常用檢測(cè)方法的分析

常用檢測(cè)方法的分析第一頁，共二十一頁，2022年，8月28日HPV檢測(cè)的意義HPV感染與CIN和宮頸癌變有著密切的關(guān)系HPV的檢測(cè)可能對(duì)宮頸癌的預(yù)后有預(yù)測(cè)作用HPV檢測(cè)對(duì)科學(xué)研究的價(jià)值第二頁，共二十一頁，2022年，8月28日常用檢測(cè)方法1．細(xì)胞學(xué)檢查；2.組織學(xué)檢查；3．感染組織中HPV蛋白的檢測(cè)；4.HPV感染的血清學(xué)檢查；5.HPV基因組檢測(cè).第三頁，共二十一頁，2022年，8月28日細(xì)胞學(xué)檢查傳統(tǒng)巴氏涂片（CV）液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)(TCT)自動(dòng)細(xì)胞學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)test，又稱LCT計(jì)算機(jī)輔助細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)（CCT），第四頁，共二十一頁，2022年，8月28日優(yōu)點(diǎn)與問題優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，適宜作初步篩查；缺點(diǎn)：凹空細(xì)胞是HPV感染的主要形態(tài)學(xué)改變，但由于其他病毒感染及人為因素均有可能造成細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡或凹空樣變，而且細(xì)胞學(xué)檢查易受取材、染色及細(xì)胞病理醫(yī)生的主觀判斷等因素的影響，因此應(yīng)用細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè)HPV存在靈敏度低、特異性差、假陰性率和假陽性率高、不能對(duì)HPV進(jìn)行分型.第五頁，共二十一頁，2022年，8月28日組織學(xué)檢查；肉眼觀察；陰道鏡觀察；組織檢查；第六頁，共二十一頁，2022年，8月28日優(yōu)點(diǎn)與問題優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，適宜作初步篩查；缺點(diǎn)：準(zhǔn)確率低，人員素質(zhì)要求高，病人痛苦程度大。第七頁，共二十一頁，2022年，8月28日感染組織中HPV蛋白的檢測(cè)

針對(duì)HPV抗原，主要是衣殼蛋白制備抗體，通過免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)。ELISA，免疫沉淀法等。第八頁，共二十一頁，2022年，8月28日優(yōu)點(diǎn)與問題優(yōu)點(diǎn)：原理明確，操作相對(duì)簡(jiǎn)單缺點(diǎn)：由于HPV

至今尚不能在體外培養(yǎng)，且其免疫原性較弱，故血清學(xué)方法檢測(cè)靈敏度較低。第九頁，共二十一頁，2022年，8月28日

HPV感染的血清學(xué)檢查

檢測(cè)人體血清中是否存在有針對(duì)HPV產(chǎn)生的抗體，通過免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)。第十頁，共二十一頁，2022年，8月28日優(yōu)點(diǎn)與問題優(yōu)點(diǎn)：原理明確，操作相對(duì)簡(jiǎn)單缺點(diǎn)：血清學(xué)檢測(cè)的對(duì)象是抗原和抗體，由于人體對(duì)HPV產(chǎn)生免疫應(yīng)答有一定的遲滯性，所以血清學(xué)檢測(cè)對(duì)無免疫應(yīng)答者和HPV潛伏期感染者會(huì)產(chǎn)生漏檢。第十一頁，共二十一頁，2022年，8月28日HPV基因組檢測(cè)

PCR類檢測(cè)方法Southern雜交法原位雜交雜交捕獲法第十二頁，共二十一頁，2022年，8月28日PCR類檢測(cè)方法

優(yōu)點(diǎn)：該方法靈敏度高，缺點(diǎn)：是容易發(fā)生樣品間的交叉污染，從而導(dǎo)致假陽性率高。另外利用該方法進(jìn)行HPV分型操作比較煩瑣。第十三頁，共二十一頁，2022年，8月28日Southern雜交法優(yōu)點(diǎn)：該方法靈敏度及特異性均高，適用于HPV分型、HPV-DNA分子質(zhì)量鑒定、基因組酶切圖譜建立及物理狀態(tài)研究等。缺點(diǎn)：其操作麻煩、耗時(shí)、費(fèi)用高，且必須應(yīng)用新鮮組織標(biāo)本，故不宜大規(guī)模臨床使用。第十四頁，共二十一頁，2022年，8月28日原位雜交

