藥物的安全性評價試驗方法

關于藥物的安全性評價試驗方法第一頁，共四十三頁，2022年，8月28日第一節(jié)新藥急性毒性試驗急性毒性：24h內(nèi)單次或多次大劑量給予某種藥物所出現(xiàn)的有害作用。急性毒性試驗

毒性反應類型定性出現(xiàn)和消失時間可能的靶器官和死亡原因致死量定量最大給藥量半數(shù)致死量第二頁，共四十三頁，2022年，8月28日急性毒性試驗的目的和意義：1、測定藥物的半數(shù)致死量及相關參數(shù)2、通過觀察藥物急性中毒癥狀，推測藥物的毒性靶器官3、為長期毒性試驗和特殊毒性試驗提供劑量設計參考第三頁，共四十三頁，2022年，8月28日二、試驗內(nèi)容（一）半數(shù)致死量（LD50）試驗目的：觀察一次給予受試藥物后動物產(chǎn)生的毒性反應和死亡情況，計算LD50。試驗方法：1、動物：小鼠或大鼠2、動物分組：隨機原則3、劑量設計：5~6個劑量組（LD0~LD100）4、給藥途徑：兩種5、觀察時間：14天左右第四頁，共四十三頁，2022年，8月28日6、觀察指標：中毒癥狀、LD50中毒癥狀：被毛，行為學變化，情緒，神經(jīng)癥狀（震顫、痙攣、抽搐、步態(tài)不穩(wěn)等），呼吸頻率，肛門周圍有無污染，眼、鼻、口有無分泌物，體溫，體重變化等剖檢檢查：各臟器的變化等。組織切片第五頁，共四十三頁，2022年，8月28日急毒試驗常見觀察指針及可能涉及的組織、器官、系統(tǒng)第六頁，共四十三頁，2022年，8月28日LD50測定的缺陷：1、動物消耗量大，獲得的信息有限2、影響因素較多，數(shù)據(jù)重復性較差3、從安全性評價角度來看，需要的不是精確的LD50值，而是更多的毒性信息第七頁，共四十三頁，2022年，8月28日（二）最大給藥量試驗在受試藥物合理的最大容積和最高濃度條件下，單次或24h內(nèi)多次給予試驗動物不產(chǎn)生死亡的最大給藥量試驗。常用于某些低毒的藥物急性毒性試驗。第八頁，共四十三頁，2022年，8月28日（三）最大耐受量試驗單次給藥引起動物出現(xiàn)明顯的中毒反應而未發(fā)生死亡的劑量。多用于毒性較小的藥物研究第九頁，共四十三頁，2022年，8月28日試驗方法：1、動物：小鼠、大鼠、犬等2、動物數(shù)：小動物10~20只；大動物4~6只（雌雄各半）3、給藥途徑：臨床給藥途徑4、試驗對照：5、觀察時間：7~14天大體解剖

如有改變——組織切片6、結果與評價：描述動物單次大劑量給藥或在24h內(nèi)接受多次大劑量給藥后，在短期內(nèi)出現(xiàn)的與藥物相關的毒性反應，發(fā)生、發(fā)展過程提供不引起動物死亡的最大劑量。第十頁，共四十三頁，2022年，8月28日（四）固定劑量試驗不以死亡作為觀察終點，而是以明顯的毒性體征作為重點進行藥物的急性毒性評價。試驗方法：選5、50、500、2000mg/kg四個固定劑量進行試驗動物：大鼠預試：500mg/kg正式試驗：根據(jù)預試結果，從四個固定劑量中選擇一個可能產(chǎn)生明顯毒性，但不引起死亡的劑量進行試驗。觀察指標：同半數(shù)致死量試驗。第十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日固定劑量法試驗結果的評價劑量（mg/kg）試驗結果存活數(shù)<100%100%存活，毒性表現(xiàn)明顯100%存活，無明顯毒性反應5高毒（LD50<mg/kg）有毒（LD50：25~50mg/kg）用50mg/kg試驗50有毒或高毒，用5mg/kg試驗有害（LD50：200~2000mg/kg）用500mg/kg試驗500有毒或有害，用50mg/kg試驗LD50>2000mg/kg用2000mg/kg試驗2000用500mg/kg試驗該藥物無嚴重急性中毒的危險性第十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日（五）近似致死劑量試驗1、估計可能的毒性范圍2、按50%遞增法，設計出含10~20個劑量組3、測出最低致死劑量和最高非致死劑量后，用二者之間的劑量（即近似致死劑量）給一只動物第十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日三、LD50計算方法Bliss法加權概率單位法寇氏法改良寇氏法LD50=㏒-1[Xm–i(∑P–0.5)]Xm：最大劑量的對數(shù)值

