臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)：3 凝集反應(yīng)

第五章凝集反應(yīng)和沉淀反應(yīng)

（P37）凝集反應(yīng)(agglutinationreaction)概念：

細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原懸液加入相應(yīng)抗體，在電解質(zhì)存在下，兩者特異性結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。Ag凝集原agglutinogenAb

凝集素agglutinin顆粒性抗原：光鏡下可見，肉眼觀呈渾濁懸液，如細(xì)菌、RBC等?？扇苄钥乖汗忡R無形態(tài)，肉眼觀呈澄清透明，如血清蛋白溶液、多糖抗原等。凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中為使抗原抗體比例（分子數(shù)量）恰當(dāng)，應(yīng)稀釋Ab凝集反應(yīng)分類：

直接凝集反應(yīng)

directagglutination

間接凝集反應(yīng)

indirectagglutinationorpassiveagglutination一.直接凝集反應(yīng)（directagglutination):

細(xì)菌、螺旋體、細(xì)胞等顆粒性抗原（抗原是細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)）在適當(dāng)電解質(zhì)參與下，直接與相應(yīng)抗體結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。直接凝集反應(yīng)分類：（一）玻片凝集試驗(yàn)用已知抗體檢測未知抗原

玻片凝集試驗(yàn)于玻片上先加已知抗體，再加入待測物（未知抗原？），混勻。如發(fā)生凝聚，說明待測物中含有與該抗體相對應(yīng)的抗原

定性試驗(yàn)

用途：

ABO血型鑒定菌種鑒定（二）試管凝集試驗(yàn)

用已知抗原檢測未知抗體的效價(jià)

屬半定量試驗(yàn)

12345678910試管凝集試驗(yàn)方法：1~9號試管分別加不同稀釋度待檢血清（容量相同，Ab），10號加NS（對照），各管再加已知定量（濃度、容量一樣）的顆粒性Ag。結(jié)果：以出現(xiàn)明顯凝集的血清最高稀釋度（即可以判為++者）作為該血清（Ab）的凝集效價(jià)。用途：病原微生物感染的免疫學(xué)診斷

1.肥達(dá)氏反應(yīng)(Widaltest)-診斷傷寒

2.外斐氏試驗(yàn)(Weil-Felixtest)-診斷斑疹傷寒二.間接凝集反應(yīng)(indirectagglutinationorpassiveagglutination)

將可溶性抗原或抗體吸附在某種顆粒性載體(carrier)微球上，使之成為顆粒性抗原或抗體，然后再與相應(yīng)的抗體或抗原結(jié)合，出現(xiàn)載體微球的凝集現(xiàn)象（一）載體要求與種類要求：顆粒大小均勻一致不干預(yù)免疫反應(yīng)

常用載體種類：紅細(xì)胞（綿羊、家兔、人O型)活性炭粒、明膠顆粒聚苯乙烯膠乳顆粒（人工合成高分子材料）等細(xì)菌

致敏微?；蛑旅纛w粒：吸附有抗原或抗體的載體顆粒間接凝集試驗(yàn)命名根據(jù)載體不同而命名

血凝試驗(yàn)（以RBC為載體）乳膠凝集試驗(yàn)（以膠乳顆粒為載體）（二）間接凝集試驗(yàn)的分類：1.正向間接凝集反應(yīng)原理：將已知的可溶性抗原吸附于顆粒性載體上，檢測未知抗體。反應(yīng)數(shù)min凝集為陽性。2.反向間接凝集反應(yīng)原理：將已知抗體吸附于顆粒性載體上，檢測未知抗原反向間接血凝試驗(yàn)結(jié)果判定3.間接凝集抑制反應(yīng)方法：待測樣本（可溶性Ag？）+已知Ab

→

+已知致敏Ag顆粒（已成為顆粒性Ag）→觀察是否有凝集現(xiàn)象凝集為陰性，說明標(biāo)本中無相應(yīng)Ag;不凝集為陽性，說明標(biāo)本中有相應(yīng)Ag如：用膠乳凝集抑制試驗(yàn)檢測尿液中絨毛膜促性腺激素（HCG）若用抗體致敏的載體及相應(yīng)的抗原來檢測待測標(biāo)本中的抗體，則稱反向間接凝集抑制反應(yīng)。4協(xié)同凝集反應(yīng)

（co-agglutination)原理：實(shí)質(zhì)為反向間接凝集反應(yīng)葡萄球菌A蛋白（StaphylococcusproteinA,SPA)能非特異地與IgG的Fc段結(jié)合,當(dāng)與特異性抗原相遇時(shí)，IgG的Fab段與抗原結(jié)合，出現(xiàn)金葡菌的凝集現(xiàn)象（屬特殊間接凝集試驗(yàn)）協(xié)同凝集試驗(yàn)

協(xié)同凝集試驗(yàn)實(shí)際是用已知抗體檢測未知抗原，可用于的細(xì)菌、病毒的直接檢測5

明膠凝集試驗(yàn)（gelatin-agglutination,GAT)屬正向間接凝集反應(yīng)方法：粉紅色明膠顆粒吸附病毒抗原（形成致敏Ag顆粒）+待測血清→觀察有無凝集現(xiàn)象。凝集為陽性，說明血清中含相應(yīng)的病毒Ab;

不凝集為陰性，說明無相應(yīng)Ab。用途：常用于抗HIV-1抗體及抗精子抗體的檢測（三）抗球蛋白參與的血凝試驗(yàn)1.直接coombs試驗(yàn)直接Coombs試驗(yàn)用于檢測已吸附于紅細(xì)胞表面的不完全抗體。不完全抗體，即能與抗原牢固結(jié)合，但因分子量較小，不能起到由于橋聯(lián)作用而形成的可見凝集現(xiàn)象。

將抗人球蛋白抗體試劑直接加入經(jīng)生理鹽水充分洗滌后的受檢紅細(xì)胞，室溫放置15min后，離心觀察結(jié)果。出現(xiàn)凝集為陽性，表明紅細(xì)胞表面已結(jié)合有不完全抗體。用途：常用于新生兒溶血癥、自身免疫性溶血性貧血和醫(yī)源性溶血性疾病的檢測。2.間接coombs試驗(yàn)間接Coombs試驗(yàn)用于檢測游離于血清中的不完全抗體。方法：待測血清標(biāo)本與具有相應(yīng)抗原特異性的紅細(xì)胞混合，再加入抗人球蛋白抗體，若出現(xiàn)可見的紅細(xì)胞凝集，證明待測血清中含有游離的不完全抗體用途：本試驗(yàn)多用于檢測母體Rh(D