該法利用HPV探針與組織中的HPV-DNA雜交，首先將探針和組織中的雙鏈HPV-DNA變性為單鏈，然后使探針與組織雜交.優(yōu)點(diǎn)：利于病理學(xué)分析缺點(diǎn)：雜交鏈的穩(wěn)定性不高，在雜交過程中，部分探針單鏈復(fù)性，使雜交率降低，影響HPV-DNA的檢出率。第十五頁，共二十一頁，2022年，8月28日雜交捕獲法

雜交捕獲(hybridcapturesystem，HCS)實(shí)驗(yàn)是美國(guó)Digene公司新發(fā)展的一種檢測(cè)HPVDNA的技術(shù)，其原理是利用對(duì)抗體捕獲信號(hào)的放大和化學(xué)發(fā)光信號(hào)的檢測(cè)。基本實(shí)驗(yàn)步驟如下：1.樣本DNA雙鏈被釋放并分解為核苷酸單鏈;2.DNA單鏈與RNA探針結(jié)合為RNA－DNA雜交體;3.特異性抗體將RNA－DNA雜交體固定在試管壁或微孔壁上;4.結(jié)合有堿性磷酸酶的多個(gè)第二抗體與RNA－DNA雜交體結(jié)合,使信號(hào)放大;5.堿性磷酸酶使酶底物發(fā)光,判讀光的強(qiáng)弱可確定堿性磷酸酶的含量,從而確定RNA－DNA雜交體的含量。第十六頁，共二十一頁，2022年，8月28日雜交捕獲一代（HC-Ⅰ)試驗(yàn)可檢測(cè)9種高危型HPV,包括16、18、31、33、35、45、51、52和56。所用的反應(yīng)載體是試管；雜交捕獲二代試驗(yàn)(HC－Ⅱ)原來的試管法改為96孔平板法，能同時(shí)檢測(cè)13種高危型HPV(16、18、31、33、35、39、

45、51、52、56、58、59和68)。第十七頁，共二十一頁，2022年，8月28日第十八頁，共二十一頁，2022年，8月28日

優(yōu)點(diǎn)：其靈敏度和特異性均較好，缺點(diǎn)：存在交叉污染、費(fèi)用昂貴等問題利用該法進(jìn)行HPV分型需要將HPV常見基因型逐個(gè)篩選才能最后確定感染的HPV型別，成本高。第十九頁，共二十一頁，2022年，8月28日

HPV基因芯片檢測(cè)方法

敏感性高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。有研究報(bào)道，HPV基因芯片的檢測(cè)靈敏度是PCR方法的100倍。操作簡(jiǎn)單：通過1次雜交檢測(cè)不僅可以判斷待檢樣品中是否存在HPV感染，而且可以鑒定出是哪種型別的HPV感染。針對(duì)性強(qiáng)：對(duì)樣品中的HPV-DNA直接進(jìn)行檢測(cè)，可以檢出HPV的潛伏期感染，克服了血清學(xué)及免疫組化檢測(cè)法對(duì)潛伏感染會(huì)產(chǎn)生漏檢的缺點(diǎn)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的早期快速診斷。同時(shí)檢測(cè)多種HPV型別，對(duì)多重HPV.感染的判斷一目了然，克服了其他HPV.檢測(cè)方法難以判斷混合感染或操作煩瑣的缺點(diǎn)。第二十頁，共二十一頁，2022年，8月28日問題成本高，芯片制作和使用需要較多昂貴的儀器，如用于原位合成寡核苷酸的光刻機(jī)器和合成儀，用于合成后點(diǎn)樣的全自動(dòng)點(diǎn)樣儀，用于信號(hào)檢測(cè)的激光共聚焦掃描儀或熒光顯微鏡等設(shè)備，這些都成為