實(shí)驗(yàn)室安全與防護(hù)

實(shí)驗(yàn)室安全與防護(hù)第一頁，共六十一頁，2022年，8月28日化學(xué)試劑多：氯仿、甲醇、乙醇、酸堿等生物樣品多：細(xì)胞、細(xì)菌、蛋白、抗體、核酸、臨床標(biāo)本等儀器多：高壓蒸氣滅菌鍋、電泳儀、PCR儀、離心機(jī)、紫外透射儀等特殊樣品、特殊動(dòng)物：標(biāo)記探針、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、各種病理動(dòng)物模型醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的特點(diǎn)第二頁，共六十一頁，2022年，8月28日化學(xué)試劑、有毒藥品導(dǎo)致的傷害生物樣品(細(xì)菌等)及廢液所致的感染、污染輻射、紫外線損傷意外事故放射性同位素污染生物實(shí)驗(yàn)室常發(fā)生的意外第三頁，共六十一頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)室安全事故案例1995年9月香港科技大學(xué)化學(xué)系大四梁同學(xué)因吸入別的同學(xué)潑灑的酸酐而不治身亡。1997年香港科技大學(xué)物理系訪問學(xué)者因未按規(guī)定使用通風(fēng)櫥造成他人肺部傷害而永不被香港各大學(xué)錄用。第四頁，共六十一頁，2022年，8月28日事故原因天災(zāi)占2％人為因素占98%不安全行為不安全環(huán)境凡不知、不顧、不理、不能、粗心、遲鈍、疲勞、情緒等各種內(nèi)在外在的行為工作場所中，工作環(huán)境、設(shè)備設(shè)施對(duì)人所產(chǎn)生的危險(xiǎn)因素第五頁，共六十一頁，2022年，8月28日

保障個(gè)人及他人的人身安全保障實(shí)驗(yàn)室的安全：防火、防水等

避免實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境污染：化學(xué)、生物污染避免實(shí)驗(yàn)室外環(huán)境污染：河流、土壤實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)目的第六頁，共六十一頁，2022年，8月28日Outline醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的安全及防護(hù)一般規(guī)則常用化學(xué)試劑正確使用常用生物材料正確使用常用儀器的正確使用意外事故及處理第七頁，共六十一頁，2022年，8月28日熟悉實(shí)驗(yàn)室周圍的安全出口熟悉滅火器、滅火砂等的存放位置及使用實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有急救藥箱或簡單的急救物品，如創(chuàng)可貼、碘酒等實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止吸煙！一般規(guī)則第八頁，共六十一頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)時(shí)：穿隔離衣，戴消毒手套，不穿涼鞋、不露趾鞋實(shí)驗(yàn)后：整理臺(tái)面、處理廢棄物品(不得隨意丟棄)一般規(guī)則第九頁，共六十一頁，2022年，8月28日常用化學(xué)物質(zhì)－正確使用與安全防護(hù)第十頁，共六十一頁，2022年，8月28日化學(xué)試劑危險(xiǎn)性標(biāo)志易燃性

乙醇氧化性濃硫酸腐蝕性強(qiáng)酸堿污染環(huán)境生物廢液致癌性CCl4爆炸性有毒氰化物第十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日生物實(shí)驗(yàn)室常用化學(xué)試劑易揮發(fā)性試劑：氯仿甲醇乙醇異丙醇等腐蝕性、氧化性試劑：酸性洗液濃硫酸易被氧化試劑：苯酚丙烯酰胺儲(chǔ)存液有毒溶液：溴化乙啶染液丙烯酰胺溶液第十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日氯仿特點(diǎn)：比重大、揮發(fā)性極強(qiáng)脂溶性強(qiáng)、易透皮吸收、肝毒性強(qiáng)使用與防護(hù)：帶手套取液，不要重復(fù)使用槍頭取液后立即旋緊瓶蓋皮膚接觸后立即大量水沖洗第十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日使用與防護(hù)：不可倒入下水道，以免集聚引起火災(zāi)遠(yuǎn)離火源、熱源保持室內(nèi)良好通風(fēng)實(shí)驗(yàn)室里不宜大量貯存特點(diǎn)：易揮發(fā)，易燃，與空氣混合達(dá)一定比例易爆炸乙醇第十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日使用與防護(hù)：配制時(shí)，大量放熱，使用耐熱容器濃酸貼壁分次加入重鉻酸鉀水溶液使用時(shí)，戴長臂耐酸乳膠手套特點(diǎn)：濃硫酸與重鉻酸鉀溶液強(qiáng)氧化性酸性洗液第十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日使用與防護(hù)：廢液不能直接倒入水槽！

