臨床輸血學(xué)檢驗(yàn)(技術(shù))：6血小板血型系統(tǒng)及檢測(cè)技術(shù)

第五章血小板血型系統(tǒng)重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院血小板血小板是血液中的有形成分之一，是血細(xì)胞中的一種。平均直徑只有3.1μm,體積4.0～7.6μm3。由巨核細(xì)胞脫落的胞質(zhì)構(gòu)成，無細(xì)胞核，表面覆有細(xì)胞膜。它可以變形，在靜止?fàn)顟B(tài)下，呈兩面凸的圓盤狀。血小板只見于哺乳動(dòng)物體內(nèi)。血小板的功能止血功能：在小血管破裂處，血小板聚集成血栓，堵住破裂口，并釋放腎上腺素、5-羥色胺等具有收縮血管作用的物質(zhì)，是促進(jìn)血液凝固的重要因子之一。營(yíng)養(yǎng)和支持毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞：如果血小板數(shù)量顯著減少或功能有障礙，都會(huì)導(dǎo)致出血傾向。血小板表面具有復(fù)雜的血型抗原系統(tǒng)

血小板血型系統(tǒng)抗原

血小板表面具有復(fù)雜的抗原系統(tǒng)，由遺傳決定。分為兩大類:1.血小板相關(guān)性抗原（platelet-associatedantigen）

與白細(xì)胞共有的抗原有HLA

與紅細(xì)胞共有的抗原有ABO等2.血小板特異性抗原（platelet-specificantigen）

血小板血型抗原研究的重要性

血小板具有最復(fù)雜的血型抗原系統(tǒng),由于其表面的抗原眾多且復(fù)雜,因此反復(fù)大量輸注血小板的患者產(chǎn)生血小板同種抗體的頻率比紅細(xì)胞產(chǎn)生同種抗體的頻率高幾十倍。檢測(cè)血小板血型抗體種類,交叉配型，從而選擇血小板血型相同的血小板進(jìn)行輸注是解決血小板輸注無效的較好方法。

第一節(jié)血小板血型抗原P83

定義：用同種免疫抗體檢測(cè)出的血小板表面抗原。分類：1.血小板非特異性抗原（HLA抗原、ABO抗原）2.血小板特異性抗原（HPA）（一）血小板非特異性抗原

1954年發(fā)現(xiàn)，血小板表面存在的與其它細(xì)胞和組織共有的抗原。1.血小板上的紅細(xì)胞血型抗原血小板表面存在ABH、Lewis、I、P等紅細(xì)胞血型系統(tǒng)抗原但無Rh、Duffy、Kell等紅細(xì)胞血型系統(tǒng)抗原。

血小板上紅細(xì)胞血型抗原的來源1.血小板上的ABH抗原是從血漿中吸附的。2.血小板表面的ABH血型抗原是血小板膜糖蛋白（glycoprotein，GP）本身所表達(dá)的，如GPIIb、GPIIIa等。部分非O型個(gè)體血清中的糖基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)水平較高，血小板膜上含有極高水平的A/B物質(zhì)，這也就是臨床出現(xiàn)血小板輸注無效或新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜的主要原因之一。ABO血型同型輸注血小板目前臨床血小板輸血推薦ABO血型同型輸注。ABO血型不相合的血小板輸注，更容易產(chǎn)生HLA抗體和HPA抗體。ABO血型非配合輸注血小板A/B型血小板輸注給O型患者：

ABO主側(cè)不合：受血者體內(nèi)的抗A或抗B抗體與輸入的血小板表面的A/B抗原相互作用，導(dǎo)致血小板破壞或壽命縮短；O型血小板輸注給A/B型患者：ABO次側(cè)不合：供者血液中的ABO抗體與受者體內(nèi)可溶性的ABO抗原物質(zhì)形成復(fù)合物，被血小板膜上的Fc受體和補(bǔ)體受體吸附，再被單核-巨噬細(xì)胞吞噬破壞。2.血小板上的白細(xì)胞抗原系統(tǒng)存在：HLA-A、HLA-B和HLA-C位點(diǎn)等HLAⅠ類抗原無：HLA-II類分子(DP,DQ,DR)來源：一般情況，血小板表面的HLA抗原大部分為內(nèi)源生成的血小板膜蛋白，小部分是從血漿中吸附的。（二）血小板特異性抗原血小板特異性抗原，又稱人類血小板抗原（humanplateletantigen，HPA），是血小板膜糖蛋白攜帶的一類特異性抗原，由特定的抗原決定簇組成。HPA并非血小板所特有，HPA也分布于其他細(xì)胞上，如HPA-1和HPA-4存在于內(nèi)皮細(xì)胞。HPAHPA：humanplateletantigen,是位于血小板膜糖蛋白(glycoprotein，GP)上的抗原表位。組成：GPIa,GPIb,IIb,IIIa,CD109。特點(diǎn)：具有獨(dú)特的遺傳多態(tài)性，與同種免疫有關(guān)。HPA的命名2003年國際輸血協(xié)會(huì)（ISBT）和國際血栓與止血協(xié)會(huì)（ISTH）建立的血小板命名委員會(huì)（PNC）。

