激素和外植體對(duì)亞麻愈傷組織形成的影響

激素和外植體對(duì)亞麻愈傷組織形成的影響AffectionofHormonesandExplantstoCallusFormationofFlax

天津農(nóng)學(xué)院學(xué)生姓名：侯鐵軍系別：園藝系

專(zhuān)業(yè)班級(jí)：06級(jí)園林2班contents1.前言2.實(shí)驗(yàn)材料與方法3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析4.討論5.結(jié)論1.前言1.1亞麻的科屬、形態(tài)特征以及生長(zhǎng)習(xí)性

亞麻的科屬及簡(jiǎn)介

亞麻（Linum

grandiflora）屬于亞麻科亞麻屬植物，別名花亞麻、大花亞麻。亞麻是古老的韌皮纖維作物和油料作物。亞麻起源于近東、地中海沿岸。早在5000多年前的新石器時(shí)代，瑞士湖棲居民和古代埃及人，已經(jīng)栽培亞麻并用其纖維紡織衣料，埃及各地的“木乃伊”也是用亞麻布包蓋的。油用型亞麻又叫做胡麻。胡麻在我國(guó)至少有1000年栽培歷史。纖維型亞麻是1906年從日本引入的。中國(guó)主要分布在黑龍江和吉林兩省。亞麻喜涼爽、濕潤(rùn)的氣候。亞麻纖維具有拉力強(qiáng)、柔軟、細(xì)度好、導(dǎo)電弱、吸水散水快、膨脹率大等特點(diǎn)，可紡高支紗，制高級(jí)衣料。1.1亞麻的科屬、形態(tài)特征以及生長(zhǎng)習(xí)性

亞麻的形態(tài)特征

亞麻為一年生草本；高30－l00厘米。直根較細(xì)，淡黃色。莖直立，圓柱形，上部分枝，無(wú)毛。葉互生，條形或條狀披針形，長(zhǎng)1．8—4厘米，寬2—5毫米，先端銳尖，基部漸狹，全緣，有3脈，無(wú)葉柄?；ㄉ谇o頂端或上部葉腋處，成疏松聚傘花序；萼片5，卵形或卵狀披針形，長(zhǎng)5—7毫米，先端突尖，具3條脈，邊緣膜質(zhì)，無(wú)腺點(diǎn)；花瓣5，卵形或卵狀披針形，長(zhǎng)1一1．5厘米，藍(lán)色或藍(lán)紫色，稀有白色或紅紫色，早落；雄蕊5，花絲基部合生，退化雄蕊5，僅留齒狀痕跡，與雄蕊互生；子房上位5室，花柱5，分離，柱頭條形。蒴果球形，直徑6－8毫米，淡黃色，頂端5瓣裂；種子通常l0，褐色，光滑，呈矩圓形，扁平。

1.1亞麻的科屬、形態(tài)特征以及生長(zhǎng)習(xí)性

亞麻的生態(tài)特性亞麻喜涼爽濕潤(rùn)氣候。耐寒，怕高溫。種子發(fā)芽最低溫度1-3℃，最適宜溫度20-25℃；營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)適宜溫度11-18℃。土壤含水量達(dá)到田間最大持水量的70％-80％。生育期70-80d。以土層深厚、疏松肥沃、排水良好的微酸性或中性土壤栽培為宜，含鹽量在0.2%以下的堿性土壤亦能栽培。1.2亞麻的應(yīng)用價(jià)值

亞麻纖維亞麻種子亞麻種植1.3研究目的和意義

通過(guò)對(duì)亞麻的不同外植體在相同條件下進(jìn)行處理，觀察亞麻外植體形成愈傷組織的情況。同時(shí)在MS培養(yǎng)基上采用不同濃度比例的植物激素對(duì)選擇的外植體進(jìn)行誘導(dǎo)生根發(fā)芽，觀察外植體在何種激素濃度、激素比例下愈傷組織的分化最好，選擇最佳的亞麻愈傷組織培養(yǎng)配方。為大量的組培生產(chǎn)，通過(guò)愈傷組織進(jìn)行的再生體系的建立奠定基礎(chǔ)。

2.實(shí)驗(yàn)方法與材料

供試亞麻種子是由天津農(nóng)學(xué)院園藝系園林植物試驗(yàn)室提供。亞麻種子2.1實(shí)驗(yàn)材料2.2方法

無(wú)菌苗培養(yǎng)

不同激素處理和不同外植體愈傷組織的誘導(dǎo)

取亞麻種子，經(jīng)自來(lái)水沖洗后,用75%乙醇浸泡30S,0.1%HgCl2溶液或次氯酸表面滅菌,無(wú)菌水沖洗浸泡3～5次。然后接種在1/2MS培養(yǎng)基上萌發(fā),培養(yǎng)條件是:溫度25℃,光照12h/d,光照光強(qiáng)為1600～2000lx,取8日齡無(wú)菌苗進(jìn)行各種不同處理的組培試驗(yàn)。取預(yù)培養(yǎng)8日齡亞麻無(wú)菌苗的子葉、下胚軸等組織部位，用剪刀剪成1到3厘米小塊。分別接種到含有不同激素濃度（6-BA,IAA）的分化培養(yǎng)基上。附加3％蔗糖、0.7％瓊脂，調(diào)至pH5.8。將接種了的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)室，培養(yǎng)溫度控制在25±2℃，光照時(shí)間12h／d，光照強(qiáng)度2000Ix。觀察不同部位外植體誘導(dǎo)愈傷組織及形成。每處理5瓶（5次重復(fù)），每瓶接種外植體8塊。處理過(guò)程處理過(guò)程下一步3.1亞麻種子的消毒和污染率

