紫外-可見分光光度法

第七章紫外-可見分光光度法◆學(xué)習(xí)目標(biāo)⊙◆知識(shí)要求⊙◆能力要求⊙◆知識(shí)要求1．掌握光的吸收定律概念、表達(dá)式及條件，吸光系數(shù)和吸收光譜的意義，常用定量分析方法的原理和應(yīng)用。2．熟悉紫外-可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)、吸光度測(cè)量條件的選擇、偏離光的吸收定律的主要因素。3．了解光譜分析法的分類、紫外-可見吸收光譜的產(chǎn)生機(jī)制、定性分析的依據(jù)和方法。案例導(dǎo)入

在夏天參加戶外活動(dòng)時(shí)，如果天氣晴朗，就應(yīng)該注意保護(hù)皮膚，否則，暴露在火辣辣太陽之下的皮膚，數(shù)小時(shí)后就會(huì)出現(xiàn)紅腫、瘙癢、發(fā)熱、刺痛癥狀，數(shù)日后出現(xiàn)蛻皮現(xiàn)象，這表明太陽光中有一種光線能傷害生物細(xì)胞。科學(xué)家研究證實(shí)，這種光線是紫外線。

根據(jù)可見光、紫外光與物質(zhì)分子的相互作用建立了紫外-可見分光光度法。

根據(jù)待測(cè)物質(zhì)（原子或分子）發(fā)射或吸收的電磁輻射，以及待測(cè)物質(zhì)與電磁輻射的相互作用而建立起來的定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法，統(tǒng)稱為光學(xué)分析法。利用光譜進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析的方法稱為光譜分析法，簡(jiǎn)稱光譜法。

紫外-可見分光光度法：研究物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)（200~760nm）分子吸收光譜的光譜分析法第一節(jié)概述1．電磁輻射（電磁波，光）：以巨大速度通過空間，不需要任何物質(zhì)作為傳播媒介的粒子流。

波長(zhǎng)范圍：紫外區(qū)200-400nm可見光區(qū)400-760nm一、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收電磁輻射的性質(zhì)：具有波、粒二象性波動(dòng)性：粒子性：第一節(jié)概述單色光:

單一波長(zhǎng)的光束復(fù)色光:

含有多種波長(zhǎng)的光束電磁波譜:

以波長(zhǎng)大小順序排列的電磁波譜圖波長(zhǎng)10pm300pm200nm400nm800nm500mm1cm1m光譜射線X射線紫外光可見光紅外光微波無線電波方法

光譜法分光光度法光譜法核磁共振可見光第一節(jié)概述紅光與綠光互補(bǔ)、紫光與黃光互補(bǔ)，等等。

白光的組成白光的色散單色光復(fù)合光光的互補(bǔ)單一波長(zhǎng)的光由不同波長(zhǎng)的光組合而成的光若兩種不同顏色的單色光按一定的強(qiáng)度比例混合得到白光，那么就稱這兩種單色光為互補(bǔ)色光，這種現(xiàn)象稱為光的互補(bǔ)。藍(lán)黃紫紅綠紫黃綠青藍(lán)橙紅青一、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收物質(zhì)的顏色與光的關(guān)系完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光第一節(jié)概述二、透光率與吸光度I0＝Ia+It+Ir

I0＝Ia+It

第一節(jié)概述透射光強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度I0的比值稱為透光率或透光度T透光率的負(fù)對(duì)數(shù)為吸光度A

【例題9-2】（1）透光率T為50%，其吸光度A為多少？（2）吸光度A為0.70，其透光率T為多少？解:（1）透光率T=50%=0.50,其吸光度為：A=-lgT=-lg0.50=0.30(2）吸光度A=0.70,其夠光率為：T=10-A=10-0.70=0.20=20%或0.70=-lgTlgT=-0.70,T=0.20第一節(jié)概述三、吸收光譜曲線

