醫(yī)院細(xì)胞遺傳室常用實驗溶液試劑的配置作業(yè)指導(dǎo)書

醫(yī)院細(xì)胞遺傳室常用實驗溶液試劑的配置作業(yè)指導(dǎo)書醫(yī)院細(xì)胞遺傳室常用實驗溶液試劑的配置作業(yè)指導(dǎo)書醫(yī)院細(xì)胞遺傳室常用實驗溶液試劑的配置作業(yè)指導(dǎo)書醫(yī)院細(xì)胞遺傳室常用實驗溶液試劑的配置作業(yè)指導(dǎo)書目的規(guī)范試劑的配制，為臨床實驗的靠譜性供給質(zhì)量保障。原則專人負(fù)責(zé)，一劑一皿，一配一錄，雙人核簽。按期校正，可溯源。性能特點規(guī)范試劑的配制，為臨床供給正確穩(wěn)固有效的試劑，減少人為要素對臨床試驗結(jié)果的影響。方法化學(xué)實驗試劑的配制方法試劑與耗材量筒、燒杯、玻棒、電子稱、量杯、容量瓶、定容瓶、油紙、藥勺、100ul加樣槍、100ul槍頭操作步驟6.1生理鹽水正確稱取氯化鈉（NaCl）(生產(chǎn)商xxxx,批號xxxx有效期xxx)8.5g，加二蒸水溶解定容至1L，待充分溶解混勻裝瓶，貼標(biāo)簽（配置日期、藥品名稱、濃度、用途、有效期、配制雙人），記錄雙人署名6.20.075M氯化鉀溶液氯化鉀（KCl）5.587g，加二蒸水至1000ml，室溫保留，用于細(xì)胞低滲辦理。6.312×SSC溶液氯化鈉（NaCl）105.3g檸檬酸鈉（Na3C6H3O7·5H2O）52.94g加二蒸水至1000ml，室溫保留，臨用時用二蒸水稀釋至所需濃度。6.40.25%胰蛋白酶溶液（Trypsin）胰蛋白酶粉末（1:250）250mg無Ca2+,Mg2+的PBS加至100ml先用少量消毒的PBS將胰蛋白酶粉末溶解，再補足PBS至100ml，攪拌混勻，置4℃冰箱4小時，用0.22um微孔濾膜除菌，分裝成小瓶于-20℃保留，用于消化細(xì)胞。6.5Giemsa染色液Giemsa貯備液：配制：Giemsa粉末1g加少量甘油混淆研碎→合計加入甘油66ml，充分混勻→倒入燒杯中在55-60℃水浴中加熱2小時→冷卻→加入甲醇66ml，充分混淆→在室溫中靜置2-3周，過濾儲存于棕色瓶中，可長久使用。6%Giemsa

工作液：47ml蒸餾水中加入

Giemsa

貯備液3ml，用于染色體標(biāo)本的染色，一般染色時間為

10-20

分鐘。6.6無鈣鎂離子溶液氯化鈉（NaCl）8g氯化鉀（KCl）0.2g檸檬酸三鈉Na3C6H5O7?2H2O）1g磷酸二氫鈉NaH2PO4?H2O）0.05g碳酸氫鈉（NaHCO3）1g葡萄糖1g挨次溶于二蒸水，最后加二蒸水至1000ml，用除菌濾器除菌，保留于4℃冰箱備用。6.7Hank’s溶液（1）原液甲：氯化鈉（NaCl）80g氯化鉀（KCl）4g硫酸鎂（MgSO4?7H2O）1g氯化鎂（MgCl2?6H2O）1g氯化鈣（CaCl2）0.714g將氯化鈣溶液于50ml二蒸水中，其余挨次溶于100ml二蒸水中，兩液混淆，加二蒸水至500ml，加氯仿保留于4℃冰箱中。（2）原液乙：磷酸氫二鈉（Na2HPO4）1.52g磷酸氫二鉀（KHPO）0.6g24葡萄糖10g0.4%酚紅液50ml挨次溶于400ml二蒸水中，加入酚紅液，加二蒸水至500ml，加入氯仿，保留于4℃冰箱中。（3）使用液：取原液甲25ml，原液乙25ml，加入已早先滅菌的二蒸水至500ml，分別裝入溶液瓶中，以9磅高壓蒸汽滅菌10分鐘，冷卻后，置4℃冰箱中保留，使用前以3.5%的NaHCO3液調(diào)pH。6.80.02%乙二胺四乙酸二鈉溶液乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）0.1g氯化鈉（NaCl）4g氯化鉀（KCl）0.1g磷酸氫二鈉（Na2HPO4?H2O）0.576g磷酸二氫鉀（KHPO）0.1g24葡萄糖0.1g挨次溶于二蒸水中，加入0.4%酚紅溶液2.5ml，最后加入二蒸水至500ml，用溶液瓶分裝，9磅10分鐘高壓蒸汽滅菌，保留于4℃冰箱，使用時用3.5%碳酸氫鈉溶液調(diào)pH，用于分別細(xì)胞。6.9秋水仙素溶液稱取2毫克秋水仙素，溶解于100ml0.85%的NaCl溶液中，用時最后濃度依據(jù)不一樣的培育資料而定，一般0.04-0.08μg/ml培育液。6.10抗菌素和抗霉素溶液為了預(yù)防因無菌操作不嚴(yán)而發(fā)生污染，往常在培育液內(nèi)加入適當(dāng)?shù)目咕?，常用的有青霉素和鏈霉素適用，濃度分別為50-100IU/1ml，還有放線菌素B（ActinomycinB）或制霉菌素（mycostatin）可克制霉菌污染。組織、細(xì)胞培育常用抗生素見表3-5表3-5組織、細(xì)胞培育常用抗生素液（引自Pollardetal.1997）抗生素作用對象參照濃度穩(wěn)固性（d）（g/ml）二性霉素真菌-B氨芐青霉革蘭氏陽性、陰素性菌氯霉素革蘭氏陰性菌紅霉素革蘭氏陽性、支原體慶大霉素革蘭氏陽性、陰性菌、支原體卡那霉素革蘭氏陽性、陰性菌制霉菌素真菌青霉素-G革蘭氏陽性菌鏈霉素革蘭氏陽性、陰性菌利福平革蘭氏陽性、陰性菌