P85，表5-1HPA的命名原則P37

系統(tǒng)前以HPA開頭,33種血小板同種特異性抗原。6大系統(tǒng)：HPA-1,2,3,4,5,HPA-15.以發(fā)現(xiàn)順序按數(shù)字編號(hào).對(duì)偶抗原用a,b，a表示基因頻率大于50％的等位基因。b表示基因頻率小于50％的等位基因。暫未發(fā)現(xiàn)對(duì)偶抗原的，用等位基因數(shù)字后面加后綴w.如：HPA-6bw。舉例：HPA-1HPA-1系統(tǒng)：最早發(fā)現(xiàn)的血小板同種特異性抗原，位于GPⅢa分子上，HPAcDNA鏈上的T176C出現(xiàn)多態(tài)性，導(dǎo)致GPⅢa分子第33位氨基酸Leu33Pro的變化，決定了HPA-la/HPA-lb的特異性。HPA-l系統(tǒng)抗原可以誘導(dǎo)產(chǎn)生HPA-l特異性抗體，導(dǎo)致輸血后紫癜和新生兒同種血小板減少性紫癜等。第二節(jié)

血小板血型系統(tǒng)抗體血小板抗原HLA和HPA均具有多態(tài)性，可介導(dǎo)同種抗體的產(chǎn)生，如HLA抗體、血小板特異性抗體和血小板自身抗體等，引發(fā)同種免疫性血小板減少。HLA抗體：79.9%，HLA抗體+HPA抗體：17.6%HPA抗體：2.7%血小板抗體同種抗體：由輸血或妊娠等同種免疫產(chǎn)生，多為IgG型。這些抗體可以造成輸血后血小板減少或降低輸入血小板的存活。自身抗體：多在特發(fā)性血小板減少性紫癜中檢出，也多為IgG型。這種抗體可以通過胎盤使新生兒發(fā)生一過性免疫性血小板減少癥。

（一）HLA抗體HLA抗原的同種免疫：血小板上HLA的同種免疫與輸血史、妊娠史、輸注血液成分的類型和劑量、患者的疾病情況等有關(guān)。反復(fù)輸血或多次妊娠是引起血小板HLA同種免疫的主要原因。（二）血小板特異性抗體HPA是血小板表面所具有的血小板獨(dú)特性抗原，具有多態(tài)性。受血者因輸注與之不配合的血小板，或因多次妊娠等免疫刺激，機(jī)體可能會(huì)產(chǎn)生抗血小板抗體（如HPA-1a、HPA-2b、HPA-3a、HPA-4a抗體等。）（三）血小板自身抗體

由于患者體內(nèi)自身免疫系統(tǒng)失調(diào)，機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)自身血小板抗原（如HPA、HLA等）的抗體，多為IgG或IgA型抗體，可引起特發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）。

第三節(jié)血小板血型的臨床應(yīng)用一、血小板輸注無效（PTR）二、輸血后紫癜(PTP)三、新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜(NAITP)四、特發(fā)性血小板減少性紫癜－ITP一、血小板輸注無效（PTR）P87PTR：platelettransfusionrefractoriness定義：指患者在連續(xù)2次接受足夠劑量的的血小板輸注后，血小板計(jì)數(shù)未見明顯提高，臨床出血表現(xiàn)未見明顯改善。判定血小板輸注效果1.校正后的血小板上升數(shù)（correctedcountincrement，CCI）輸血后1小時(shí)CCI<7.5，24小時(shí)CCI<4.5說明血小板輸注無效。2.血小板回收率

（percentageplateletrecovery，PPR）輸血后24小時(shí)PPR<20%判定為血小板輸注無效產(chǎn)生PTR的原因

(1)免疫性同種抗體(HLA占80%

、HPA、ABO)或自身抗體(ITP等)導(dǎo)致血小板破壞或血小板壽命顯著縮短。(2)非免疫性血小板消耗，血小板本身質(zhì)量欠佳，多發(fā)生于脾腫大、發(fā)熱、感染、出血和DIC患者中。非免疫性因素逐漸成為血小板輸注無效的主要原因。HLA同種抗體引起的PTRHLA抗原性較強(qiáng)多次輸血HLA抗體輸注隨機(jī)血小板（血小板膜上存在的HLA-A、B抗原）抗體與輸入的血小板起免疫反應(yīng)血小板破壞血小板輸注無效。

HLA致敏是最常見的血小板輸注無效的免疫因素。血小板抗體引起的PTR反復(fù)輸注血小板血小板同種抗體再次輸注血小板血小板抗原抗體的免疫反應(yīng)血小板迅速破壞，計(jì)數(shù)不升高反而下降血小板輸注無效。