概念：以波長(zhǎng)λ為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)所描繪的曲線，稱為吸收光譜曲線，簡(jiǎn)稱吸收光譜。特點(diǎn)：在相同條件下，同一物質(zhì)的不同濃度的溶液，其吸收光譜曲線相似，且λmax相同。這是定性分析的基礎(chǔ)。UV-Vis吸收光譜的常見術(shù)語吸收峰→max谷→min肩峰→sh末端吸收:吸收光譜曲線波長(zhǎng)最短的一段，吸光度相當(dāng)大，但不成峰的部分。強(qiáng)帶：吸光度大于104的吸收峰弱帶：吸光度小于103的吸收峰特征值→定性依據(jù)第一節(jié)概述吸收光譜曲線示意圖A480520560nmmax=515第一節(jié)概述四、紫外-可見分光光度的特點(diǎn)課堂活動(dòng)1．紫外-可見光的波長(zhǎng)范圍是

A．200~400nmB．400~760nmC．200~760nmD．360~800nm2．下列敘述錯(cuò)誤的是A．光的能量與其波長(zhǎng)成反比B．有色溶液越濃，對(duì)光的吸收也越強(qiáng)烈C．物質(zhì)對(duì)光的吸收有選擇性D．光的能量與其頻率成反比第一節(jié)概述課堂活動(dòng)3．紫外-可見分光光度法屬于A．原子發(fā)射光譜法B．原子吸收光譜法

C．分子發(fā)射光譜法D．分子吸收光譜法4．分子吸收可見-紫外光后，可發(fā)生哪種類型的（）分子能級(jí)躍遷A．轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷B．振動(dòng)能級(jí)躍遷

C．電子能級(jí)躍遷D．以上都能發(fā)生

第一節(jié)概述第一節(jié)概述點(diǎn)滴積累1．光的本質(zhì)是電磁波；物質(zhì)對(duì)光的吸收具有選擇性。2．吸光度與透光率的關(guān)系是:3．吸收曲線是溶液在一定條件下的吸光度隨入射光波長(zhǎng)變化而變化的曲線。

二、Lambert-Beer定律I0Itl光的吸收定律A＝-lgT=lg（I0/It)=kclA：吸光度T：透光率，T=It/I0l：液層厚度(光程長(zhǎng)度)c：溶液的濃度k：吸光系數(shù)朗伯(Lambert)定律：A=K1L比耳(Beer)定律：A=K2c

單色光適用范圍：可見光、紫外光和紅外光；均勻無散射的溶液、固體和氣體。

I0=It+IaA＝-lgT=klc吸收光譜法的基本定律，是定量測(cè)定的依據(jù)A與c為簡(jiǎn)單的正比關(guān)系；T與c是指數(shù)關(guān)系A(chǔ)具加合性設(shè)共存物為a、b、c，則：A=kalca+kblcb+kclcc1．Lamber-Beer定律的適用條件（前提）入射光為單色光溶液是稀溶液

1、物理意義：指吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時(shí)的吸光度

2、不同物質(zhì)對(duì)同一波長(zhǎng)的單色光，有不同的吸光系數(shù)，k↑，物質(zhì)對(duì)光的吸收能力↑。吸光物質(zhì)在一定波長(zhǎng)和溶劑條件下的特征常數(shù)，是定性和定量的依據(jù)。

3、表示方法：k值及單位與c和l采用的單位有關(guān)