1310035510035051005503100IU/ml31003503四環(huán)素革蘭氏陽性、陰104性菌、支原體使用表中所列出的工作濃度，可在37℃長時間控制輕度污染，而對細(xì)胞無毒性作用。大部分的體外培育都使用青霉素和鏈霉素，其余抗生素僅在特別狀況下使用。6.11小牛血清小牛的年紀(jì)約6個月，體重限于500磅之內(nèi)，放血致死，獲得小牛血清。6.12肝素溶液取肝素1g加無菌生理鹽水2.5ml，即成4%的肝素溶液，可用于肝素化外周血培育基。而抽血時則用臨床注射用肝素(每支2ml含肝素12500U)6.13外周血細(xì)胞培育液25毫升培育瓶中加入RPMI-1640培育基4ml，小牛血清1ml，PHA適當(dāng)，0.4%肝素0.05ml，雙抗：青霉素和鏈霉素，終濃度為100U/ml，用3.5%碳酸氫鈉調(diào)理pH為（目前實驗室已采納商業(yè)化培育基）。6.14骨髓及其余懸浮細(xì)胞培育液含有20%小牛血清的RPMI1640培育基(或其余人工綜合培育基)，培育基的用量可視骨髓細(xì)胞的多少而定，一般為5ml。6.15Brdu和Frdu溶液Brdu250μg/ml稱取Brdu62.5mg加生理鹽水定容至250mlFrdu2.6mM稱取Frdu128.024mg，二蒸水溶解定容至200ml，過濾除菌，避光保留。6.1650%AgNO3稱取AgNO35g，HCOOH10ul,加去離子水至10ml6.17卡諾固定液（甲醇:乙酸=3:1）6.185%Ba(OH)2稱取Ba(OH)22.5g加二蒸水50ml溶解高分辨染色體系備試劑的配制7.1Frdu母液：正確稱取5-氟脲嘧啶核苷（Frdu）粉末0.0248g，加去離子水溶解，定容至10ml，即配成10-2M的Frdu母液。過濾分裝成1ml/管，-20℃中凍存待用。7.2Frdu工作液：正確量取已配制好的10-2MFrdu母液稀釋1000倍，即配成濃度為10-5M的Frdu工作液。過濾分裝，4℃中冷藏待用。7.3Uridine母液:正確稱取脲嘧啶核苷(Uridine)粉末0.0246g,加去離子水溶解，定容至10ml，即配成10-2M的Uridine母液。過濾分裝成1ml/管，-20℃中凍存待用。7.4Uridine工作液:正確量取已配制好的10-2MUridine母液加去離子水稀釋100倍，即配成濃度為10-4M的Uridine工作液。過濾分裝，4℃中冷藏待用。7.5TDR母液:正確稱取胸腺嘧啶核苷（TDR）粉末0.2432g,加去離子水溶解，定容至10ml，即配成10-1MTDR母液。過濾分裝成1ml/管，-20℃中凍存待用。7.6TDR工作液:正確量取已配制好的10-1MTDR母液稀釋100倍，即配成濃度為10-3M的TDR工作液。過濾分裝，4℃中冷藏待用。7.7EB工作液:正確稱取溴乙啶（EB）粉末0.05g,加去離子水溶解，定容至50ml,即配成濃度為1mg/ml的EB溶液。過濾分裝，4℃中冷藏待用。7.8秋水仙胺工作液:正確稱取秋水仙胺粉末0.01g，NaCl4.5g,加去離子水溶解，定