液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法(LC-MS)

1.高效液相色譜分析方法的建立2.高效液相色譜儀常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法3.制備型高效液相色譜技術(shù)4.高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS）1高效液相色譜儀常見(jiàn)問(wèn)題

及處理方法2吸濾頭單向閥柱塞密封圈線路過(guò)濾器手動(dòng)/自動(dòng)進(jìn)樣器檢測(cè)器泵系統(tǒng)3材料：不銹鋼燒結(jié)，孔徑10μm故障：堵塞表現(xiàn)：管路中不斷有氣泡生成措施：用5％～20％的稀硝酸，超聲波清洗，再用蒸餾水清洗注意點(diǎn)：吸濾頭拆下時(shí)不得將塑料管剪斷一、吸濾頭4二、高壓泵5單向閥結(jié)構(gòu)吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭拋光面透明塑料墊片寶石球流動(dòng)相單向閥原理吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭1.單向閥6故障1：寶石球粘附于墊片表現(xiàn)：泵無(wú)法吸液或排液，流路不通，柱壓低或沒(méi)有。措施：1）用針筒抽單向閥的出口以產(chǎn)生負(fù)壓，使寶石球與墊片分開(kāi)2）拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超聲波清洗故障2：寶石球或塑料墊片受污導(dǎo)致密封不好。表現(xiàn)：系統(tǒng)壓力波動(dòng)大措施：拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超聲波清洗。常見(jiàn)故障：7故障：密封圈磨損而導(dǎo)致密封不良現(xiàn)象：系統(tǒng)壓力波動(dòng)大或漏夜措施：更換密封圈注意點(diǎn)：更換密封圈拆卸泵頭前，柱塞桿復(fù)位（P－SET）2.柱塞密封圈流動(dòng)相泵頭清洗管路柱塞桿密封圈8三、手動(dòng)進(jìn)樣閥91.構(gòu)造及使用原理10故障1：轉(zhuǎn)子密封損壞現(xiàn)象：漏液原因：

a擰的太緊b樣品太臟（過(guò)濾不充分）c針頭損壞或未使用液相色譜專用注射器解決措施：更換轉(zhuǎn)子密封，并在使用時(shí)注意保養(yǎng)。故障2：載樣困難原因：定量環(huán)堵塞解決措施：清洗或更換定量環(huán)2.常見(jiàn)故障11樣品過(guò)濾：12故障：系統(tǒng)壓力過(guò)高、峰型變差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留時(shí)間改變等。解決措施：清洗、填補(bǔ)、更換正相柱清洗溶劑：

正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇等反相柱清洗溶劑：：

甲醇、乙腈、氯仿、異丙醇、0.05mol/L稀硫酸注意：應(yīng)排除操作不當(dāng)引起的假象。四、色譜柱13色譜柱的維護(hù)1.在使用新柱之前，最好用強(qiáng)洗脫溶劑在低流量下(0.2-0.3ml/min)沖洗30min，長(zhǎng)時(shí)間未用的分析柱也要同樣處理。2.定期使用強(qiáng)洗脫溶劑沖洗柱子。3.使用緩沖鹽作為流動(dòng)相后，要先用水（含有少量甲醇5~10%）沖洗，再用有機(jī)溶劑（甲醇）沖洗。4.凈化樣品。5.分離條件優(yōu)化（防止鬼峰出現(xiàn)）。6.不使用時(shí)，兩頭要蓋上蓋子，避免固定相干枯。7.使用預(yù)柱。8.避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化（梯度洗脫）9、避免壓力脈沖的劇烈變化14肩峰或分叉峰產(chǎn)生的原因：1.柱子劣化（柱頭處產(chǎn)生不均勻的空隙）2.樣品變化（生成氧化物、分解物等）判斷標(biāo)準(zhǔn)：

所有的峰都產(chǎn)生有肩峰或分叉時(shí)則為柱子劣化。延長(zhǎng)柱壽命方法：（更新）

1、倒（反）沖柱2、換過(guò)濾片3、修補(bǔ)柱頭

15柱的補(bǔ)修填料的取出16恢復(fù)實(shí)例171.更換氘燈（紫外檢測(cè)器）

判斷氘燈能量：設(shè)定220nm波長(zhǎng)，檢查參比池能量，如能量低于800，需更換氘燈。（詳細(xì)參照說(shuō)明書(shū)）操作注意點(diǎn)：

不要用手直接接觸氘燈表面五、檢測(cè)器2.清潔樣品池表現(xiàn)：樣品池和參比池能量相差較大；檢查方法：不同的儀器有具體的檢查方法；措施：用針筒注入異丙醇，清洗樣品池；如污染嚴(yán)重，拆開(kāi)樣品池，將透鏡等放入異丙醇中超聲波清洗。181.溶劑的過(guò)濾濾膜類型：

聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽。醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶劑。

尼龍66濾膜：

適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可以用于強(qiáng)酸，不適用于二甲基甲酰胺。

再生纖維素濾膜：蛋白吸收低，適用于水溶性樣品和有機(jī)溶劑。六、其他問(wèn)題191）泵中氣泡使液流波動(dòng)，改變保留時(shí)間和峰面積；2）柱中氣泡使流動(dòng)相繞流，峰變形；3）氣泡過(guò)多可使泵壓力不穩(wěn)甚至停止工作；4）檢測(cè)器中的氣泡產(chǎn)生基線波動(dòng)，①示差折光檢測(cè)器——使折射率變化②UV檢測(cè)器（200nm以下）——溶解氧氣有吸收③熒光檢測(cè)器——溶解氧氣有熒光猝滅作用2.脫氣：除去流動(dòng)相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡。氣泡對(duì)測(cè)定的影響：脫氣的方法1.超聲波脫氣法2.使用氟樹(shù)脂膜的減壓脫氣法20氟樹(shù)脂膜真空室往送液泵真空泵控制器流動(dòng)相使用氟樹(shù)脂膜的減壓脫氣法213.緩沖液選擇緩沖液的步驟1、確定最佳分離狀態(tài)時(shí)的流動(dòng)相pH；2、選擇具有與流動(dòng)相的pH相近的pKa的緩沖液（即使?jié)舛认∫簿哂休^強(qiáng)的緩沖能力）；3、確認(rèn)檢測(cè)波長(zhǎng)下緩沖液是否有較大的吸