免疫/非免疫性因素引起的PTR二者的區(qū)別：

同種異體免疫：輸入的血小板很快破壞，輸注后1h和24h均不見血小板計(jì)數(shù)增高。

非免疫性因素：輸注后1h血小板計(jì)數(shù)增高，但是24h計(jì)數(shù)不增高或受影響。

二、輸血后血小板減少性紫癜（PTP）PTP：post-transfusionpurpura，P89輸血后血小板減少性紫癜是由于患者多次妊娠或輸入不相容的血小板/其他血液成分而產(chǎn)生血小板抗體，破壞輸入的和/或自身的血小板，引起急性、暫時(shí)性血小板減少的臨床綜合征。PTP多發(fā)生在有妊娠史和/或輸血史的女性患者。一般在輸紅細(xì)胞、血漿或血小板后5-10天左右突然發(fā)生。預(yù)防PTP和PTR的發(fā)生血液中心：1.應(yīng)建立供血者HLA、HPA資料庫。2.應(yīng)紫外線照射血小板制品；3.應(yīng)采用白細(xì)胞濾器減少血小板制品中的白細(xì)胞含量。

輸血科：1.血小板交叉配血實(shí)驗(yàn)2.配合型血小板輸注：選用ABO血型同型的血小板RhD陰性育齡婦女最好選用RhD陰性供者的濃縮血小板HPA與HLA血型配合性的血小板選擇HLA-1類抗原與患者相合的供者單采血小板臨床治療：血漿置換靜脈注射大量免疫球蛋白較大劑量的皮質(zhì)激素短程治療三、新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜NAITP：neonatalalloimmunethrombocytopenia概要：胎兒和母親的血小板血型不合，使母親產(chǎn)生同種抗體，通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，與血小板反應(yīng)而導(dǎo)致胎兒或新生兒的血小板減少癥，其發(fā)病機(jī)制類似新生兒溶血病。原因：大多由于血小板特異性抗體所導(dǎo)致，如：HPA-1a抗體，HPA-3a、HPA-4a抗體。HLA和ABO血型不合一般不會(huì)引起NAITP。診斷：檢測(cè)母親血清中的血小板抗體，患兒血小板表面是否結(jié)合血小板抗體。治療：給患兒輸入與母體中同種抗體無反應(yīng)性的血小板，或者換血。預(yù)防：給母親作血漿置換。四、特發(fā)性血小板減少性紫癜－ITPITP：idiopathicthrombocytopenicpurpuraITP是一種自身免疫性疾病，其特征為單核-巨噬系統(tǒng)破壞自身抗體覆蓋的血小板導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)的降低。血小板自身抗體可游離于血清中以及吸附在血小板表面上，它不僅能與自身和同種血小板結(jié)合，而且也可與巨核細(xì)胞結(jié)合，因此，不僅引起血小板破壞，也影響了血小板的生成。是免疫性外周血小板破壞增加而引起的最常見的出血性疾病。ITP原因：患者體內(nèi)存在抗血小板的自身抗體，破壞血小板，表現(xiàn)為出血。檢測(cè)：PAIgG治療：皮激素等免疫抑制劑，脾切除，血漿置換以及注射免疫球蛋白，降低血小板抗體效價(jià)。PAIgG的產(chǎn)生血小板血型檢測(cè)的臨床意義1.提高血小板輸注療效：選擇與患者血小板和HLA相配的供血者，可提高輸注濃縮血小板效果。

2.診斷新生兒同種免疫血小板減少性紫癜。

3.診斷特發(fā)性血小板減少性紫癜。

第六章血小板血型檢測(cè)技術(shù)P91意義：在現(xiàn)代臨床輸血工作中，為了能給新生兒同種免疫血小板減少癥、輸血后紫癜以及血小板輸注無效等患者提供正確、及時(shí)的診斷和治療，須對(duì)病人和獻(xiàn)血者進(jìn)行血小板特異性抗原的準(zhǔn)確分型。由于血小板血型鑒定的實(shí)驗(yàn)方法相對(duì)復(fù)雜,檢測(cè)費(fèi)用相對(duì)較高,目前尚未廣泛應(yīng)用于臨床。血小板血型相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)血清學(xué)檢測(cè)方法：有了很大進(jìn)展分子生物學(xué)技術(shù)：開始應(yīng)用于血小板血型分型。檢測(cè)血小板上的ABO抗原：借助紅細(xì)胞檢測(cè)檢測(cè)血小板上的HLA抗原檢測(cè)血小板上的HPA抗原由于方法學(xué)和血小板譜抗原等問題，單獨(dú)血小板特異性抗體的檢出非常罕見，血小板特異性抗體一般與HLA抗體共存。為預(yù)防和減少血小板輸注無效和輸血后紫癜的發(fā)生，最好是對(duì)患者進(jìn)行血小板抗體篩選。一、單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗(yàn)

MAIPA：monoclonalantibody-specificimmobilizationofplateletantigensassay評(píng)價(jià)：敏感度高、特異性較好。是檢測(cè)和鑒定血小板特異性抗體應(yīng)用最廣泛的方法。MAIPA原理MAIPA的應(yīng)用1.可靈敏地檢測(cè)血小板特異性抗體。2.血小板交叉配血試驗(yàn)二、簡(jiǎn)易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)實(shí)驗(yàn)

SEPSA：simplifedsensitizederythrocyteplateletserologyassay1.血小板抗體篩查（HLA、HPA）2.血小板交叉配血試驗(yàn)：為患者篩選相容性的血小板或血小板供者S