方法：先大量用水稀釋，然后倒入廁所等下水道或水槽，再用大量自來水沖洗下水道或水槽酸性洗液第十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日特點(diǎn)：核酸嵌入劑，用于核酸電泳的染色強(qiáng)致突變劑，工作濃度0.5μg/ml使用與防護(hù)：務(wù)必戴手套操作！使用后的廢液、含EB的膠必須處理后丟棄溴化乙啶(EthidiumBromide,EB)第十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日方法多，各有利弊漂白劑處理法（有爭論，但操作方便）－加等量的漂白劑(bleach)，放置2－3天－用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至4－9后，倒入下水道中，大量水沖洗活性炭處理法：－每100ml溶液加入100mg粉末活性炭－室溫?cái)嚢?h后過濾，棄濾液、濾紙及活性炭溴化乙啶(EB)廢液處理第十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日特點(diǎn)：易發(fā)生脫氨反應(yīng)，避光、低溫、短期保存強(qiáng)神經(jīng)毒性，可透皮吸收使用與防護(hù)：操作時(shí)務(wù)必戴手套，可戴口罩丙烯酰胺聚合后，毒性降低切勿將未聚合的丙烯酰胺倒入下水道丙烯酰胺第十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日特點(diǎn)：瓊脂糖凝膠、PAGE膠不易降解使用與防護(hù)：戴手套操作！不得丟棄在下水道!與生活垃圾分類處理含EB的凝膠需處理后方可丟棄含菌落的瓊脂糖膠可煮沸或微波爐處理后丟棄凝膠第二十頁，共六十一頁，2022年，8月28日常用生物樣品

－正確使用與安全防護(hù)第二十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用生物材料細(xì)菌：DH5α，JM109，BL21（DE3）等細(xì)胞株：各種腫瘤細(xì)胞株，永生化細(xì)胞株等臨床組織標(biāo)本，病理組織標(biāo)本，血樣等裸鼠、各種病理動(dòng)物模型等構(gòu)建的質(zhì)粒等第二十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》2003年6月16日按類別、使用專用包裝袋收集醫(yī)療廢物《中華人民共和國傳染病防治法》（04年8月28日修訂版）實(shí)驗(yàn)室生物安全國家標(biāo)準(zhǔn)第二十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日GB19489—2004《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》－2004年5月國家質(zhì)監(jiān)總局和標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)頒布，04年10月1日正式實(shí)施－我國第一部實(shí)驗(yàn)室生物安全國家標(biāo)準(zhǔn)－適用于醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室、各類生物實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室生物安全國家標(biāo)準(zhǔn)第二十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日Biohazardwarningsign基因重組實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)標(biāo)識(shí)生物實(shí)驗(yàn)室危害警告標(biāo)識(shí)第二十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日生物材料危害警告標(biāo)識(shí)Physicalprotection（物理屏障水平)

分：P1-P4Biosafetylevel(生物安全防護(hù)水平)

分：BSL1-4如：P2實(shí)驗(yàn)室

BSL-3實(shí)驗(yàn)室第二十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日一級(jí)防護(hù):--安全設(shè)備、個(gè)體防護(hù)裝置

(生物安全柜；防護(hù)衣、帽等)二級(jí)防護(hù)：

--實(shí)驗(yàn)室的特殊設(shè)計(jì)要求規(guī)范操作：

--嚴(yán)格管理制度

--標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序生物安全防護(hù)第二十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日生物樣品的正確使用培養(yǎng)基：細(xì)菌、細(xì)胞的培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富使用過的培養(yǎng)基可能包含質(zhì)粒、細(xì)菌等棄培養(yǎng)基前，務(wù)必經(jīng)漂白劑處理、煮沸等方法處理后方可倒入下水道!!污染水源的重要途徑第二十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日生物樣品的正確使用構(gòu)建的表達(dá)載體、質(zhì)粒：試驗(yàn)中的任何載體絕對(duì)不得泄漏在實(shí)驗(yàn)室外!!