獲得無(wú)菌苗是建立亞麻再生和轉(zhuǎn)化體系的第一步。結(jié)果表明，用HgCl2消毒種子5min時(shí)，污染率可控制在10%以下；消毒6min以上時(shí)雖然污染率降低，但亞麻的胚根及子葉隨著升汞濃度的增加而呈現(xiàn)出明顯的毒害現(xiàn)象。用2%的次氯酸鈉消毒亞麻種子20min污染率為20%。因而確定消毒亞麻種子的適宜時(shí)間為0.1%HgCl25min。

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析3.2不同外植體對(duì)愈傷組織形成的影響

外植體種類(lèi)愈傷組織質(zhì)地顏色愈傷塊大小子葉緊密綠較小下胚軸疏松淺綠較大表1不同外植體對(duì)亞麻愈傷組織形成的影響從表1可以看出子葉形成的愈傷組織質(zhì)地緊密，顏色為綠色，愈傷塊較小，愈傷組織數(shù)量較少。而下胚軸形成的愈傷組織質(zhì)地疏松，顏色為淺綠色，愈傷組織塊較大，愈傷組織數(shù)量較多。由于淺綠色和疏松的愈傷組織容易形成芽，所以，應(yīng)選擇下胚軸為亞麻愈傷組織形成的外植體。3.3不同激素濃度對(duì)亞麻愈傷組織形成的影響3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析處理培養(yǎng)基配方愈傷組織形成百分率%子葉下胚軸1MS+1mg/L6-BA+0.05mg/LIAA401002MS+2mg/L6-BA+0.05mg/LIAA68.887.83MS+3mg/L6-BA+0.05mg/LIAA67.11004MS+4mg/L6-BA+0.05mg/LIAA87.590表2不同激素濃度對(duì)亞麻愈傷組織形成的影響

3.3不同激素濃度對(duì)亞麻愈傷組織形成的影響3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析圖1不同細(xì)胞分裂素濃度對(duì)亞麻子葉愈傷組織形成的影響3.3不同激素濃度對(duì)亞麻愈傷組織形成的影響3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

表2和圖1顯示，細(xì)胞分裂素濃度明顯影響子葉的愈傷組織形成。在6-BA濃度為1mg/L時(shí)，子葉愈傷組織形成百分率為40%；隨著激素濃度的增高，愈傷組織形成百分率也增加。當(dāng)在6-BA濃度為4mg/L時(shí)，子葉愈傷組織形成百分率達(dá)到最大，為87.5%。細(xì)胞分裂素濃度對(duì)下胚軸的愈傷組織形成影響較小。各濃度條件下，下胚軸形成的愈傷組織百分率均在88%以上（圖2）。所以，子葉為外植體時(shí)，誘導(dǎo)愈傷組織的最佳配方為MS+4mg/L6-BA+0.05mg/LIAA。以下胚軸為外植體時(shí)，1-4mg/L的6-BA均可用于誘導(dǎo)亞麻的愈傷組織分化。3.3不同激素濃度對(duì)亞麻愈傷組織形成的影響3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析圖2不同細(xì)胞分裂素濃度對(duì)亞麻下胚軸愈傷組織形成的影響

4.討論4.1亞麻外植體的無(wú)菌處理

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)不同材料對(duì)不同種類(lèi)的消毒劑敏感度不同。亞麻種子對(duì)升汞比較敏感而有的處理則對(duì)次氯酸敏感。

4.2誘導(dǎo)亞麻外植體的生長(zhǎng)與分化

本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)多次嘗試未能得到芽。主要是愈傷組織再生系統(tǒng)在離體培養(yǎng)中外植體的一部分細(xì)胞經(jīng)過(guò)脫分化和再分化的過(guò)程，加大了再生的難度。也可能是生長(zhǎng)素激素濃度偏低。

4.3亞麻的生根

本實(shí)驗(yàn)未能通過(guò)愈傷組織分化出根系。生根困難的可能原因是：①不同植物種生根難易對(duì)基因型有很強(qiáng)的依賴(lài)性。②培養(yǎng)基中的鹽離子濃度、糖濃度、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等都影響無(wú)菌苗生根。

③不同植物種適宜的光照、溫度等培養(yǎng)條件不同。5.結(jié)論

5.1最佳的亞麻種子滅菌方法是用75%酒精浸泡30s后，再用0.1%HgCl2處理5min，無(wú)菌水沖洗3-5次。5.2下胚軸為亞麻愈傷組織形成的適宜外植體。5.34mg/L濃度的6-BA有利于子葉愈傷組織的形成，愈傷組織形成百分率達(dá)到最大，為87.5%。子葉為外植體時(shí)，誘導(dǎo)愈傷組織的最佳配