GB/T 21104-2007動(dòng)物源性飼料中反芻動(dòng)物源性成分(牛、羊、鹿)定性檢測方法PCR方法

犐犆犛６５．１２０

犅４６

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２１１０４—２００７

動(dòng)物源性飼料中反芻動(dòng)物源性成分

（牛、羊、鹿）定性檢測方法犘犆犚方法

犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犚狌犿犻狀犪狀狋犻犪犱犲狉犻狏犲犱犿犪狋犲狉犻犪犾狊

（犅狅狏犻犱犪犲、犆犪狆狉犻狀犪犲、犆犲狉狏狌狊）犻狀犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犪狋犲犱犳犲犲犱狊狋狌犳犳狊—犘犆犚犿犲狋犺狅犱

２００７１０２４發(fā)布２００８０４０１實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書

犌犅／犜２１１０４—２００７

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院、中華人民共和國山東出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共

和國深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：吳亞君、陳穎、徐寶梁、王晶、高宏偉、宗卉、曹際娟、黃文勝、袁飛、趙貴明。

本標(biāo)準(zhǔn)首次發(fā)布。

Ⅰ

書

犌犅／犜２１１０４—２００７

動(dòng)物源性飼料中反芻動(dòng)物源性成分

（牛、羊、鹿）定性檢測方法犘犆犚方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物源性飼料中反芻動(dòng)物（Ｒｕｍｉｎａｎｔｉａ）源性成分（牛、羊、鹿）檢測的ＰＣＲ方法，該檢

測方法的檢出限為０．１％（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于動(dòng)物源性飼料中反芻動(dòng)物源性成分（牛、羊、鹿）的定性檢測。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

ＧＢ６６８２分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

ＧＢ／Ｔ１４６９９．１飼料采樣（ＧＢ／Ｔ１４６９９．１—２００５，ＩＳＯ６４９７：２００２，ＩＤＴ）

ＳＮ／Ｔ１１９３基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

３術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

３．１

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀；犘犆犚

用于擴(kuò)增位于兩段已知序列之間ＤＮＡ（ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅａａｃｉｄ，脫氧核糖核酸）的方法。模板

ＤＮＡ經(jīng)過高溫變性成單鏈，在ＤＮＡ聚合酶和適宜的溫度下，兩條互不互補(bǔ)的寡核苷酸片段即引物分

別與模板ＤＮＡ兩條鏈上的一段互補(bǔ)序列發(fā)生退火，接著在ＤＮＡ聚合酶的催化下以４種ｄＮＴＰ（ｄｅ

ｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，脫氧核苷酸三磷酸）為底物，使退火引物得以延伸，如此反復(fù)變性、退火

和ＤＮＡ合成這一循環(huán)，使位于兩段已知序列之間的ＤＮＡ片段呈幾何倍數(shù)擴(kuò)增，經(jīng)２５個(gè)～３０個(gè)擴(kuò)增

循環(huán)，擴(kuò)增倍數(shù)達(dá)到約１０６。

４原理

利用裂解液破碎細(xì)胞，三氯甲烷抽提蛋白質(zhì)，無水乙醇沉淀得到ＤＮＡ；以提取的ＤＮＡ為模板進(jìn)行

ＰＣＲ擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳檢測ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物；ＰＣＲ陽性產(chǎn)物應(yīng)用限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)進(jìn)行確證。

５試劑和材料

除另有規(guī)定外，試劑為分析純或生化試劑。實(shí)驗(yàn)用水符合ＧＢ６６８２的要求。

５．１反芻動(dòng)物源性成分檢測用引物（對(duì)）序列為：