微生物檢查技術

微生物檢查技術【根據藥品種類·給藥途徑分】：無菌檢查法：細菌·霉菌及酵母菌計數檢查法：藥品中控制菌的檢查

2014年7月7

趙忠麒2005年4月16日星期六中國藥品生物制品鑒定所抗生素室2控制菌的檢查大腸桿菌的檢查：原理儀器用具試藥與試液

檢驗程序：

供試液的制備

增菌培養(yǎng)MUG試液原理

分離培養(yǎng)

生化試驗沙門菌的檢查銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌一、大腸桿菌的生物學特性

1、簡介

大腸埃希氏菌習慣稱為大腸桿菌，分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌屬，大腸桿菌為人和動物腸道中的常居菌，一般多不致病，在一定條件下可引起腸道外感染。因此，大腸桿菌被列為糞便污染指示菌，是非規(guī)定滅菌口服藥品的常規(guī)必檢項目。2、形態(tài)與染色

大小0.4～0.7×1～3um,無芽胞,大多數菌株有動力。有普通菌毛與性菌毛，有些菌株有多糖類包膜，革蘭氏陰性桿菌2005年4月16日星期六中國藥品生物制品鑒定所抗生素室51供試品的制備【大腸桿菌】若為固體樣品，

稱取10g,用100ml無菌生理鹽水溶解，充分混合溶解即為供試液，

若為液體樣品，

量取10ml，加90ml無菌生理鹽水溶解，充分混合溶解即為供試液。2005年4月16日星期六中國藥品生物制品鑒定所抗生素室62增菌培養(yǎng)取供試液10ml接種于乳糖膽鹽培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)18～24h，同時做好陰性和陽性對照，陰性對照管加入與供試液等量的稀釋液，陽性對照管加入供試液以及50～100個陽性對照管，培養(yǎng)乳糖膽鹽增菌液若供試增菌液澄清透明，證明無菌生長。若供試液增菌液混濁，證明有菌生長。37℃培養(yǎng)18～24h（必要時可延至48h）。陰性對照應無菌生長。搖勻上述BL增菌培養(yǎng)液2005年4月16日星期六中國藥品生物制品鑒定所抗生素室73MUG試驗原理搖均上述乳糖膽鹽增菌培養(yǎng)液，用滅菌吸管各吸取0.2ml,分別接種至5mlMUG培養(yǎng)基管內培養(yǎng)，分別在5h和4h，陽性對照管應呈現螢光，MUG陽性

陰性對照管應呈現無螢光，MUG陰性MUG陽性（有熒光）、靛基質陽性（玫瑰紅色）,MUG陰性（無熒光）、靛基質陰性（無色）2005年4月16日星期六中國藥品生物制品鑒定所抗生素室84生化試驗：乳糖發(fā)酵試液

甲基紅試驗

乙酰甲基甲醇生成試液

2005年4月16日星期六中國藥品生物制品鑒定所抗生素室94.1乳糖發(fā)酵試驗操作：取營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于乳糖發(fā)酵管，培養(yǎng)24～48h，觀察產酸（指示劑為酸性品紅者為紅色；指示劑為溴麝香草酚藍者為黃色），產氣（小倒管內有氣泡，氣泡無論大?。┘訇幮缘奶幚恚簽楸苊膺t緩發(fā)酵乳糖產生假陰性，亦可接種5％乳糖發(fā)酵管。絕大多數遲緩發(fā)酵乳糖的細菌，可于24h出現陽性?；蜻m當延長培養(yǎng)時間2005年4月16日星期六中國藥品生物制品鑒定所抗生素室104.2甲基紅試驗（Ｍ）操作：取營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48±2h，于培養(yǎng)液中加入甲基紅指示液2～3滴（約每ml培養(yǎng)液加指示液1滴），輕微搖動，立即觀察結果觀察：呈鮮紅色或桔紅色為陽性，呈黃色為陰性。2005年4月16日星期六中國藥品生物制品鑒定所抗生素室114.3乙酰甲基甲醇生成試驗（V-P）操作：取營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48±2h，于2ml培養(yǎng)液中加入α-萘酚乙醇試液1ml，混勻，再加40％氫氧化鉀試液0.4ml，充分振搖，在4h（通常在30min）內觀察結果結果觀察：出現紅色應判為陽性，無紅色反應為陰性二、沙門氏菌的生物學特性

1、形態(tài)與染色特性：革蘭氏陰性短桿菌，無芽孢,一般無莢膜，周生鞭毛（除雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌外），大多數具有菌毛。2、培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧；普通營養(yǎng)瓊脂上生長良好，菌落中等大小，無色半透明、圓形、光滑、濕潤。122005年4月16日星期六中國藥品生物制品鑒定所抗生素室13三、銅綠假單胞菌檢查法銅綠假單胞菌，習稱綠膿桿菌，為假單胞菌屬菌種廣泛分布在土壤，水及空氣，人和動物的皮膚、腸道、呼吸道均有存在，故可通過環(huán)境和生產的各個環(huán)節(jié)污染藥品。本菌是常見的化膿性感染菌、在燒傷、燙傷，眼科及其他外科疾患中常引起繼發(fā)感染，由于本菌對許多抗菌藥物具有天然的耐藥性，增加了治療的難度、國內外藥典均將銅綠假單胞菌檢查列為檢查項目之一2005年4月16日星期六中國藥品生物制品鑒定所抗生素室14四、金黃色葡萄球菌檢查法金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)為葡萄球菌屬中的一種廣泛分布于自然界，空氣、土壤、水及物品上，人和動物皮膚及與外界相通的腔道中，也經常有本菌存在本菌可產生多種毒素及酶，這些毒性物質能引起局部及全身化膿性炎癥，嚴重時可發(fā)展成為敗血癥和