寵物醫(yī)學(xué)-實(shí)驗(yàn)室檢查判讀之細(xì)胞學(xué)檢查制片

實(shí)驗(yàn)室檢查判讀

——細(xì)胞學(xué)檢查制片

脫落細(xì)胞標(biāo)本采集自然分泌物采集自然分泌物主要指：呼吸道分泌物、漿膜腔積液、尿液、乳頭溢液、陰道分泌物等。

呼吸道分泌物采集：

顆粒狀痰、血絲、血痰、泡沫痰、黃痰、鐵銹痰制片：拉片固定：95%酒精30-60分鐘染色：Diff-Quik染色或HE染色胸腹水、尿等液體

細(xì)胞學(xué)制片存在的問題：

1、有效細(xì)胞數(shù)量少（造成漏診）

2、細(xì)胞退變、結(jié)構(gòu)不清（造成誤診斷）液體標(biāo)本制片規(guī)范1、取液：輕輕的把送檢液體上部倒掉，取下層液體，放入離心管。也可直接吸取底部液體。2、轉(zhuǎn)速1000/分，2-5分鐘。3、制片方法：看沉淀物的量（液體的清亮度）多少而區(qū)別對待：（1）一般量制片：

吸入試管內(nèi)放入離心機(jī)離心完成后看底部白膜或最上層細(xì)胞方法1：吸干上清液方法二：倒去上清液，將試管倒立在衛(wèi)生紙上方法三：用棉簽吸去液體吸出沉淀涂片方法一：吸管涂片（細(xì)胞較干時推薦）涂片方法二：推拉法涂片涂片方法三：平拉法涂片（推薦，但細(xì)胞較干時不要用）結(jié)果：涂片是濕潤的，但沒有流動的液體立即固定細(xì)胞很少的標(biāo)本

放入50ML試管，離心吸出沉淀物涂片待自然干燥后不需固定，直接進(jìn)行DiffeqiuckdeB、C液浸染，免沖洗。注意動作要輕，不能用流動水沖洗，以免樣本丟失

血多細(xì)胞量少的標(biāo)本大量沉淀物

如果細(xì)胞沉淀物多，可將吸管中的空氣擠出，直接把吸管插入沉淀物中，輕輕吸出沉淀物，直接涂片。沉淀物的上層沒有或很少有沉淀物

吸取上層沉淀物，放入25%酒精或冰醋酸酒精液內(nèi)（25ml酒精+10ml冰醋酸+65ml水）內(nèi)，打勻，再離心沉淀。然后，吸取沉淀物，涂片固定。

需要注意的是，處理后的細(xì)胞形態(tài)與排列方式都會發(fā)生不同程度的改變，所以，不是可診斷細(xì)胞量少，盡可能不用。液基細(xì)胞學(xué)也是如此。5X未經(jīng)處理的胸水5X處理后的胸水

但是，經(jīng)過處理的胸腹水細(xì)胞多多少少總有褪變，因此，不是血液太多，細(xì)胞成份太少，一般不采用破紅細(xì)胞法。脫落細(xì)胞制片的關(guān)鍵

立即固定：

當(dāng)細(xì)胞涂片完成后，應(yīng)立即放入95%酒精液體內(nèi)固定，至于固定液：如甲醇、酒精乙醚液等效果無明顯差異。細(xì)胞的褪變主要原因不是固定液的種類，而是在制片過程中空氣的氧化過程---干燥。干固定濕固定固定時間：5分鐘即可。剩下的送檢液體不要立即倒去，等閱片完成后，看看需不需要再制片做免疫組化或制成組織塊。（可放在冰箱內(nèi)，也可放在室溫狀態(tài)下24小時以上）細(xì)胞涂片40XCKpan40XCK1840XCK1940XCalretinin染色1、從固定液拿出后，不經(jīng)水洗，立即放入蘇木素染色3-5分鐘。2、水洗。3、1%鹽酸酒精分化（不能用1%鹽酸水溶液分化）。4、溫水藍(lán)化。5、伊紅染色1-2秒6、75%、85%、95%（2道）、100（2道）酒精脫水。7、二甲苯透明。8、封片。（不能干燥，否則會引起細(xì)胞收縮和黑色空氣結(jié)晶）細(xì)胞蠟塊制作離心后吸出上清液輕輕沿管壁加入95%酒精，細(xì)胞量少的話，可用0.5ml離心管離心，加入瓊脂固定30分鐘后，用尖頭的硬簽輕輕將沉淀物挑出常規(guī)脫水包埋細(xì)胞團(tuán)塊切片外貌細(xì)胞團(tuán)塊切片細(xì)胞切片CD3細(xì)胞切片CD45RO第二節(jié)針吸細(xì)胞學(xué)檢查

