臨床免疫學檢驗：3 凝集反應

第五章凝集反應和沉淀反應

（P37）凝集反應(agglutinationreaction)概念：

細菌、細胞等顆粒性抗原懸液加入相應抗體，在電解質(zhì)存在下，兩者特異性結合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。Ag凝集原agglutinogenAb

凝集素agglutinin顆粒性抗原：光鏡下可見，肉眼觀呈渾濁懸液，如細菌、RBC等?？扇苄钥乖汗忡R無形態(tài)，肉眼觀呈澄清透明，如血清蛋白溶液、多糖抗原等。凝集反應沉淀反應凝集反應實驗中為使抗原抗體比例（分子數(shù)量）恰當，應稀釋Ab凝集反應分類：

直接凝集反應

directagglutination

間接凝集反應

indirectagglutinationorpassiveagglutination一.直接凝集反應（directagglutination):

細菌、螺旋體、細胞等顆粒性抗原（抗原是細胞表面結構）在適當電解質(zhì)參與下，直接與相應抗體結合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。直接凝集反應分類：（一）玻片凝集試驗用已知抗體檢測未知抗原

玻片凝集試驗于玻片上先加已知抗體，再加入待測物（未知抗原？），混勻。如發(fā)生凝聚，說明待測物中含有與該抗體相對應的抗原

定性試驗

用途：

ABO血型鑒定菌種鑒定（二）試管凝集試驗

用已知抗原檢測未知抗體的效價

屬半定量試驗

12345678910試管凝集試驗方法：1~9號試管分別加不同稀釋度待檢血清（容量相同，Ab），10號加NS（對照），各管再加已知定量（濃度、容量一樣）的顆粒性Ag。結果：以出現(xiàn)明顯凝集的血清最高稀釋度（即可以判為++者）作為該血清（Ab）的凝集效價。用途：病原微生物感染的免疫學診斷

1.肥達氏反應(Widaltest)-診斷傷寒

2.外斐氏試驗(Weil-Felixtest)-診斷斑疹傷寒二.間接凝集反應(indirectagglutinationorpassiveagglutination)

將可溶性抗原或抗體吸附在某種顆粒性載體(carrier)微球上，使之成為顆粒性抗原或抗體，然后再與相應的抗體或抗原結合，出現(xiàn)載體微球的凝集現(xiàn)象（一）載體要求與種類要求：顆粒大小均勻一致不干預免疫反應

常用載體種類：紅細胞（綿羊、家兔、人O型)活性炭粒、明膠顆粒聚苯乙烯膠乳顆粒（人工合成高分子材料）等細菌

致敏微粒或致敏顆粒：吸附有抗原或抗體的載體顆粒間接凝集試驗命名根據(jù)載體不同而命名

血凝試驗（以RBC為載體）乳膠凝集試驗（以膠乳顆粒為載體）（二）間接凝集試驗的分類：1.正向間接凝集反應原理：將已知的可溶性抗原吸附于顆粒性載體上，檢測未知抗體。反應數(shù)min凝集為陽性。2.反向間接凝集反應原理：將已知抗體吸附于顆粒性載體上，檢測未知抗原反向間接血凝試驗結果判定3.間接凝集抑制反應方法：待測樣本（可溶性Ag？）+已知Ab

→

+已知致敏Ag顆粒（已成為顆粒性Ag）→觀察是否有凝集現(xiàn)象凝集為陰性，說明標本中無相應Ag;不凝集為陽性，說明標本中有相應Ag如：用膠乳凝集抑制試驗檢測尿液中絨毛膜促性腺激素（HCG）若用抗體致敏的載體及相應的抗原來檢測待測標本中的抗體，則稱反向間接凝集抑制反應。4協(xié)同凝集反應

（co-agglutination)原理：實質(zhì)為反向間接凝集反應葡萄球菌A蛋白（StaphylococcusproteinA,SPA)能非特異地與IgG的Fc段結合,當與特異性抗原相遇時，IgG的Fab段與抗原結合，出現(xiàn)金葡菌的凝集現(xiàn)象（屬特殊間接凝集試驗）協(xié)同凝集試驗

協(xié)同凝集試驗實際是用已知抗體檢測未知抗原，可用于的細菌、病毒的直接檢測5

明膠凝集試驗（gelatin-agglutination,GAT)屬正向間接凝集反應方法：粉紅色明膠顆粒吸附病毒抗原（形成致敏Ag顆粒）+待測血清→觀察有無凝集現(xiàn)象。凝集為陽性，說明血清中含相應的病毒Ab;

不凝集為陰性，說明無相應Ab。用途：常用于抗HIV-1抗體及抗精子抗體的檢測（三）抗球蛋白參與的血凝試驗1.直接coombs試驗直接Coombs試驗用于檢測已吸附于紅細胞表面的不完全抗體。不完全抗體，即能與抗原牢固結合，但因分子量較小，不能起到由于橋聯(lián)作用而形成的可見凝集現(xiàn)象。

將抗人球蛋白抗體試劑直接加入經(jīng)生理鹽水充分洗滌后的受檢紅細胞，室溫放置15min后，離心觀察結果。出現(xiàn)凝集為陽性，表明紅細胞表面已結合有不完全抗體。用途：常用于新生兒溶血癥、自身免疫性溶血性貧血和醫(yī)源性溶血性疾病的檢測。2.間接coombs試驗間接Coombs試驗用于檢測游離于血清中的不完全抗體。方法：待測血清標本與具有相應抗原特異性的紅細胞混合，再加入抗人球蛋白抗體，若出現(xiàn)可見的紅細胞凝集，證明待測血清中含有游離的不完全抗體用途：本試驗多用于檢測母體Rh(D