植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告

植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告班級(jí)：12級(jí)農(nóng)業(yè)資源班成員：楊存虎(12012243270)江凱(12012243246)張淵浩(12012243301)孫旭(12012243213)實(shí)驗(yàn)名稱低溫脅迫對(duì)小麥幼苗的影響研究。實(shí)驗(yàn)?zāi)康尿?yàn)證低溫脅迫對(duì)小麥幼苗生長(zhǎng)造成的生理傷害，并以各項(xiàng)生理指標(biāo)定定性的檢測(cè)出來。掌握各項(xiàng)生理指標(biāo)測(cè)定的原理和方法。實(shí)驗(yàn)原理：小麥在整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育過程中，需要外界有一個(gè)適宜的溫度范圍。當(dāng)外界氣溫和地溫明顯地獄小麥所需的適宜溫度，接近或超過其在這一時(shí)期生理狀態(tài)所能忍受的極限最低溫就會(huì)造成脅迫和傷害。(1)目前。對(duì)小麥抗寒性的研究已總結(jié)出許多度量指標(biāo)，但細(xì)胞膜是對(duì)逆境最敏感的原始反應(yīng)部位，低溫脅迫時(shí)，被傷害的關(guān)鍵部位是膜系統(tǒng)。(2)低溫脅迫對(duì)膜破壞的程度，即對(duì)膜透性的影響，在研究小麥抗寒性方面是至關(guān)重要的指標(biāo)。目前電導(dǎo)法已成為小麥抗性栽培、育種上鑒定小麥抗逆性強(qiáng)弱的一個(gè)方法。過氧化物酶是植物保護(hù)酶之一，它和超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)，等組成植物的防御系統(tǒng)。因此過氧化物酶的活性也可反映小麥的抗寒性。三實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)計(jì)（1）實(shí)驗(yàn)材料小麥（種子由實(shí)驗(yàn)室提供）（2）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采土：5月11日下午播種：5月11日晚上（將沙壤土完全浸濕等待播種將已浸泡24小時(shí)的小麥種子播下）生長(zhǎng)時(shí)期：預(yù)定5月11日—5月21日逆境處理：設(shè)置對(duì)照組和處理組：分別將花盆編號(hào)為ABC,選取C號(hào)為對(duì)照處理，讓其在正常土壤下正常生長(zhǎng)，AB號(hào)分別至于不同溫度下進(jìn)行低溫處理。處理時(shí)間：處理6h后取出，開始分別測(cè)量對(duì)照組和處理組的各項(xiàng)指標(biāo)。測(cè)定指標(biāo)（一）電導(dǎo)法測(cè)定植物組織抗逆性（二）植物組織過氧化物酶活性的測(cè)定1材料與方法材料小麥方法（一）電導(dǎo)法測(cè)定植物組織抗逆性1、將小麥葉片置于-20攝氏度冰箱中冷凍處理10分鐘作為處理，另一份小麥葉片置于室溫做對(duì)照。2、各加20ml蒸餾水，用注射器抽氣使葉片下沉入水下，浸泡10分鐘后測(cè)電導(dǎo)率（S1）,用微波爐煮沸后測(cè)電導(dǎo)率（S2）.（二）植物組織過氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)材料：2.9ml0.05M磷酸緩沖液；1ml2%H202；1.0ml0.05M愈創(chuàng)木酚和0.1ml酶液。實(shí)驗(yàn)步驟：1、酶液的制備取0.5g葉片、加入少量磷酸緩沖液研磨至勻漿，轉(zhuǎn)入離心管中,4000r、離心10min,然后取上清液定容至10ml,備用。2、過氧化物酶活性的測(cè)定用加熱煮沸5min后的酶液作對(duì)照，反應(yīng)體系加入酶液后，立即于37攝氏度水浴中保溫15min，并加入20ml20%的三氯乙酸終止反應(yīng)，然后于470nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。生理指標(biāo)的測(cè)定方法外滲電導(dǎo)率測(cè)定：電導(dǎo)法植物組織受到逆境傷害時(shí)，由于膜的功能受損或結(jié)構(gòu)破壞，而使其透性增大，細(xì)胞內(nèi)的鹽類或有機(jī)物將有不同程度生出，從而引起組織浸泡液電導(dǎo)率發(fā)生變化。通過測(cè)定外滲液電導(dǎo)率的變化，就可以反映出質(zhì)膜的傷害程度和所測(cè)材料抗逆性的大小，傷害越重，外滲越多，電導(dǎo)率的值也就越大。過氧化物活性測(cè)定：愈創(chuàng)木酚法在過氧化物酶的催化下，過氧化氫將愈創(chuàng)木酚氧化成茶褐色產(chǎn)物。此產(chǎn)物在470nm處有最大吸光值。故通過測(cè)470nm下的吸光值變化測(cè)定過氧化物酶的活性。2結(jié)果與分析公式：L=(S-S)/(S-S)傷害度(%)=(L-L)/(1-L)X100t10t20tckck過氧化物酶活性二(AA470XVt)/(WXVsX0.01Xt)外滲電導(dǎo)率的變化冷凍后的小麥葉片的外滲電導(dǎo)率比室溫的要大；煮沸后的小麥葉片的外滲電導(dǎo)率比煮沸前的要大。也就說明當(dāng)植物受到逆境影響時(shí)，如高溫或低溫、干旱、鹽漬、病原菌侵染后，細(xì)胞膜遭到破壞，膜透性增大，從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲，以致植物細(xì)胞浸提液的電導(dǎo)率增大。由此可得出，電導(dǎo)率越大，表明小麥葉片受到傷害的程度也越大。過氧化物酶活性的變化經(jīng)低溫處理過的小麥葉片過氧化酶活性低于室溫下測(cè)得的小麥葉片的過氧化酶活性，但卻并未完全消失。而過氧化酶是植物體內(nèi)普遍存在的、活力較高的一種酶，它與呼吸作用、光合作用及生長(zhǎng)素的氧化等都有密切關(guān)系，在植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中，它的活力不斷發(fā)生變化，因此測(cè)量這種酶，可以反映某一時(shí)期植物內(nèi)代謝的變化?！鱋D470越大，說明對(duì)應(yīng)的過氧化物酶活力越高，反之亦然。實(shí)驗(yàn)結(jié)果預(yù)測(cè)討論抗寒性研究一直是小麥抗逆性研究中的熱點(diǎn)，當(dāng)小麥葉片受到低溫脅迫后，細(xì)胞膜發(fā)生了變化，這就破壞了膜的結(jié)構(gòu)，膜透性增大，從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲，以致小麥浸泡的電導(dǎo)率增大。所測(cè)得的電導(dǎo)率越大，植物葉片的抗寒性越弱，植物組織所受傷害越大；電導(dǎo)率越小，植物葉片的抗寒性越強(qiáng)，傷害越小。過氧化物酶是一種由一單一肽鏈與卟啉構(gòu)成的血紅素蛋白。同工酶普遍存在于植物體各組織中，是一種對(duì)環(huán)境條件十分敏感的氧化酶類。低溫脅迫下，植物葉片中的過氧化物酶的活性越大，膜