εmax表明了該吸收物質(zhì)最大限度的吸光能力，它的大小反映了光度法測(cè)定某物質(zhì)可能達(dá)到的靈敏度。

ε>104

靈敏度高104>ε>103

靈敏度中等ε<103

靈敏度低二、吸光系數(shù)2、比吸光系數(shù)（百分吸光系數(shù)）

在某一波長(zhǎng)下，溶液濃度為1mol/L、液層厚度為1cm時(shí)的吸光度。單位：L/(mol·cm)在某一波長(zhǎng)下,溶液濃度為1（g/100ml)、液層厚度為1cm時(shí)的吸光度。單位：mL/(g·cm)1、摩爾吸光系數(shù)ε吸光系數(shù)的大小，取決于物質(zhì)（溶質(zhì)、溶劑）本性、溫度和光的波長(zhǎng)。1）物質(zhì)不同，吸光系數(shù)不同，是物質(zhì)的特征常數(shù)；2）溶劑不同，同一物質(zhì)吸光系數(shù)不同，故常在描述吸光系數(shù)時(shí)需指明某溶劑；3）光的波長(zhǎng)不同，吸光系數(shù)不同。某化合物的濃度為4.2×10-3g/L，用2.0cm的吸收池在470nm下測(cè)得的透光率為30.0%，該化合物的分子量為250，求其在470nm處的摩爾吸光系數(shù)和百分吸光系數(shù)。例：解：∵A=-lgT=-lg0.300=0.523c=4.2×10-3g/L=4.2×10-4g/100mll=2.0cm課堂互動(dòng)某有色溶液的物質(zhì)的量濃度濃度為c，在一定條件下用1cm比色杯測(cè)得吸光度為A，則摩爾吸光系數(shù)應(yīng)為：A．cAB．cMC．A/CD．C/A第二節(jié)紫外-可見分光光度法的基本原理五、偏離Lambert-Beer定律的因素（一）化學(xué)因素吸光物質(zhì)溶液的濃度稀溶液吸光性物質(zhì)的化學(xué)變化溶劑的影響A＝εlc（二）光學(xué)因素(1)非單色光l對(duì)策：選擇比較好的單色器入射波長(zhǎng)選定在待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)處嚴(yán)格地講，吸收定律只適用于單色光。單色光指具有單一波長(zhǎng)的光，但實(shí)際上不能得到純粹的單色光，而是波長(zhǎng)范圍較窄的復(fù)合光。對(duì)于同一物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收程度不同，所以導(dǎo)致對(duì)光的吸收定律的偏離。(2)雜散光：?jiǎn)紊庵谢煊幸恍┎辉谧V帶寬度范圍內(nèi)、與所需的波長(zhǎng)不符的光，稱為雜散光(3)散射和反射光(4)非平行光吸收質(zhì)點(diǎn)的散射（膠體、乳濁液或懸濁液）吸收池內(nèi)外界面的反射測(cè)得的吸光度偏高l用參比溶液(空白溶液)對(duì)比補(bǔ)償對(duì)策：第二節(jié)紫外-可見分光光度法的基本原理點(diǎn)滴積累1．光的吸收定律表明了吸光度與液層厚度和濃度之間的關(guān)系，它是吸收光譜法定量分析的依據(jù)。2．吸光系數(shù)的表示方法有多種，隨待測(cè)溶液濃度的不同標(biāo)度而不同。3．偏離光的吸收定律的因素主要有化學(xué)因素和光學(xué)因素。第三節(jié)紫外-可見分光光度計(jì)一、紫外-可見分光光度計(jì)的主要部件：光源—單色器—吸收池—檢測(cè)器—訊號(hào)處理與顯示器

一、主要部件：1、光源：發(fā)出所需波長(zhǎng)范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有足夠強(qiáng)度且穩(wěn)定（不隨λ而改變）

分光光度計(jì)中常用的光源有：熱輻射光源：鎢燈，鹵鎢燈（可見、近紅外光區(qū)）

可發(fā)射340-2500nm的連續(xù)光譜氣體放電光源：氫燈，氘燈（紫外光區(qū)）發(fā)射150-400nm連續(xù)光譜氙燈氫燈鎢燈2、單色器：是從連續(xù)光譜中獲得所需波段的單色光的裝置。（1）入射狹縫:限制雜散光進(jìn)入（2）準(zhǔn)直鏡（透鏡或凹面反射鏡），它使入射光束變?yōu)槠叫泄馐＃?）色散元件：棱鏡或光柵，它使不同波長(zhǎng)的入射光色散開來。（4）聚焦透鏡或聚焦凹面反射鏡聚焦，它使不同波長(zhǎng)的光聚焦在焦面的不同位置。（5）出射狹縫作用：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。但狹縫↓，光強(qiáng)度↓，靈敏度↓3、吸收池（比色皿或比色杯）：用于盛放溶液并提供一定吸光厚度的器皿。它由透明的光學(xué)玻璃或石英材料組成。玻璃吸收池只能用于可見光區(qū)，而石英吸收池在紫外和可見光區(qū)都可使用。光徑一般在0.1-10cm，最常用的吸收池吸光厚度為1cm。高濃度常選光徑較小的，低濃度選光徑較大的。（四）檢測(cè)器：利用光電效應(yīng)，將光強(qiáng)度轉(zhuǎn)換成電流訊號(hào)。（光信號(hào)→電信號(hào)）

