實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察及革蘭染色

實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察及革蘭染色第一頁，共三十頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)?zāi)康模闭莆占?xì)菌的基本形態(tài)及特殊結(jié)構(gòu)2掌握革蘭染色的原理、方法、結(jié)果3掌握油鏡的使用原理及使用方法實(shí)驗(yàn)原理

G染色原理：等電點(diǎn)學(xué)說化學(xué)學(xué)說通透性學(xué)說

第二頁，共三十頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)用品1、菌種

培養(yǎng)24h的葡萄球菌、大腸桿菌。2、染液革蘭氏染液

草酸銨結(jié)晶紫染液、盧戈氏碘液、95%乙醇、稀釋石炭酸復(fù)紅染液。3、其他物品接種環(huán)、吸水紙、酒精燈、載玻片、顯微鏡、香柏油、擦鏡紙、細(xì)菌標(biāo)本片等。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容細(xì)菌的基本形態(tài)、特殊結(jié)構(gòu)（示教）細(xì)菌的G染色（操作，6人/組）第三頁，共三十頁，2022年，8月28日病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室守則1、學(xué)生進(jìn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿好實(shí)驗(yàn)室專用隔離衣；與實(shí)驗(yàn)無關(guān)物品不準(zhǔn)帶入實(shí)驗(yàn)室，所有實(shí)驗(yàn)材料嚴(yán)禁帶出實(shí)驗(yàn)室。2、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止吸煙及飲食。3、嚴(yán)格操作規(guī)程，杜絕生物安全事故。污染標(biāo)本及使用過的有菌器材放于指定的消毒缸內(nèi)，統(tǒng)一進(jìn)行消毒處理。需要培養(yǎng)的物品做好標(biāo)記，放于指定培養(yǎng)箱內(nèi)。4、如在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)生有菌材料濺出、污染環(huán)境或化學(xué)藥品灼傷等意外情況，應(yīng)立即報(bào)告老師，以便及時處理。

第四頁，共三十頁，2022年，8月28日5、愛護(hù)儀器設(shè)備，不經(jīng)老師批準(zhǔn)，不準(zhǔn)自行接通、斷開電源或拆卸儀器。對儀器設(shè)備造成人為損壞的，要酌情賠償。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，儀器設(shè)備狀態(tài)復(fù)原。6、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清潔臺面、所有循環(huán)使用器材復(fù)原；安排值日生打掃衛(wèi)生；檢查水、電、門、窗等設(shè)施，并經(jīng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人檢查認(rèn)可。7、用肥皂或消毒液洗手、脫隔離衣后方可離開實(shí)驗(yàn)室。第五頁，共三十頁，2022年，8月28日一、細(xì)菌基本形態(tài)、特殊結(jié)構(gòu)觀察（一）、細(xì)菌基本形態(tài)觀察1.球菌：G+：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球菌G-：淋球菌2.桿菌：大腸桿菌（G-）

3.螺形菌：霍亂弧菌（G-）第六頁，共三十頁，2022年，8月28日葡萄球菌鏈球菌G+球菌：第七頁，共三十頁，2022年，8月28日肺炎球菌G+球菌：

痰液中的肺炎鏈球菌（革蘭染色，×1000）第八頁，共三十頁，2022年，8月28日肺炎鏈球菌電鏡圖第九頁，共三十頁，2022年，8月28日G-球菌：

淋球菌第十頁，共三十頁，2022年，8月28日大腸埃希菌G-桿菌：第十一頁，共三十頁，2022年，8月28日霍亂弧菌G-弧菌：第十二頁，共三十頁，2022年，8月28日（二）、細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察莢膜：肺炎球菌鞭毛：變形桿菌（周鞭毛）、霍亂弧菌（單鞭毛）芽胞：破傷風(fēng)桿菌（頂端）、炭疽桿菌（中部）第十三頁，共三十頁，2022年，8月28日概念:某些細(xì)菌在其細(xì)胞壁外包繞一層粘液性物質(zhì)生物學(xué)意義:

1.保護(hù)細(xì)菌，與細(xì)菌致病性有關(guān)

2.用于細(xì)菌的鑒別與分型肺炎鏈球菌莢膜莢膜莢膜：第十四頁，共三十頁，2022年，8月28日肺炎鏈球菌

莢膜：第十五頁，共三十頁，2022年，8月28日概念：許多細(xì)菌在菌體上附有細(xì)長并呈波狀彎曲的絲狀物生物學(xué)意義

1.鞭毛是運(yùn)動器官。有鞭毛的細(xì)菌能主動運(yùn)動，可通過動力試驗(yàn)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。

2.有的細(xì)菌其鞭毛與致病性有關(guān)。

3.可作為細(xì)菌分類、分型的依據(jù)。鞭毛：第十六頁，共三十頁，2022年，8月28日變形桿菌（周鞭毛）鞭毛鞭毛：霍亂弧菌（單鞭毛）第十七頁，共三十頁，2022年，8月28日概念:某些細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下，能在菌體內(nèi)部形成一個圓形或卵圓形小體，是細(xì)菌的休眠形式。生物學(xué)意義

1.芽胞抵抗力強(qiáng)，故應(yīng)以殺滅芽胞作為可靠的滅菌指標(biāo)。高壓蒸汽滅菌法是殺滅芽孢最有效的方法。

2.芽胞的抵抗力強(qiáng)，可在自然界中存在多年，是重要的傳染源。但芽胞并不直接引起疾病，只有發(fā)芽成為繁殖體后，才能迅速大量繁殖而致病。

3.鑒別細(xì)菌每種細(xì)菌形成一種類型芽胞芽孢：第十八頁，共三十頁，2022年，8月28日芽胞的大小、形狀、位置等隨菌種而異，有重要的鑒別意義炭疽芽胞桿菌肉毒梭菌破傷風(fēng)桿菌第十九頁，共三十頁，2022年，8月28日