如含毒素、抗藥性基因的表達(dá)載體贈(zèng)送任何質(zhì)粒，必須得到導(dǎo)師或管理部門授權(quán)防護(hù)：戴手套操作！第二十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日生物樣品的正確使用其它廢棄物：用過的槍頭、注射器、細(xì)胞培養(yǎng)板等需按醫(yī)療廢物分類收集處理，不應(yīng)按生活垃圾處理病理標(biāo)本等應(yīng)焚燒處理第三十頁，共六十一頁，2022年，8月28日生物樣品的正確使用動(dòng)物尸體的處理：專門的容器，冷藏設(shè)施暫時(shí)儲(chǔ)放動(dòng)物尸體無毒性動(dòng)物尸體:在指定地點(diǎn)深埋或焚化感染性動(dòng)物尸體:經(jīng)“防漏”包裝后，經(jīng)蒸氣高壓滅菌，再進(jìn)行深埋或焚化含放射性物質(zhì)的動(dòng)物尸體，經(jīng)特殊包裝后，烘箱60－70℃將尸體烘干，再按廢棄放射性材料處理第三十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日需置于EP管或有蓋的容器內(nèi)，防止樣品流出應(yīng)有明顯的標(biāo)記（如：感染性材料…)樣本應(yīng)低溫運(yùn)輸（4℃或以下）如有破損、泄漏，需按規(guī)定處理生物樣品的轉(zhuǎn)運(yùn)第三十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日使用實(shí)驗(yàn)室微波爐、冰箱烹調(diào)或儲(chǔ)存食物不用適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)設(shè)備，如隔離衣、手套等不按實(shí)驗(yàn)規(guī)程操作，或意外受傷皮膚或黏膜、實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、門把、手機(jī)、電腦鍵盤等污染、身體中毒等生物樣品常發(fā)生的意外第三十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日實(shí)例根據(jù)對(duì)全球5000多個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室累計(jì)3921例相關(guān)感染的調(diào)查統(tǒng)計(jì)，導(dǎo)致感染的原因：80%因工作人員操作失誤引起20%因設(shè)備故障引起第三十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日實(shí)例美國NIH發(fā)生Qfever(Coxiellaburnetii)實(shí)驗(yàn)室感染

153人發(fā)病，其中1人死亡1998年，國內(nèi)某高校操作不規(guī)范：學(xué)生未戴手套進(jìn)行大鼠試驗(yàn)并被大鼠咬傷，導(dǎo)致9人感染流行性出血熱第三十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日實(shí)例臺(tái)灣實(shí)驗(yàn)人員感染非典病毒事故

2003年12月：實(shí)驗(yàn)人員在P4實(shí)驗(yàn)室因清理病毒廢棄物操作疏忽而感染中國實(shí)驗(yàn)人員感染非典病毒事故

2004年4月：中國某病毒所實(shí)驗(yàn)人員違規(guī)將未完全滅活的sars病毒從P3實(shí)驗(yàn)室?guī)С鲋疗胀▽?shí)驗(yàn)室，導(dǎo)致腹瀉病毒室兩名研究生感染sars病毒第三十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日儲(chǔ)存：專門放置生物廢棄物的容器滅活：所有生物廢棄物必須滅活后丟棄，如高壓滅活等運(yùn)輸：出實(shí)驗(yàn)室經(jīng)滅活的棄物必須使用專用密閉防漏的容器運(yùn)輸廢物處理第三十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日高壓蒸氣滅菌（autoclave）

-方法：121℃，15psi，15－40min-適合所有污染物的滅菌紫外線照射滅菌：空氣、物體表面殺菌

-無菌室或污染區(qū)域照射，至少30min滅菌與消毒第三十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日

70～75%Ethanol

－皮膚、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面的污染

次氯酸鈉(漂白劑，1-20%稀釋液)

－臺(tái)面污染，玻璃器皿等滅菌滅菌與消毒第三十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)室入口：生物危險(xiǎn)標(biāo)志、生物安全級(jí)別、負(fù)責(zé)人姓名和電話、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的特殊要求等禁止非工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室使用專用的防護(hù)性外衣－不得穿防護(hù)衣到非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域－防護(hù)衣在指定區(qū)域洗滌，不得帶回家洗滌管理制度第四十頁，共六十一頁，2022年，8月28日常用儀器與玻璃器皿