光檢測(cè)器：光電池、光電管、光電倍增管和光二極管陣列檢測(cè)器。（五）信號(hào)顯示系統(tǒng)：將信號(hào)以適當(dāng)方式顯示或記錄。

常用的顯示器有直讀檢流計(jì)、微安表、電位計(jì)、數(shù)字電壓表、記錄儀、示波器及數(shù)據(jù)處理機(jī)等。很多型號(hào)的分光光度計(jì)裝配有微處理機(jī)，既可對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行操作控制，又可進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。二、分光光度計(jì)的類型：（一）單波長(zhǎng)單光束分光光度計(jì)：0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示只有一條光路，通過變換參比池和樣品池的位置，使它們分別置于光路來進(jìn)行測(cè)定國(guó)產(chǎn)751型、752型、721型、722型、UV-1100型、英國(guó)SP-500型，伯克曼DU-8型這類分光光度計(jì)的特點(diǎn)是：一般用鎢燈或氫燈作光源，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，價(jià)格便宜。主要適用于定量分析，而不適用于作定性分析。另外，結(jié)果受電源的波動(dòng)影響較大。（二）單波長(zhǎng)雙光束分光光度計(jì)光源比值單色器吸收池檢測(cè)器顯示光束分裂器雙光束分光光度計(jì)是自動(dòng)比較了透過參比溶液和樣品溶液的光的強(qiáng)度，它不受光源（電源）變化的影響。雙光束分光光度計(jì)還能進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，并自動(dòng)記錄下各波長(zhǎng)下的吸光度，很快就可得到試液的吸收光譜。所以能用于定性分析。國(guó)產(chǎn)710型、730型、

740型、日立UV-340型、U-4100等屬于這種類型。光源單色器Ⅰ單色器Ⅱ檢測(cè)器切光器狹縫吸收池3、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)：用兩種不同波長(zhǎng)的單色光束交替照射到樣品溶液上，不需使用參比溶液，測(cè)得的是樣品在兩種波長(zhǎng)下的吸光度之差。一個(gè)光源，兩個(gè)單色器，一個(gè)吸收池211、波長(zhǎng)范圍2、波長(zhǎng)準(zhǔn)確度3、波長(zhǎng)重現(xiàn)性4、狹縫或譜帶寬5、分辨率6、雜散光7、透光率測(cè)量范圍8、吸光度測(cè)量范圍9、測(cè)光準(zhǔn)確度10、測(cè)光重現(xiàn)性三、分光光度計(jì)的光學(xué)性能第三節(jié)紫外-可見分光光度計(jì)點(diǎn)滴積累紫外-可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)相同，都由光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器、訊號(hào)處理與顯示器等主要部件構(gòu)成，但不同型號(hào)儀器的外形差別很大，質(zhì)量和價(jià)格相差懸殊，操作方法迥異，使用之前應(yīng)仔細(xì)閱讀儀器使用說明書。

00.41.22.02.83.6246%A暗噪聲訊號(hào)噪聲誤差曲線從圖中可以看出：A值控制在0.2-0.7之間(或T值在20%-65%之間）相對(duì)誤差較小。方法：改變待測(cè)液的濃度選用適當(dāng)厚度的吸收池1.吸光度范圍的選擇第四節(jié)分析條件的選擇（一）、儀器測(cè)量條件的選擇一般應(yīng)該選擇λmax為入射光波長(zhǎng)。如果λmax處有共存組分干擾時(shí)，則應(yīng)考慮選擇靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長(zhǎng)。2.選擇適當(dāng)?shù)娜肷洳ㄩL(zhǎng)二、顯色反應(yīng)條件的選擇顯色反應(yīng)：在光度分析中將試樣中的待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)。顯色反應(yīng)需滿足的條件：1．選擇性要好，與樣品可發(fā)生定量反應(yīng)。2．靈敏度要高：3．有色化合物的組成要恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定在紫外-可見光區(qū)有吸收，且max較大。

