標(biāo)準(zhǔn)解讀
GB/T 19564-2004 是一項(xiàng)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn),全稱為《落葉松種子鑒定實(shí)驗(yàn)方法 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA法》。這項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)主要規(guī)定了利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD)技術(shù)對落葉松種子進(jìn)行種質(zhì)鑒定的實(shí)驗(yàn)方法和要求,旨在為落葉松種子的品種鑒定、遺傳多樣性分析以及林木育種提供科學(xué)依據(jù)和統(tǒng)一的操作規(guī)范。
標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容概覽
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范圍:明確了該標(biāo)準(zhǔn)適用于落葉松屬植物種子的真實(shí)性和純度鑒定,通過RAPD分子標(biāo)記技術(shù)來分辨不同種類或品種間的遺傳差異。
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規(guī)范性引用文件:列出了實(shí)施本標(biāo)準(zhǔn)時所依據(jù)的其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)文檔,確保實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
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術(shù)語和定義:對關(guān)鍵術(shù)語如RAPD、引物、DNA擴(kuò)增等進(jìn)行了明確界定,便于讀者理解。
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試劑與材料:詳細(xì)說明了實(shí)驗(yàn)所需的各種化學(xué)試劑、DNA提取套件、引物設(shè)計原則及其合成要求,以及實(shí)驗(yàn)器材的具體規(guī)格。
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樣品采集與處理:規(guī)定了落葉松種子樣本的正確采集、保存、預(yù)處理及DNA提取的方法,確保DNA質(zhì)量滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)需求。
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RAPD反應(yīng)體系與程序:詳述了PCR反應(yīng)體系的組成,包括模板DNA、引物、緩沖液、酶等成分的濃度與體積,以及PCR循環(huán)參數(shù)設(shè)置,確保實(shí)驗(yàn)操作的一致性和高效性。
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電泳與結(jié)果分析:指導(dǎo)如何通過凝膠電泳分離擴(kuò)增產(chǎn)物,并利用成像系統(tǒng)記錄結(jié)果,進(jìn)一步對得到的多態(tài)性條帶進(jìn)行比較分析,以識別遺傳差異。
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數(shù)據(jù)處理與種子鑒定:介紹了如何根據(jù)RAPD圖譜的相似性或差異,利用特定軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,從而對落葉松種子進(jìn)行品種或種源的鑒定。
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質(zhì)量控制:強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)過程中的質(zhì)量控制措施,包括陽性對照和陰性對照的設(shè)置,以及實(shí)驗(yàn)重復(fù)次數(shù)的要求,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。
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安全要求:簡要提及實(shí)驗(yàn)室操作過程中的生物安全和個人防護(hù)措施,確保實(shí)驗(yàn)人員安全。
實(shí)施意義
該標(biāo)準(zhǔn)的出臺,為落葉松種子的分子水平鑒定提供了一套標(biāo)準(zhǔn)化流程,有助于提高種子鑒定的精確度和效率,促進(jìn)林業(yè)資源的合理利用和遺傳資源的保護(hù)。同時,也為相關(guān)科研工作者、種子生產(chǎn)商及質(zhì)量監(jiān)管機(jī)構(gòu)提供了統(tǒng)一的技術(shù)參考和操作指南,推動了林木育種工作的規(guī)范化發(fā)展。
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- 廢止
- 已被廢除、停止使用,并不再更新
- 2004-06-22 頒布
- 2004-12-01 實(shí)施
下載本文檔
文檔簡介
ICS65.020.20B61中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T19564—2004落葉松種子鑒定實(shí)驗(yàn)方法隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA法Experimentalidentificationmethodforspeciesoflarchsecd-RAPD2004-06-22發(fā)布2004-12-01實(shí)施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會
GB/T19564一2004前本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局提出本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:國家農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化監(jiān)測與研究中心(黑龍江)黑龍江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:王慶貴、徐品、姜雯、李光宇、石紹業(yè)、王衛(wèi)國。
GB/T19564一2004目前,我國林木種子的鑒定多采用感官鑒定、理化水平鑒定等方法。這些方法所需的檢驗(yàn)周期較長,不具備分子水平鑒定的諸多優(yōu)點(diǎn)。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,特別是20世紀(jì)90年代以來,分子生物學(xué)的相關(guān)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用.其檢測對象為DNA大分子—-生物的遺傳基礎(chǔ)。以DNA為檢測對象,具有許多其他檢測水平所不具備的優(yōu)點(diǎn):首先,可供探測DNA標(biāo)記的數(shù)量可能是無限的·這是同工酶技術(shù)所無法比擬的;其二,DNA分析技術(shù)不像其他技術(shù)那樣隨組織或發(fā)育階段而異,植物體任何部位、任何時期提供的DNA均可用于分析.其檢測結(jié)果都是一樣的:第三.DNA分析不受環(huán)境影響.其變異只源于等位基因DNA序列的變異這種穩(wěn)定性便于揭示品種間的遺傳變異,從而排除了環(huán)境變異所造成的表型變異。基于上述優(yōu)點(diǎn)·DNA分析技術(shù)是農(nóng)、林、牧、漁等品種鑒定的先進(jìn)方法
GB/T19564一2004落葉松種子鑒定實(shí)驗(yàn)方法隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了落葉松種子鑒定的具體實(shí)驗(yàn)方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)法對落葉松種子鑒定的實(shí)驗(yàn)過程術(shù)語、定義和縮略語2.1術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)2.1.1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)polymerasechainreaction一種可以從少量至一個拷貝的特定堿基順序的DNA片斷在體外花費(fèi)幾個小時即可擴(kuò)增出數(shù)百萬個分子的酶催化反應(yīng).即DNA合成反應(yīng)。2.1.2隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNArandomamplifiedpolymorphicDNA是以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)為基礎(chǔ),用隨機(jī)排列的寡聚脫氧核首酸單鏈作為引物擴(kuò)增基因組中不同位點(diǎn)的DNA,進(jìn)而揭示多個位點(diǎn)等位基因間多態(tài)性的一種分子標(biāo)記方法2.1.3核谷酸nucleotide是構(gòu)成核酸的基本單元,由三部分組成:五碳糖、磷酸和環(huán)狀的含氮堿基2.1.4引物Primer一條互補(bǔ)結(jié)合在模板DNA鏈上的短的單鏈·提供3'-0H末端作為DNA合成的起點(diǎn)·延伸合成模板DNA的互補(bǔ)鏈。2.1.5多態(tài)性polymorphism一對引物在兩個或兩個以上不同材料基因組DNA之間擴(kuò)增,得到數(shù)目不同或長度不同的DNA片斷。2.2縮略語下列縮略語適用于本標(biāo)準(zhǔn)RAPD隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RandomAmplifiedPolymorphismDNA)PCR:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction)DNA脫氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid)OD光密度(OpticalDens
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