i：相鄰兩組劑量對數(shù)值之差

P：各組動物死亡率，用小數(shù)表示（如死亡率為80％應寫成0.80）

∑P：各組動物死亡率之總和第十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日第二節(jié)新藥長期毒性試驗長期毒性：試驗動物連續(xù)多次接觸較大劑量的藥物所引起的中毒效應。長期毒性試驗：為觀察藥物的長期毒性而設計的毒理學試驗。又被稱為重復給藥毒性試驗。第十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日長期毒性試驗的目的1、反復多次給藥的情況下，實驗動物出現(xiàn)的毒性反應、量效關系、主要的靶器官、損害程度及其可逆性。2、獲得反復給藥情況下，實驗動物能耐收的劑量范圍及完全無毒性反應的安全范圍。第十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日一、一般原則1、試驗動物：二種（嚙齒類和非嚙齒類）動物數(shù)量、性別、年齡、敏感性2、給藥期限：一般為臨床療程的3~4倍時間創(chuàng)新藥品試驗周期不少于90天3、劑量選擇：高中低三個組高劑量組：能充分反映藥物的毒性，但不能造成太多動物死亡。低劑量組：無毒。第十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日4、給藥方法：最好與臨床給藥途徑一致5、觀察途徑：日常觀察（生長率、食耗、一般觀察等）測定指標：器官重量、血液學變化、血液生化學指標第十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日二、檢測項目1、日常觀察：一般指標：被毛、皮膚、眼睛、呼吸、行為活動、病理檢查等。生長率食耗2、測定指標血液學指標（紅細胞、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、白細胞總數(shù)級分類、血小板等）

血液生化指標（天門冬氨酸氨基轉換酶、

丙氨酸氨酸氨基轉換酶、堿性磷酸酶、尿酸氮

、總蛋白、白蛋白、血糖、

總膽紅素、肌酐、

總膽固醇）

器官重量第十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日三、檢測指標的時間（一）檢查間隔一般癥狀：每天觀察記錄測定指標：定期檢查（二）恢復期觀察最后一次給受試藥物后，部分動物進行活殺檢測各項指標，留下約1/3~1/4動物進行恢復期觀察?；謴推谟^察目的：了解毒性反應的可逆性和可能出現(xiàn)的延遲性毒性。第二十頁，共四十三頁，2022年，8月28日四、結果評價1、試驗結果數(shù)據(jù)應進行統(tǒng)計學處理2、根據(jù)實驗目的，結合觀察到的毒性表現(xiàn)作出恰當?shù)脑u價3、通過實驗結果確定毒性靶器官和毒性表現(xiàn)4、可結合其他試驗同時觀察第二十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日第三節(jié)制劑的全身毒性試驗一、靜脈注射制劑的全身毒性試驗1、血管刺激性試驗目的：觀察受試靜脈注射制劑經(jīng)多次給藥后對血管刺激反應情況。試驗方法：動物：家兔分組：試驗組、空白對照組給藥方法：多次靜脈注射觀察指標：肉眼觀察病理切片第二十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日2、體外溶血試驗目的：觀察靜脈注射劑是否能引起溶血現(xiàn)象。試驗方法：（1）制備2%紅細胞懸液（2）加樣（3）保溫（4）結果觀察全溶血：溶液澄明，紅色，管底無紅細胞殘留部分溶血：溶液澄明，紅色或棕色，管底有少量紅細胞殘留不溶血：紅細胞全部下沉，上層液體無色透明。鏡檢紅細胞不凝集。第二十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日3、過敏性試驗（致敏試驗）目的：觀察受試藥物經(jīng)注射給藥后有無過敏反應。試驗方法：動物：豚鼠分組：3組（給藥組、空白對照組、陽性致敏組）給藥方法：腹腔注射結果觀察：過敏性反應（痙攣、呼吸困難、皮疹等）第二十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日熱源：微生物產(chǎn)生的能引起人及恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)，主要是革蘭氏陰性菌細胞壁分離出來的內(nèi)毒素。4、熱原試驗第二十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日目的：將受試藥靜脈注射給予家兔，觀察家兔體溫升高情況，以判定藥物是否具有致熱作用。試驗方法：動物：家兔給藥方法：耳緣靜脈注射觀察指標：體溫第二十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日一般藥理學評價評價新藥在擬推薦臨床使用劑量下對重要的生命活動（如心血管系統(tǒng)功能、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能、呼吸系統(tǒng)功能、胃腸道功能、內(nèi)分泌功能、外周神經(jīng)功能、尤其是體液傳遞機制及其神經(jīng)沖動和骨骼肌功能等）的影響的研究，以預期用于臨床防治疾病主要目的以外的其它廣泛的藥理作用，從而達到基本認識全身用藥對機體主要器官系統(tǒng)影響的目的。第二十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日一般藥理學評價的基本要求1、精神神經(jīng)系統(tǒng)常用動物：小鼠觀察指標：行為學變化、對神經(jīng)系統(tǒng)的興奮或抑制作用。第二十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日2、心血管系統(tǒng)常用動物：大鼠、犬、貓等觀察指標：血壓、心率、心電、血流動力學變化等第二十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日3、呼吸系統(tǒng)常用動物：犬、貓等大動物觀察指標：呼吸頻率、呼吸深度、呼吸類型等。第三十頁，共四十三頁，2022年，8月28日局部用藥的毒性試驗是根據(jù)局部用藥部位的解剖和生理特點設計的。