4．顯色劑的顏色與有色化合物的顏色差別要大5．反應(yīng)的條件要易于控制。顯色反應(yīng)條件的控制(1)顯色劑用量生成配位化合物的顯色反應(yīng)可用下式表示：M+nR→MRn若配合物穩(wěn)定性好，顯色劑只需稍過量。若配合物不穩(wěn)定，顯色劑需過量很多。若可形成逐級(jí)配合物時(shí)，顯色劑用量應(yīng)嚴(yán)格控制在一定范圍。例：MoMo(SCN)5Mo(SCN)6-桔紅色淺紅色2、溶液的酸度pH值對(duì)顯色反應(yīng)的影響pH值不同，可形成具不同配位數(shù)、不同顏色的配合物pH值增大，引起某些金屬離子水解，甚至析出沉淀。Fe(SCN)2++OH-→Fe(OH)2++SCN-例：Fe3+與水楊酸在不同pH值生成不同配合物pH值<44-78-10配合物組成Fe(C7H4O3)+Fe(C7H4O3)2-Fe(C7H4O3)33-顏色紫紅棕橙黃pH值的確定做A-pH關(guān)系曲線，得到合適的pH值范圍（3）其他條件顯色溫度顯色時(shí)間放置時(shí)間溶劑顯色反應(yīng)的速度有快有慢，快的幾乎是瞬間完成，顏色很快達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，并且能保持較長(zhǎng)時(shí)間。大多數(shù)顯色反應(yīng)的速度是比較慢的，需要一定時(shí)間才能達(dá)到穩(wěn)定。而且有些有色化合物放置過久也會(huì)褪色。適宜的顯色時(shí)間、溫度要由實(shí)驗(yàn)來確定。三、參比溶液選擇為什么需要使用參比溶液？所測(cè)得的吸光度要真正反映待測(cè)溶液的吸光強(qiáng)度。1、溶劑參比試樣組成簡(jiǎn)單、共存組份少(基體干擾少)、顯色劑不吸收時(shí)，直接采用溶劑(多為蒸餾水)為參比。即試劑、干擾、顯色劑均無吸收，用溶劑作參比。注：采用空白對(duì)比消除因溶劑和容器的吸收、光的散射和界面反射等因素對(duì)透光率的干擾。試劑參比：當(dāng)顯色劑和其它試劑在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收時(shí)，采用試劑+顯色劑作參比(不加待測(cè)物)。試樣參比：如試樣基體在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收，可以試樣作參比(不能加顯色劑)。平行操作參比溶液：用不含待測(cè)組分的試樣，在完全相同條件下與待測(cè)試樣同時(shí)進(jìn)行處理，得到平行操作參比溶液。第四節(jié)分析條件的選擇點(diǎn)滴積累1．選擇吸光性物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。2．使用紫外-可見分光光度計(jì)時(shí)，讀數(shù)范圍應(yīng)控制在吸光度為0.2～0.7，透光率為65%～

20%之間。3．待測(cè)物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)無吸收時(shí)，應(yīng)加顯色劑。顯色劑不得有干擾，反應(yīng)必須完全。4．一般用溶劑作參比溶液。必要時(shí)采用試樣參比溶液、試劑參比溶液或平行操作參比溶液。