－正確使用與安全防護(hù)第四十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日低速、高速、超速離心機(jī)紫外透射反射分析儀、分光光度計(jì)電泳相關(guān)設(shè)備、各種PCR儀、酶標(biāo)儀凝膠成像儀、流式細(xì)胞儀、化學(xué)發(fā)光儀高壓蒸汽滅菌器（鍋）電熱干燥箱（烘箱）、微波爐等常用儀器設(shè)備第四十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日儀器使用安全儀器使用者必須認(rèn)真地閱讀操作規(guī)程，嚴(yán)格按照“儀器操作規(guī)程”進(jìn)行操作。遇到儀器發(fā)生故障，立即向管理人員報(bào)告，不得擅自處理。按操作規(guī)程使用水、電。發(fā)現(xiàn)安全隱患應(yīng)立即報(bào)告，及時(shí)處理。離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)應(yīng)檢查儀器、水、電、門、窗是否關(guān)好，夏季應(yīng)檢查空調(diào)是否關(guān)閉。在進(jìn)行加熱、加壓、蒸餾等操作時(shí)，操作人員不得隨意離開現(xiàn)場,若因故須暫時(shí)離開，必須委托他人照看或關(guān)閉電源。第四十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日離心機(jī)：離心機(jī)需放置于平穩(wěn)、牢固的地方遠(yuǎn)離酸堿等腐蝕性試劑樣品離心前必須進(jìn)行平衡離心樣品對(duì)稱放置離心前務(wù)必檢查轉(zhuǎn)子是否掛好低溫離心機(jī)使用后，切勿關(guān)蓋長期放置！常用儀器的正確使用第四十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日常用儀器的正確使用防霧氣外漏氣溶膠：懸浮于氣體介質(zhì)中的固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成的相對(duì)穩(wěn)定的分散體系微生物氣溶膠，粉塵氣溶膠粒徑:0.001—100um均漿機(jī)、超聲波破碎儀等易產(chǎn)生氣溶膠第四十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日蒸氣高壓滅菌鍋：使用前檢查是否有蒸餾水（經(jīng)常更換,預(yù)防長菌、水中污染物堵塞，燒壞加熱板）以對(duì)稱方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，旋緊蓋子，務(wù)必注意放氣閥讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí)，打開排氣閥,開蓋隔離操作！常用儀器的正確使用第四十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日紫外投射儀：檢查經(jīng)EB染色后的凝膠必需戴手套操作，盡量避免儀器外部污染如有條件，可戴防護(hù)眼睛不可長時(shí)間開紫外燈常用儀器的正確使用第四十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日如需面對(duì)UV光時(shí)，請(qǐng)戴安全眼鏡(普通玻璃鏡片亦可)。無菌室請(qǐng)?jiān)谌肟谔帢?biāo)示UV光是否在使用中。請(qǐng)先確定UV光關(guān)閉后才進(jìn)入無菌室第四十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日烘箱：不可烘烤可燃物質(zhì)：如濾紙、棉花等烘箱內(nèi)器皿不能過多：保證箱內(nèi)的空氣對(duì)流使溫控器正常工作有異味或冒煙時(shí)：－不能立即打開烘箱門，避免涌入空氣助燃－迅速切斷電源，滅火器備用常用儀器的正確使用第四十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日冰箱：常用儀器的正確使用不可存放食品、飲料不可存放含大量有機(jī)溶劑的樣品第五十頁，共六十一頁，2022年，8月28日搖菌、篩選克隆后的器皿、培養(yǎng)瓶浸泡于漂白水滅菌后→清洗→高壓滅菌污染過病毒、傳染病患者的血樣的容器高壓滅菌（或其他方法）→清洗污染放射性同位素等物質(zhì)的容器特殊試劑處理后→清洗玻璃器皿的洗滌與使用第五十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日量筒－不能貯存濃酸、濃堿－不能加熱血清瓶、試劑瓶－可高壓滅菌、烘干(松旋瓶蓋)抽濾瓶－非耐熱容器，不可直火加熱玻璃器皿的正確使用第五十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日玻璃器皿的正確使用燒杯、三角燒瓶：耐熱容器，可用于微波爐加熱直火加熱時(shí)應(yīng)墊石棉網(wǎng)加熱時(shí)內(nèi)容物不得超過容積的2/3第五十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日意外事件的防范與處理第五十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日意外事件處理

－發(fā)生可控制的火災(zāi)時(shí)1、使用附近的滅火器

：

a、揭開環(huán)狀保險(xiǎn)栓。

b、擠壓杠桿。

c、將噴嘴對(duì)火苗底部。2、若是衣服著火，用滅火毯掩蓋它，以達(dá)到窒息火苗的目的。3、若是電線走火，應(yīng)趕快關(guān)閉電源。4、迅速向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人報(bào)告。

第五十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日意外事件處理

－發(fā)生無法控制的火災(zāi)時(shí)1、迅速將人員、物資撤離