一、FNAC的基本概念

FNAC是使用普通注射針頭（外徑0.6-0.9mm）及針管（5-20ml）,刺入病變區(qū)域內(nèi)，通過提插針方式將病灶內(nèi)的細(xì)胞或小組織塊切割下來，同時借助針管內(nèi)負(fù)壓將其吸出，涂片及染色后在光鏡下閱片，最后完成病理診斷的一種活檢方法。針吸標(biāo)本采集原理及穿刺器的改進(jìn)穿刺原理穿刺針準(zhǔn)確進(jìn)入病變部位后強(qiáng)有力切割與足夠負(fù)壓吸取過程的同步進(jìn)行。穿刺器的改進(jìn)針吸檢查應(yīng)用范圍經(jīng)體表可觸及到的腫塊的檢查：頭頸部、口腔、軀干部、四肢部、會陰部等可觸及的腫塊。在影像學(xué)引導(dǎo)下或手術(shù)探查時對臟器腫塊的檢查：呼吸道、消化道、泌尿道、生殖道等。惡性腫瘤患寵已失去手術(shù)機(jī)會，放療或化療前不能手術(shù)活檢的。無快速切片的條件，可以在手術(shù)中行針吸，確定良、惡性。標(biāo)本采集原則解除寵主和患寵恐懼心理。暴露較好，鄰近無重要血管、神經(jīng)和臟器。盡量針吸原發(fā)灶之腫塊或淋巴結(jié)。按淋巴結(jié)腫大出現(xiàn)的時間先后，宜選擇較晚腫大的淋巴結(jié)。盡量不要選擇經(jīng)放療或藥物局部治療的部位進(jìn)行針吸不致引起嚴(yán)重的并發(fā)癥。一般體表腫塊穿刺盡量不用麻醉。睪丸及附睪針吸時盡可能用75％酒精消毒，慎用碘酒消毒。針吸檢查前的病情調(diào)查全身狀況了解：呼吸、循環(huán)、神經(jīng)、造血系統(tǒng)狀況。局部病情了解：腫塊發(fā)生時間、生長速度、痛感。了解影像學(xué)、化驗(yàn)資料及相關(guān)病史。重視簽字手續(xù)(特殊檢查知情同意書)，預(yù)防醫(yī)患糾紛中的被動局面。六、針吸標(biāo)本采集程序體位的選擇穿刺點(diǎn)的選擇針吸部位的固定針吸操作步驟及方法幾種特殊腫塊的針吸常見針吸并發(fā)癥體位的選擇：站位：適用于頭頸部、肩背部。仰位：適用于腹部。側(cè)位：適用于四肢、會陰部、直腸。穿刺點(diǎn)的選擇：選擇易暴露易進(jìn)針的部位。選擇距重要血管神經(jīng)臟器較遠(yuǎn)的部位。選擇對疼痛相對不敏感的區(qū)域。遇軟硬不一的腫塊選擇較硬處。較大的腫物進(jìn)針不宜過深。遇囊性腫物在囊性液吸出后，注意對邊緣處穿刺。腫塊要暴露清楚，仔細(xì)檢查需要針吸的腫塊大小、硬度、深淺、活動度及與周圍組織或重要臟器的關(guān)系，以便選擇進(jìn)針部位、方向和深度。消毒與麻醉。針吸部位的固定：拇、食（中）兩指固定法：適用于＞3cm腫物。食、中兩指固定法：適用于直徑1－2.5cm結(jié)節(jié)。單指固定法，右手小指繃緊體表皮膚及良好的支點(diǎn)：適用于直徑小于1cm結(jié)節(jié)。1cm以下的腫塊針吸操作步驟及方法腫塊固定后，右手持注射器，針尖與皮膚角度視部位而定(圖)。腫塊較小時(＜1cm)，吸取其中心部位；腫塊較大者(＞5cm)，為避免吸出中心壞死物，盡量從周邊取材。右手將針?biāo)ê罄?，保持?fù)壓狀態(tài)，在腫塊內(nèi)將針進(jìn)退數(shù)次，見針和注射器連接處少量液體，消除負(fù)壓后退針。（圖）用消毒棉簽壓迫止血數(shù)分鐘。迅速將吸出物涂在載玻片上均勻推開。幾種特殊腫塊的針吸囊腫：囊內(nèi)容物應(yīng)盡量吸盡。富于血管的靶器官：如甲狀腺或血管豐富的腫瘤，負(fù)壓不宜過大，如有血液進(jìn)入針筒，針吸基本失敗，需換部位再吸。乳腺及胸壁小腫塊。涂片觀察方式6、針吸的常見并發(fā)癥出血或血腫、繼發(fā)感染、虛脫或暈厥、氣胸。七、針吸標(biāo)本的肉眼觀察與判斷顆粒樣肉漿樣物：常為實(shí)質(zhì)性的組織如癌、肉瘤，有時也見于良性腫瘤。粘液樣物：富含粘液的腫瘤如腺癌、混