標準解讀

《GB/T 36806-2018 甘蔗桿狀病毒實時熒光PCR檢測方法》是一項國家標準，專門針對甘蔗桿狀病毒（Sugarcane bacilliform virus, SCBV）的檢測而設(shè)立。該標準詳細規(guī)定了采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（Real-time fluorescence quantitative PCR, qPCR）來定性檢測甘蔗及其繁殖材料中是否存在SCBV的方法。

首先，在準備階段，需要對實驗所用的所有試劑和設(shè)備進行校準與驗證，確保其處于最佳工作狀態(tài)。這包括但不限于DNA提取試劑盒、qPCR儀以及特異性引物探針的設(shè)計或選擇等。對于樣品處理，則要求采集新鮮或冷凍保存的甘蔗葉片作為檢測樣本，并按照特定步驟提取總DNA。

接著是擴增體系構(gòu)建環(huán)節(jié)，根據(jù)標準推薦的比例配制反應(yīng)混合液，加入適量模板DNA后進行封閉式循環(huán)擴增。在此過程中，通過監(jiān)測熒光信號的變化情況可以實時跟蹤目標序列的累積量。值得注意的是，為了保證結(jié)果準確性，還需設(shè)置陽性對照、陰性對照及內(nèi)參基因?qū)φ盏榷鄠€對照組別。

最后，在數(shù)據(jù)分析階段，依據(jù)Ct值（Cycle threshold value）判斷樣品是否含有SCBV：若樣品孔Ct值小于等于設(shè)定閾值且明顯低于空白對照，則判定為陽性；反之則為陰性。此外，還應(yīng)結(jié)合電泳圖譜進一步確認檢測結(jié)果的有效性和可靠性。

該標準為實驗室提供了統(tǒng)一規(guī)范的操作流程和技術(shù)指標，有助于提高甘蔗桿狀病毒檢測工作的科學(xué)性與可比性，從而更好地服務(wù)于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實踐中的病害防控需求。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2018-09-17 頒布
  • 2019-04-01 實施
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文檔簡介

ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標準

GB/T36806—2018

甘蔗桿狀病毒實時熒光

PCR檢測方法

DetectionofSugarcanebacilliformvirusbyreal-timePCR

2018-09-17發(fā)布2019-04-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國

國家標準

甘蔗桿狀病毒實時熒光

PCR檢測方法

GB/T36806—2018

*

中國標準出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

20189

*

書號

:155066·1-61159

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T36806—2018

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國植物檢疫標準化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標準起草單位福建農(nóng)林大學(xué)國家甘蔗工程技術(shù)研究中心農(nóng)業(yè)部甘蔗及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試

:、

中心農(nóng)業(yè)部福建甘蔗生物學(xué)與遺傳育種重點實驗室

、。

本標準主要起草人高三基孫生仁吳小斌黃美婷傅華英王錦達張慧麗陳如凱

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T36806—2018

甘蔗桿狀病毒實時熒光

PCR檢測方法

1范圍

本標準規(guī)定了甘蔗桿狀病毒SugarcanebacilliformIMvirus和甘蔗桿狀病

IM(,SCBIMV)MO

毒SugarcanebacilliformMOvirus實時熒光檢測方法的儀器與設(shè)備試劑與材料

(,SCBMOV)PCR、、

樣品的采集與前處理檢測以及結(jié)果判斷與表述等

、。

本標準適用于可能帶有和病毒的活體寄主植物的快速檢測診斷

SCBIMVSCBMOV、。

2縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

十六烷基三甲基溴化銨

CTAB:(cetyltrimethylammoniumbromide)

值實時熒光反應(yīng)中每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

Ct:PCR,(cycle

threshold)

脫氧核糖核酸酶

DNase:(deoxyribonuclease)

乙二胺四乙酸二鈉

EDTA-Na2:(edetatedisodium)

羧基熒光素

FAM:6-(6-carboxy-fluorescein)

聚合酶鏈式反應(yīng)

PCR:(polymerasechainreaction)

核糖核酸酶

RNase:(ribonuclease)

逆轉(zhuǎn)錄酶核糖核酸酶

RT/RNaseH:/H(reversetranscriptase/RNaseH)

甘蔗桿狀病毒SugarcanebacilliformIMvirus

SCBIMV:IM()

甘蔗桿狀病毒SugarcanebacilliformMOvirus

SCBMOV:MO()

甘蔗桿狀病毒Sugarcanebacilliformvirus

SCBV:()

羧基四甲基羅丹明

TAMRA:6-(6-carboxytetramethylrhodamine)

三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽

Tris-HCl:[Tris(hydroxymethyl)aminomethanehydrochloride]

3甘蔗桿狀病毒基本信息

甘蔗桿狀病毒屬于花椰菜花葉病毒科Caulimiviridae桿狀病毒屬Badnavirus英文名

()DNA(),

稱為Sugarcanebacilliformvirus縮寫為國際病毒分類委員會于年將的

,SCBV。(ICTV)2012SCBV

個分離物正式定為甘蔗桿狀病毒SugarcanebacilliformIMvirus和甘蔗桿狀病

2IM(,SCBIMV)MO

毒SugarcanebacilliformMOvirus兩個不同的種甘蔗桿狀病毒其他信息參見附錄

(,SCBMOV)。A。

4方法原理

在比對甘蔗桿狀病毒基因組序列的基礎(chǔ)上設(shè)計一對僅在該病毒基因間保守的特異

,RT/RNaseH

性引物和一條特異性的熒光雙標記探針在實時熒光擴增反應(yīng)中探針的熒光

TaqMan。PCR,TaqMan

信號強度伴隨著目標序列

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