GB/T 22287-2008貝類中甲型肝炎病毒檢測方法普通RT-PCR方法和實時熒光RT-PCR方法

犐犆犛６７．１００

犡０４

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２２２８７—２００８

貝類中甲型肝炎病毒檢測方法

普通犚犜—犘犆犚方法和

實時熒光犚犜—犘犆犚方法

犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犺犲狆犪狋犻狋犻狊犪狏犻狉狌狊犻狀狊犺犲犾犾犳犻狊犺—

犆狅狀狋犲狀狋犻狅狀犪犾犚犜—犘犆犚犪狀犱狉犲犪犾狋犻犿犲犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲犚犜—犘犆犚

２００８０８１２發(fā)布２００８１２０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

書

犌犅／犜２２２８７—２００８

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ為規(guī)范性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國江蘇出入境檢驗檢

疫局。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳廣全、饒紅、段洪安、馮騫、付溥博、張惠媛、汪琦、曾靜、張睿、李金華。

Ⅰ

書

犌犅／犜２２２８７—２００８

貝類中甲型肝炎病毒檢測方法

普通犚犜—犘犆犚方法和

實時熒光犚犜—犘犆犚方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了貝類中甲型肝炎病毒的普通ＲＴ—ＰＣＲ和熒光ＲＴ—ＰＣＲ檢測方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于貝類中甲型肝炎病毒核酸的檢測。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

ＧＢ／Ｔ６６８２分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法（ＧＢ／Ｔ６６８２—２００８，ＩＳＯ３６９６：１９８７，ＭＯＤ）

ＧＢ１９４８９實驗室生物安全通用要求

ＳＮ／Ｔ１１９３基因分析檢測實驗室技術(shù)要求

３術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

３．１

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀，犘犆犚

ＤＮＡ模板先經(jīng)高溫變性為單鏈，在適宜的溫度下和緩沖液中，兩條引物分別與模板ＤＮＡ兩條鏈

上的一段互補(bǔ)序列發(fā)生退火，接著在ＤＮＡ聚合酶的催化下以四種ｄＮＴＰ為底物，使退火引物得以延

伸，如此反復(fù)變性、退火和延伸，使位于兩段引物序列之間的ＤＮＡ片段呈幾何倍數(shù)擴(kuò)增。

３．２

反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)狉犲狏犲狉狊犲狋狉犪狀狊犮狉犻狆狋犻狅狀狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀，犚犜—犘犆犚

ＲＮＡ在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，適宜反應(yīng)條件下，被逆轉(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ，以ｃＤＮＡ作為模板進(jìn)行ＰＣＲ。

３．３

實時熒光犚犜—犘犆犚狉犲犪犾狋犻犿犲犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲犚犜—犘犆犚

實時熒光ＲＴ—ＰＣＲ方法是在常規(guī)ＲＴ—ＰＣＲ的基礎(chǔ)上，加入一條特異性的熒光探針。該探針為

一段寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒

光信號被淬滅基團(tuán)吸收；ＰＣＲ擴(kuò)增時，犜犪狇酶的５’３’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和

淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可以接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條ＤＮＡ鏈，就有一個