第五節(jié)定性與定量分析一、定性分析依據(jù)：相同的化合物有相同的光譜方法：比較吸收光譜的一致性比較吸收光譜的特征數(shù)據(jù)比較吸光度的比值定性鑒別純度檢查和雜質(zhì)限量測(cè)定（一）定性鑒別定性鑒別的依據(jù)→吸收光譜的特征(λmax和εmax）吸收光譜的形狀吸收峰的數(shù)目吸收峰的位置（波長(zhǎng)）吸收峰的強(qiáng)度相應(yīng)的吸光系數(shù)缺陷：不能鑒定飽和物質(zhì)及結(jié)構(gòu)相似的化合物。1．對(duì)比吸收光譜的特征數(shù)據(jù)（吸光度或吸光系數(shù)）2．對(duì)比吸光度或吸光系數(shù)的比值：如果化合物有幾個(gè)吸收峰，可用在不同吸收峰（或峰與谷）處測(cè)得吸光度的比值作為鑒別的依據(jù)。例：3．對(duì)比吸收光譜的一致性同一測(cè)定條件下，與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物譜圖或標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行對(duì)照比較（二）純度檢查和雜質(zhì)限量測(cè)定1．純度檢查（雜質(zhì)檢查）1）峰位不重疊：找λ→使主成分無吸收，雜質(zhì)有吸收→直接考察雜質(zhì)含量2）峰位重疊：主成分強(qiáng)吸收，雜質(zhì)無吸收/弱吸收→與純品比較，E↓雜質(zhì)強(qiáng)吸收>>主成分吸收→與純品比較，E↑，光譜變形雜質(zhì)的存在吸收曲線形狀改變吸光系數(shù)值的大小例：乙醇中含少量的雜質(zhì)苯乙醇的UV吸收光譜在256nm處沒有吸收峰而苯在256nm處有的吸收峰苯的檢出限量低達(dá)10ppm2、雜質(zhì)的限量檢查測(cè)定特定波長(zhǎng)的吸光度值，計(jì)算雜質(zhì)的含量在此波長(zhǎng)處，雜質(zhì)有吸收，而藥物無吸收測(cè)定兩個(gè)特定波長(zhǎng)的吸光度的比值二、定量分析（一）單組分的定量方法1．標(biāo)準(zhǔn)曲線法2．標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法：外標(biāo)一點(diǎn)法3．吸光系數(shù)法1、標(biāo)準(zhǔn)曲線法配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測(cè)定吸光度。繪制A-c標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算回歸方程。測(cè)定樣品的A值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上或代入回歸方程得到樣品的濃度。蘆丁含量測(cè)定0.710mg/25mL標(biāo)準(zhǔn)溶液一般為5～7個(gè)點(diǎn)，至少不少于4個(gè)。待測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)平行處理。標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度范圍應(yīng)在溶液吸光度與其濃度呈線性關(guān)系區(qū)間內(nèi)，且溶液的吸光度值控制在0.1～1.0之間。用坐標(biāo)紙繪制完后應(yīng)注明測(cè)定內(nèi)容，如測(cè)定波長(zhǎng)、吸收池厚度、操作時(shí)間等；長(zhǎng)時(shí)間不用后再次使用時(shí)，以及儀器維修調(diào)整后應(yīng)檢查標(biāo)準(zhǔn)曲線，必要時(shí)應(yīng)重新繪制。

注意事項(xiàng)：2、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法：在相同條件下，配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液。（兩種溶液的濃度最好相近）在選定波長(zhǎng)處，測(cè)定兩者的吸光度。根據(jù)推導(dǎo)出來的下式計(jì)算樣品濃度。A標(biāo)=

c標(biāo)lA樣=

c樣l兩式的和l值相同外標(biāo)一點(diǎn)法注：當(dāng)樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的稀釋倍數(shù)相同時(shí)max

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A

2.對(duì)于同一待測(cè)溶液，濃度↑，吸光度↑；3.對(duì)于同一物質(zhì)，不論濃度大小如何，最大吸收峰所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)(最大吸收波長(zhǎng)λmax)不變，并且曲線的形狀也完全相同。從分析吸收曲線可以知道：1.同一濃度的待測(cè)溶液對(duì)不同波長(zhǎng)的光有不同的吸光度;3、吸光系數(shù)法利用從手冊(cè)或文獻(xiàn)查到的或值，根據(jù)下式定量：或特點(diǎn)：對(duì)儀器要求較高。例9-5:維生素B12的水溶液在處的百分吸光系數(shù)值是207，盛于1cm吸收池中，測(cè)得的溶液吸光度為0.414，則溶液的濃度為多少？