二、革蘭染色法革蘭染色法是細(xì)菌學(xué)中最廣泛使用的一種鑒別染色法。由丹麥醫(yī)師ChristianGram創(chuàng)立。方法是先將細(xì)菌用結(jié)晶紫染色，加媒染劑（增加染料和細(xì)胞的親和力）媒染后，用脫色劑（乙醇）脫色，再用復(fù)染劑染色。第二十頁，共三十頁，2022年，8月28日G+菌G-菌一一半半結(jié)晶紫盧戈氏碘液95%乙醇石碳酸復(fù)紅初染

媒染

脫色復(fù)染第二十一頁，共三十頁，2022年，8月28日（一）、革蘭染色原理G+菌G-菌等電點(diǎn)學(xué)說PI2~3PI4~5帶負(fù)電荷多帶負(fù)電荷少化學(xué)學(xué)說含核糖核酸鎂鹽多含核糖核酸鎂鹽少通透性學(xué)說低高肽聚糖多，脂質(zhì)少肽聚糖少，脂質(zhì)多酒精不易進(jìn)入酒精易進(jìn)入第二十二頁，共三十頁，2022年，8月28日（二）、G染色步驟與方法

1、涂片制備涂片干燥固定

2、染色初染（結(jié)晶紫）1min媒染（盧戈氏碘液）1min脫色（95%乙醇）30s復(fù)染（石碳酸復(fù)紅）30s吸水紙吸干

3、鏡檢（油鏡下觀察）每次染色后都要進(jìn)行沖洗時間：一、一、半、半第二十三頁，共三十頁，2022年，8月28日葡萄球菌大腸桿菌（三）、G染色結(jié)果

革蘭氏陽性

革蘭氏陰性第二十四頁，共三十頁，2022年，8月28日（四）、革蘭染色注意事項(xiàng)涂片要均勻，不可太厚干燥時切勿在火焰上直烤染色時脫色最關(guān)鍵細(xì)流水沖洗，不要直沖涂膜涂片上積水不能太多，以免稀釋染液第二十五頁，共三十頁，2022年，8月28日（五）、革蘭染色的意義1、鑒別細(xì)菌通過染色將細(xì)菌分為G+、G-兩大類細(xì)菌2、研究與致病性的關(guān)系

G+菌致病一般為外毒素

G-菌致病一般為內(nèi)毒素3、指導(dǎo)臨床用藥

G+菌對青霉素、紅霉素、頭孢菌素敏感

G-菌對上述藥物不敏感，對鏈霉素、氯霉素、慶大霉素、卡那霉素等敏感第二十六頁，共三十頁，2022年，8月28日（一）油鏡工作原理油鏡的透鏡非常小。在不加油的情況下，由于空氣和玻璃對光線的折射率不同，因此光線透過載玻片經(jīng)過空氣時發(fā)生散射，很少能夠進(jìn)入油鏡，造成物像不清。香柏油（n=1.515）的折光率與玻璃（n=1.52）相近，由于光線透入時不會因折射而減弱，因此視野明亮，物像清晰。三、顯微鏡油鏡的使用第二十七頁，共三十頁，2022年，8月28日目鏡物鏡載物臺集光器光源鏡臂粗螺旋細(xì)螺旋第二十八頁，共三十頁，2022年，8月28日（二）油鏡使用方法1．對光

接通電源，打開顯微鏡上的電源開關(guān)，內(nèi)置光源燈亮，并可調(diào)節(jié)亮度。使用油鏡時，應(yīng)將燈光調(diào)至最亮，聚光器升至最高，光柵完全打開。2．標(biāo)本加油

在細(xì)菌染色片的菌膜上滴加1滴香柏油，注意勿使載物臺傾斜，以免鏡油流淌。3．識別并轉(zhuǎn)換油鏡頭

油鏡有三種標(biāo)志：①放大倍數(shù)×100；②鏡頭下緣有一圈白線；③英文標(biāo)識“oil”。找到油鏡，旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器（勿用手直接掰動鏡頭）使油鏡頭轉(zhuǎn)至載物臺中央。4．調(diào)焦、觀察標(biāo)本

從側(cè)面觀察并緩慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，使載物臺上升至油鏡頭浸入油中并幾乎與玻片接觸（注意勿使兩者相碰）時為止；眼睛轉(zhuǎn)向目鏡觀察視野，并往相反方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋緩慢下降載物臺，至視野中閃現(xiàn)標(biāo)本輪廓時為止；再轉(zhuǎn)換細(xì)調(diào)螺旋調(diào)節(jié)至物像清晰。若直至油鏡頭脫離油滴仍未看到物象，可重復(fù)以上操作。第二十九頁，共三十頁，2022年，8月28日（三）油鏡使用注意事項(xiàng)顯微鏡屬于精密儀器，使用時需仔細(xì)小心、避免震動。調(diào)焦時切忌用力過猛、一味往一個方向調(diào)節(jié)，否則易損壞鏡頭或壓碎標(biāo)本片。油鏡頭用后應(yīng)下降載物臺，取下標(biāo)本，立即用擦鏡紙順一個方向擦凈鏡頭上的