入到45mL無菌水中,混勾成10-稀釋液。。這樣依次稀釋,分別得到10-.10-等濃度稀釋液（每個稀釋度須更換無菌移液管)。5.2乳糖發(fā)酵試驗選取三個連續(xù)適宜稀釋液,分別吸取不同稀釋液1.0mL加入到乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，每一稀釋度接種3支發(fā)酵管.置44.5C±0.5C恒溫水浴或隔水式培養(yǎng)箱內(nèi).培養(yǎng)24h±2h。如果所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,則為糞大腸菌群陰性：如果有產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸的發(fā)酵管,則按5.3進行。5.3分離培養(yǎng)從產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸的發(fā)酵管中分別挑取發(fā)酵液在伊紅美藍瓊脂平板上劃線，置36C±1C條件下培養(yǎng)18h~24h。5.4證實試驗從5.3分離平板上挑取可疑菌落，進行革蘭氏染色。染色反應(yīng)陽性者為糞大腸菌群陰性;如果為革蘭氏陰性無芽胞桿菌則挑取同樣菌落接種在乳糖發(fā)酵管中,置44.5C±0.5C條件下培養(yǎng)24h±2h.觀察產(chǎn)氣情況，不產(chǎn)氣為糞大腸苗群陰性：產(chǎn)氣為糞大腸苗群陽性。5.5結(jié)果證