解:例9-6：維生素B12樣品20mg用水溶液配成1000ml。盛于1cm吸收池中，于361nm處測(cè)定吸光度為0.407，求B12的百分含量？（二）多組分的測(cè)定方法：在含有多種組分的溶液中，如果要測(cè)定多個(gè)組分，可以根據(jù)情況的不同，采用不同的方法來進(jìn)行測(cè)定。

如果溶液中各組分之間的吸收曲線互相不干擾，可以選擇適當(dāng)?shù)牟煌牟ㄩL(zhǎng)分別測(cè)定。如圖（a)：X,Y組份最大吸收波長(zhǎng)不重迭，相互不干擾，可以按兩個(gè)單一組份處理。如果多個(gè)組分之間的吸收曲線有干擾則可利用吸光度的加和性，以解聯(lián)立方程式的方法，求得各個(gè)組分的含量或濃度。圖b在混合組分測(cè)定中，實(shí)際遇到的情況是吸收光譜雙向重疊，互相干擾，兩組份在最大吸收波長(zhǎng)處互相吸收，如圖9-7c所示。這時(shí)可根據(jù)測(cè)定的目的要求和光譜重疊情況，采取以下方法.1、解線性方程法：2、等吸收雙波長(zhǎng)消去法

該方法是在吸收光譜互相重疊的a、b兩組份的混合物中，先設(shè)法消去組分a的干擾而測(cè)定組分b的濃度。即選取對(duì)干擾組分a等吸收的兩個(gè)波長(zhǎng)處廣度相等（A1a=A2a),而欲測(cè)組分b在兩波長(zhǎng)處的吸光度則有很大的差別，這樣，混合組分在兩波長(zhǎng)處之差△A與待測(cè)組分b的濃度有如下關(guān)系：測(cè)量原理：當(dāng)試樣中組份的濃度過大時(shí)，則A值很大，會(huì)產(chǎn)生讀數(shù)誤差。此時(shí)若以一濃度略小于試樣組份濃度作參比（透光率為100%），則有：（三）示差分光光度法-----

高含量組分的測(cè)定第五節(jié)定性定量方法課堂互動(dòng)1．在符合朗伯-比爾定律的條件下，有色物質(zhì)的濃度、最大吸收波長(zhǎng)、吸光度三者的關(guān)系是A．增加、增加、增加B．增加、減小、不變C．減小、增加、減小D．減小、不變、減小2．維生素D2的摩爾吸收系數(shù)264nm=18200。用2.0cm吸收池測(cè)定，如果要控制吸光度A在0.699～0.187范圍內(nèi)，應(yīng)使維生素D2溶液的濃度在什么范圍內(nèi)？第五節(jié)定性定量方法點(diǎn)滴積累（1）紫外-可見分光光度法的各種定量方法的優(yōu)缺點(diǎn)：1．標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)：測(cè)定大批量樣品時(shí)，操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、快速。缺點(diǎn)：不同人處理相同的測(cè)量數(shù)據(jù)，得到的結(jié)果不易完全相同。2．標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法的優(yōu)點(diǎn)：測(cè)量數(shù)據(jù)相同，任何人都能得到完全一致的結(jié)果。缺點(diǎn)：隨機(jī)誤差較大。3．吸光系數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)：與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法的優(yōu)點(diǎn)相同。缺點(diǎn)：測(cè)定條件不易與文獻(xiàn)完全一致，從而引入誤差。