涂劑、擦劑皮膚用藥膏劑、凝膠劑

其他透皮吸收制劑常用局部用藥制劑滴眼劑、滴鼻劑噴霧劑、肌內(nèi)注射直腸和陰道制劑第十九章局部用藥的毒性研究第三十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日第一節(jié)皮膚用藥的毒性試驗一、皮膚的組織結構皮膚由表皮、真皮及皮下組織等構成皮膚覆蓋全身。表皮較薄，厚為。角質(zhì)層表皮顆粒層生發(fā)層真皮依附于皮下組織，厚約2mm。膠原真皮彈性硬蛋白纖維母細胞第三十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日二、化學物質(zhì)對皮膚毒性作用的類型（一）皮膚原發(fā)性刺激指藥物直接作用于皮膚引起的病理學反應。原發(fā)性刺激的表現(xiàn)：紅斑、水腫、水皰疹、潰瘍、蕁麻疹等作用機理：1、直接刺激作用2、使皮膚表面蛋白質(zhì)變性藥物：強酸、強堿、強氧化劑、重金屬等第三十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日（二）皮膚致敏作用機理：變態(tài)反應藥物：抗生素、非甾體類抗炎藥、局麻藥、消毒藥等（三）皮膚致癌第三十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日三、皮膚用藥毒性試驗（一）急性毒性試驗1、試驗目的：觀察動物完整皮膚及破損皮膚短期內(nèi)接觸受試藥物所產(chǎn)生的毒性反應。2、試驗材料（1）動物：成年健康家兔、豚鼠、大鼠（2）藥物制劑：膏劑、液體制劑、粉末3、試驗方法（1）劑量：3個劑量組（2）給藥途徑：將藥物均勻涂布于動物背部皮膚（經(jīng)脫毛處理）（3）觀察指標：全身反應、死亡情況、各系統(tǒng)變化、剖檢變化第三十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日（二）皮膚用藥長期毒性試驗1、試驗目的：觀察動物皮膚長期接觸受試藥物，經(jīng)皮膚滲透或吸收后對機體產(chǎn)生的異常反應及其可逆程度。2、試驗材料（1）動物：成年健康家兔、豚鼠、小鼠（2）受試藥物：膏劑、液體制劑、粉末3、試驗方法（1）劑量：3個劑量組（2）給藥途徑：將藥物均勻涂布于動物背部脫毛區(qū)，每日一次，每次至少接觸6小時（3）觀察指標：全身反應第三十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日第二節(jié)眼睛用藥刺激性試驗1、試驗目的：觀察動物眼睛接觸受試藥物產(chǎn)生的刺激反應情況。2、試驗材料（1）動物：成年健康家兔（2）受試藥物：原液或原3、試驗方法（1）試驗分組：1個劑量組，1個對照組（2）給藥方案：將藥物滴入或涂敷于動物一側眼結膜囊內(nèi)，另一側作為對照。（3）觀察指標：6、24、48、72h、7d觀察眼部反應情況（具體觀察評分方式見書177頁）第三十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日第三節(jié)肌肉注射用藥局部刺激性試驗試驗目的：觀察藥物肌內(nèi)注射后是否具有局部刺激作