GB/T 22332-2008鴨病毒性腸炎診斷技術(shù)

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２２３３２—２００８

鴨病毒性腸炎診斷技術(shù)

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２００８０８２２發(fā)布２００８１２０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

書

犌犅／犜２２３３２—２００８

前言

本標(biāo)準(zhǔn)部分技術(shù)采用ＯＩＥ《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》（２００４）推薦的試驗方法，并把具體操作

程序予以細(xì)化。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)、中華人民共和國廣東出入境檢驗檢疫局。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：郭霄峰、廖明、洪潔心。

Ⅰ

書

犌犅／犜２２３３２—２００８

鴨病毒性腸炎診斷技術(shù)

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了鴨病毒性腸炎病毒（ＤＶＥＶ）分離和鑒定及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ＰＣＲ）試驗的診斷技術(shù)

要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于鴨病毒性腸炎的診斷。

２臨床癥狀和病理變化

家養(yǎng)的鴨和雛鴨從７日齡至成年均可感染發(fā)病。在易感鴨群，初始癥狀通常為突發(fā)持續(xù)性高死亡

現(xiàn)象，產(chǎn)蛋量明顯下降。由于感染禽的品種、年齡、性別以及病毒毒力的不同，暴發(fā)鴨病毒性腸炎

（ＤＶＥ）后臨床癥狀、剖檢病變有很大的差異。種鴨臨床癥狀為流淚、怕光、煩渴、缺乏食欲、共濟(jì)失調(diào)、

水樣腹瀉和流鼻液。通常病鴨羽毛蓬亂，肛門粘有污物。病鴨借助翅膀支撐方能保持平衡，整個外觀虛

弱、精神沉郁。但２周～７周齡鴨中損失比成鴨低，其癥狀為脫水、體重下降，喙呈藍(lán)色，肛門染有血跡。

剖檢時發(fā)現(xiàn)，死亡的鴨并不消瘦。性成熟的公鴨的陰莖可能脫垂。性成熟母禽的卵巢濾泡出血。

特征性大體病變以血管受損，帶有組織出血和體腔游離血液，消化道粘膜表面有環(huán)狀出血和白喉樣損

壞，淋巴樣器官受損，實質(zhì)器官呈退行性病變?yōu)樘卣鳌０咨本喌奶卣餍圆∽兪茄芗皟?nèi)臟器官損

傷，消化道上皮細(xì)胞出現(xiàn)嗜酸性核內(nèi)包涵體和胞漿內(nèi)包涵體。

３病毒分離

３．１材料準(zhǔn)備

３．１．１病料的采集：一般應(yīng)在感染初期或發(fā)病急性期從瀕死期禽或活禽采取。瀕死期禽采集肝、脾、腦

等組織樣品?；钋萦脺缇拿奘米油磕ㄐ怪城弧в蟹置谖锏拿奘米臃湃朊亢辽校保埃埃埃桑涨嗝?/p>

素，１０００μｇ鏈霉素，ｐＨ７．２～７．６的磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ）中。送檢病料應(yīng)置于５０％的甘油生理鹽

水中。

３．１．２病料的保存：采集的樣品若在４８ｈ內(nèi)處理，可于４℃保存；否則應(yīng)放－２０℃以下保存（－７０℃

貯存最好）。

３．１．３病料的處理：將棉拭子充分捻動、擰干后除去拭子。樣品液經(jīng)３０００ｒ／ｍｉｎ４℃離心３０ｍｉｎ，取

上清液作為接種材料。組織樣品先用ｐＨ７．２～７．６的ＰＢＳ制成５倍～１０倍乳劑，３０００ｒ／ｍｉｎ４℃離心

３０ｍｉｎ，取上清液作為接種材料。為防止細(xì)菌污染，可在樣品液中加入青霉素（１０００ＩＵ／ｍＬ），鏈霉素

（１０００μｇ／ｍＬ），卡那霉素（１０００μｇ／ｍＬ），３７℃溫箱中作用３０ｍｉｎ。進(jìn)行無菌檢驗。

３．１．４鴨胚：１０日～１１日齡的非ＤＶＥ疫苗免疫鴨胚。

３．２實驗操作

３．２．１胚胎接種：取經(jīng)處理并且無菌檢驗合格的樣品，以０．２ｍＬ／胚的量經(jīng)絨毛尿囊膜接種１０日～

１１日齡的非ＤＶＥ疫苗免疫的鴨胚，每個樣品接種４個～５個胚，于３８℃～３８．５℃恒溫箱中孵育。

７２ｈ前每天照胚１次～２次，以后每天照胚５次。棄去７２ｈ前