第五節(jié)定性定量方法點(diǎn)滴積累（2）紫外-可見分光光度法的各種定量方法的優(yōu)缺點(diǎn)：4．解聯(lián)立方程組法的優(yōu)點(diǎn)：可以不經(jīng)分離直接測(cè)定二元組分溶液。缺點(diǎn)：在兩個(gè)測(cè)定波長(zhǎng)處，要求兩個(gè)組分的吸光系數(shù)有較大的差別。5．等吸收波長(zhǎng)消去法的優(yōu)點(diǎn)：可以不經(jīng)分離直接測(cè)定二元組分溶液，還適于測(cè)定混濁液的測(cè)定。缺點(diǎn)：要求干擾組分的吸收光譜中有一個(gè)峰或谷。6．差示分光光度法的優(yōu)點(diǎn)：可以直接測(cè)定高濃度溶液。缺點(diǎn)：需要用高精密度的儀器。

一、選擇題（一）單項(xiàng)選擇題1．紫外-可見光的波長(zhǎng)范圍是：A.200~400nmB．400~760nmC．200~760nmD．360~800nm2．下列敘述錯(cuò)誤的是：A．光的能量與其波長(zhǎng)成反比B．有色溶液越濃，對(duì)光的吸收也越強(qiáng)烈C．物質(zhì)對(duì)光的吸收有選擇性D．光的能量與其頻率成反比

【目標(biāo)檢測(cè)】第六節(jié)紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介3．紫外-可見分光光度法屬于：A．原子發(fā)射光譜B．原子吸收光譜C．分子發(fā)射光譜D．分子吸收光譜4．分子吸收紫外-可見光后，可發(fā)生哪種類型的分子能級(jí)躍遷：A．轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷B．振動(dòng)能級(jí)躍遷C．電子能級(jí)躍遷D．以上都能發(fā)生第六節(jié)紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介5．某有色溶液的摩爾濃度為c，在一定條件下用1cm比色杯測(cè)得吸光度為A，則摩爾吸光系數(shù)為：A．cAB．cMC．D．6．某吸光物質(zhì)的摩爾質(zhì)量為M，其摩爾吸收系數(shù)與比吸收系數(shù)的換算關(guān)系是A．＝·MB．＝/M

C．＝·M/10D．＝/M×10第六節(jié)紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介7．關(guān)于光的性質(zhì)，描述正確的是：A．光具有波粒二象性B．光具有發(fā)散性C．光具有顏色D．本質(zhì)是單色光8．某吸光物質(zhì)的吸光系數(shù)很大，則表明：A．該物質(zhì)溶液的濃度很大B．測(cè)定該物質(zhì)的靈敏度高C．入射光的波長(zhǎng)很大D．該物質(zhì)的分子量很大第六節(jié)紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介9．相同條件下，測(cè)定甲、乙兩份同一有色物質(zhì)溶液的吸光度。若甲溶液1cm吸收池，乙溶液2cm吸收池進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果吸光度相同，甲、乙兩溶液濃度的關(guān)系：A．c甲＝c乙B．c乙＝4c甲C．c甲＝2c乙D．c乙＝2c甲10．在符合光的吸收定律條件下，有色物質(zhì)的濃度、最大吸收波長(zhǎng)、吸光度三者的關(guān)系是：A．增加、增加、增加B．增加、減小、不變C．減小、增加、減小D．減小、不變、減小

第六節(jié)紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介11．吸收曲線是在一定條件下以入射光波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)所描繪的曲線，又稱為：A．工作曲線B．A-λ曲線C．A-c曲線D．滴定曲線12．標(biāo)準(zhǔn)曲線是在一定條件下以吸光度為橫坐標(biāo)、濃度為縱坐標(biāo)所描繪的曲線，也可稱為：A．A-λ曲線B．A-c曲線C．滴定曲線D．E-V曲線

第六節(jié)紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介13．紫外-可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)可分為：A．二個(gè)部分B．三個(gè)部分C．四個(gè)部分D．五個(gè)部分14．722型分光光度計(jì)的比色皿的材料為：A．石英B．鹵族元素C．硬質(zhì)塑料D．光學(xué)玻璃

第六節(jié)紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介15．紫外-可見分光光度法定量分析的理論依據(jù)是：A．吸收曲線B．吸光系數(shù)C．光的吸收定律D．能斯特方程16．下列說法正確的是：A．吸收曲線與物質(zhì)的性質(zhì)無關(guān)B．吸收曲線